地中海贫血基因检测新进展

６３８　地中海贫血基因检测新进展　王朔桂　（广西南宁市红十字会医院检验科，南宁市【关键词ｌ地中海贫血；基因检测；综述　５３００１２）　【中图分类号】Ｒ　４４６．９　【文献标识码】Ａ　【文章编号】１６７３－７７６８（２０１３）０６－０６３８－０３　２基因测序技术　地中海贫血（简称地贫）是一组遗传性疾病。其发病机　制是合成血红蛋白的珠蛋白链减少或缺失导致血红蛋白结　构异常，这种含有异常血红蛋白的红细胞变形性降低，寿命　缩短，可以提前被人体的肝脾等破坏，导致患者贫血甚至发　育等异常。通常将地贫分为仪、ｐ、　和８等４种类型，其中　以８和Ｏ／．地贫较为常见。地贫患儿的出生给社会和家庭带　来极大的经济和精神负担。目前临床上已有多种地贫的基　因检测方法，这些方法有各自的优势和不足，本文就近年来　地贫的基因检测技术发展状况综述如下。　１聚合酶链式反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　Ｃｈａｉｎ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ。ＰＣＲ）技术　ＰＣＲ是用于放大特定的ＤＮＡ片段的分子生物学技术，　可在生物体外进行ＤＮＡ复制　０　。ＰＣＲ技术在地贫的基因　诊断中已得到广泛的应用，并衍生出多种类型ＰＣＲ检测方　法，极大地提高了地贫的诊断准确率　’。最新的ＰＣＲ技术　有：（１）多重荧光定量ＰＣＲ技术：彭建明等　采用多重荧光　定量ＰＣＲ体系检测３００份标本，其中１５０份为　地贫标本，　１００份基因型为ａｏＪ＇ａｏｔ的正常样本，５０份为Ｂ地贫标本。　结果显示多重荧光定量ＰＣＲ在１５０份　地贫样本及１００份　正常样本的检测结果与ｇａｐ—ＰＣＲ符合率均达到１００％，　５０份Ｂ地贫标本，有４９份检测结果与ｇａｐ．ＰＣＲ一致。　（２）单管多重ＰＣＲ结合ＲＤＢ技术：肖奇志等　对７３份　．地贫产前诊断的标本分别采用针对中国人３种常见缺失　型ａ一地贫突变的单管多重ｇａｐ—ＰＣＲ技术和针对常见３种非　缺失ａ－地贫点突变的ＲＤＢ法进行分析，根据单管多重ＰＣＲ　技术扩增产物电泳图谱和ＲＤＢ膜条上显色的斑点分别判　断某一份标本缺失型和非缺失ａ－地贫的突变类型，并与引　产或出生后胎儿脐带血中ＨｂＢａｒｔ　Ｓ定量结果进行比对。结　果表明ａ一地贫产前诊断结果与胎儿脐带血电泳结果完全吻　合。（３）基因特异性ＰＣＲ．熔解曲线分析技术：张银汉等　应用多重等位基因特异性ＰＣＲ一熔解曲线分析快速定型　Ｂ珠蛋白基因突变，他们在反应体系中加入新型荧光染料　ＬＣ　Ｇｒｅｅｎ进行实时荧光聚合酶链反应，反应结束后，以　０．１　ｏＣ／ｓ变化速度从６０℃至９５℃每隔３　Ｓ记录１次荧光值，　获得熔解曲线，根据得到的熔解曲线和Ｔｍ值分析定型　Ｂ地贫的ＣＤ４１－４２、ＩＶＳ　２ｎｔ６５４、ＣＤ１７、ＣＤ７１＿７２四种等位基　因突变。结果显示该技术具有自动化程度高、不需荧光标　记探针、成本低、易质控、防污染、高通量等优点。　基因测序是指ＰＣＲ产物经过克隆后或直接对ＰＣＲ产　物进行所有基因突变检测，该方法不仅可以确定突变部位，　还可以确定突变性质，具有高通量、灵敏度高等优点，故基　因序列测定法常用作突变检验中验证、确认以及新基因鉴　定的标准方法　。叶国永等　采用多重连接探针扩增　（ＭＬＰＡ）技术和基因技术联合检测１００份疑似地贫基因缺　陷血样。结果成功检测出Ｂ合并ａ地贫双重杂合，其中　Ｂ地贫中４１－４２杂合子基因型占５３．５７％，ｐ合并　地贫双　重杂合子占２８．６％，ａｌ地贫中ＳＥＡ／ａａ基因型占９６．９％。　因此认为联合应用ＭＬＰＡ技术、ＰＣＲ技术和基因技术，可以　提高地贫基因缺陷检测的准确率。宋春林等　对怀疑　Ｂ地贫的患者行反向点杂交检测常见的ｌ７种突变，对未发　现突变的患者采用直接基因测序，确证是否携带Ｂ地贫稀　有突变，对同时携带稀有Ｂ地贫基因突变的夫妇取孕妇脐　血或行羊水产前基因诊断。其结果显示联合反向点杂交和　直接基因测序技术可为携带稀有Ｂ地贫基因突变的夫妇提　供产前基因诊断。但是基因序列测定法操作繁琐，所需仪　器设备昂贵，极大地限制了其在临床诊断中的应用　。　３高分辨熔解曲线分析（Ｈｉｇｈ—ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｍｅｈｉｎｇ，ＨＲＭ）　技术　ＨＲＭ技术即高分辨熔解曲线分析技术，其特点是高特　异性和高灵敏度，检测灵敏度可达到０．１～１．０。在大样本、　多突变位点筛查上，比传统非均一性方法更方便、性价比更　高，相比定量探针法突变分析和其他类型快速突变分析法，　应用面更广，成本更低，因而成为近年来国外新兴的遗传　学、方法学研究和应用热点　’”　。李茹等－－　应用高分辨熔　解曲线分析技术检测中国人常见Ｂ地贫基因突变。对　４８例正常对照的ＨＲＭ分析显示，在ＨＢＢ基因的突变筛查　区域存在两个常见ＳＮＰｓ；在验证实验中，对３７例已知基因　型患者的ＨＲＭ分析显示，所有突变均得到正确检测且每种　基因型都有其独特的熔解曲线；在双盲实验中，对７０份未　知样本的ＨＲＭ分析共检出２８个异常熔解曲线，与结果完　全一致，ＨＲＭ检测的灵敏度和特异性均为１００％。余玲玲　等　建立基于ＨＲＭ技术快速筛查６一地贫基因突变的方　法，之后他们选取温州地区人群Ｂ．地贫常见基因突变位点　ＩＶＳ－２－６５４（Ｃ＞Ｔ）与－２８（Ａ＞Ｇ）作为研究位点，采用ＴＡ克　内斟　２０１３年１２月　第８卷第６期　６３９　隆技术构建其质粒ＤＮＡ作为模板或基因分型对照，建立基　于ＨＲＭ技术检测Ｂ．地贫基因突变的方法。结果显示　５．４突变扩增系统（ＡＲＭＳ）法该方法是采用ＰＣＲ法，通　过琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ产物扩增带的有无判断突变　１１７份临床疑似Ｂ一地贫患者样本经该法检测，４５份为　ＩＶＳｏ２－６５４（Ｃ＞Ｔ）杂合突变型，９份为－２８（Ａ＞Ｇ）杂合突变　型，未发现２个位点的纯合突变型基因，此结果与直接所得　是否存在。其优点为省时、经济、简便，１次ＰＣＲ电泳后即　可观察结果，缺点是不能一次性检测多突变位点。　Ｓａｌｅｈｉ等　报道使用ＡＲＭＳ法可以一次性检测出１４种常　基因型结果完全一致。　４高效液相色谱法（ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａ－　ｐｈｙ。ＨＰＬＣ）　近年来迅速发展的ＨＰＬＣ是一种新型基因突变筛查和　检测技术，能自动化、高通量进行检测，除ＰＣＲ之外，不需　进行ＰＣＲ引物修饰、购买特殊试剂、检测标志信号或其他　的样品处理¨　．　Ｉ７ｌ。郑琳等ｎ引以地贫基因检测结果为金标　准，评价ＨＰＬＣ在福建地区Ｂ一地贫临床诊断中的应用价值。　他们采用ＨＰＬＣ法测定了３０８例患者血红蛋白亚型ＨｂＡ２　含量。结果显示ＨＰＬＣ系统筛查Ｂ一地贫的灵敏度为　９９．２％，特异性为９６．２％，准确度为９８．３％，阳性预测值为　９８．４％，阴性预测值为９８．１％。贾兴元等　进行了双重　ＰＣＲ结合ＨＰＬＣ分析，联合改进型一管ＰＣＲ结合ＨＰＬＣ方　法，对１６０份临床标本中　珠蛋白基因的３种常见点突变　与３种缺失进行检测。检测结果与临床现行方法相符。ｉ身｛　建红等‘驯采用ＨＰＬＣ检测各种异常血红蛋白患者６２９７例。　结果共发现６８例患者中１１种异常血红蛋白，分别为血红　蛋白（Ｈｂ）Ｅ　３７例、ＨｂＱ　１０例、Ｈｈｓ３例、ＨｂＤ—Ｉｒａｎ　４例、　ＨｂＭａｎｉｔｏｂａ　４例、ＨｂＪ—Ｂａｎｇｋｏｋ　５例、Ｈｂｃ　１例、ＨｂＬｅｐｏｒｅ　１例、ＨｂＪ．Ｍｅｘｉｃｏ　１例、ＨｂＯｓｕ—Ｃｈｒｉｓｔｉａｎｓｂｏｒｇ　１例和ＨｂＫｓｌｎ　１例。　５其他技术　５．１　Ｔａｑｍａｎ－ＭＧＢ探针技术　陈文强等　对２００例患者　进行Ｔａｑｍａｎ—ＭＧＢ探针法检测ＨｂＷｅｓｔｍｅａｄ突变，并用基因　法进行验证。结果共检测出１２例ＨｂＷｅｓｔｍｅａｄ突变基因携　带者，Ｔａｑｍａｎ．ＭＧＢ探针法检测结果和基因法检测结果相　符。　５．２血红蛋白电泳联合基因诊断赵华等　应用醋酸纤　维薄膜电泳对１００例小细胞低色素贫血患者进行血红蛋白　电泳分析。结果发现４７例患者经血红蛋白电泳定量检测　为Ｂ－地贫表型阳性，其中２２例为ｐ－地贫，阳性率为４６．８％，　检出５种突变基因。　５．３肽核酸夹技术黄肯等　利用肽核酸夹提高孕妇血　浆胎儿父源性Ｂ珠蛋白突变基因的检出率。他们选择妊娠　７～２０周的孕妇共３８例，丈夫基因型为４１－４２Ｍ／Ｎ，而孕妇　基因型正常或为其他Ｂ地贫基因突变。以羊水、脐带血或　出生后婴ＪＬ￣ｔ－周血标本的检测结果作为金标准对照。结果　显示利用肽核酸夹对孕妇外周血浆中小片段游离胎儿ＤＮＡ　检测胎儿父源性Ｂ．珠蛋白基因突变，具有较高的敏感度、特　异度和准确度的特点。　见Ｏ珠蛋白生成障碍性贫血突变位点，但目前ＡＲＭ法还不　能代替反向斑点膜杂交法应用于临床珠蛋白生成障碍性贫　血基因突变检测。　综上所述，近年来临床上涌现了多种地贫基因检测技　术，这些技术均能极大提高地贫患者的基因检测水平，从而　在地贫患者筛查、确诊、遗传咨询、产前诊断等方面发挥重　要作用。　参考文献　［１］Ｑａｄａｈ　Ｔ，Ｆｉｎｌａｙｓｏｎ　Ｊ，Ｎｅｗｂｏｕｎｄ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｔｏｏｌ　ｔｏ　ａｓｓｅｓｓ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｒｅｌｅｖａｎｃｅ　ｏｆ　ａｌｐｈａ—ｇｌｏｂｉｎ　ＤＮＡ　ｖａｒｉａｎｔｓ［Ｊ］．Ｐａｔｈｏｌｏ—　ｇＹ，２０１２，４４（４）：３３７—４１．　［２］　Ｒａｈｉｍｉ　Ｚ，Ｍｕｎｉｚ　Ａ，Ｐａｒｓｉａｎ　Ａ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ　ｍｕｔａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｂｅｔａ　ｔｂａｌａｓｓｅｍｉａ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｋｅｒｍａｎｓｈａｈ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　ｏｆ　Ｉｒａｎ　ｕｓｉｎｇ　ＰＣＲ—　ｂａｓｅｄ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　Ｒｅｐ，２０１０，３７（１）：１４９—１５４．　［３］Ｈｕｎｇ　ＣＣ，Ｃｈｅｎ　ＳＵ，Ｌｉｎ　ｓＹ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｅｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉａｇｎｏ　ｓｉｓ　ｏｆ　ｂｅｔａ－－ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ　ｕｓｉｎｇ　ｒｅａｌ－－ｔｉｍｅ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｒｅｓｏｎａｎｃｅ　ｅｎｅｒｇｙ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｈｙ　ｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ｐｒｏｂｅｓ［Ｊ］．Ａ—　ｎａｌ　ｇｉｏｃｈｅｍ，２０１０，４００（１）：６９—７７．　［４］彭建明，陈艳玲，官燕飞，等．多重荧光定量ＰＣＲ快速检测缺失　型ＯＬ地贫［Ｊ］．广东医学，２０１３，３４（８）：１１９５—１１９６．　［５］　肖奇志，周玉球，张永良，等．单管多重ＰＣＲ结合ＲＤＢ技术在ａ一　地贫产前诊断中的应用［Ｊ］．国际检验医学杂志，２０１２，３３（３）：　２７１—２７３．　［６］张银汉，李建新，喻晶，等．多重等位基因特异性ＰＣＲ一熔解曲　线分析快速定型Ｂ珠蛋白基因突变［Ｊ］．中国优生与遗传杂志，　２０１１，１９（１２）：１７—１８．　［７］Ｉ．ｉｕ　Ｊ，Ｊｉａ　Ｘ，Ｔａｎｇ　Ｎ，ｅｔ　ａ１．Ｎｏｖｅｌ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｆｏｒ　ｒａｐｉｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆａｌ—　ｐｈａ—ｇｌｏｂｉｎ　ｇｅｎｅ　ｍｕｔａｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｄｅｌｅｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｌ　Ｒｅｓ，２０１０，１　５５（３）：１４８—１５５．　［８］　Ｎｅｚｈａｔ　Ｎ，Ａｋｂａｒｉ　ＭＴ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｅｌｅｔｉｏｎｓ／ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｄ－ｇｌｏｂｉｎ　ｇｅｎｅ　ｃｌｕｓｔｅｒ　ｂｙ　ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ　ｌｉｇａｔｉｏｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｐｒｏｂｅ　ａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．　Ｇｅｎｅｔ　Ｔｅｓｔ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ，２０１２，１６（７）：６８４—６８８．　［９］　叶国永，张莉，黄国珍，等．ＭＬＰＡ与基因技术检测联用检测地　贫基因缺陷分析［Ｊ］．中国当代医药，２０１２，１９（２４）：９０—９１．　［１Ｏ］宋春林，范菊花，陈淑芬，等．基因测序在Ｂ地贫稀有突变患者产　前诊断中的应用［Ｊ］．中国当代医药，２０１０，１７（７）：１５—１７．　［１１］郭华，蓝慧娟，熊礼宽．珠蛋白生成障碍性贫血基因检测技术　的研究进展［Ｊ］．国际检验医学杂志，２０１１，３２（１）：１０９０—１０９２．　［１２］Ｌｉ　Ｒ，Ｌｉａｏ　Ｃ，Ｌｉ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｈｉｇｈ—ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ　ｍｅｌｔｉｎｇ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｃｏｍｍｏｎ　ｎｏｎｄｅｌｅｔｉｏｎａｌ　Ｏｔ－－ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ　ｍｕｔａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｈｉ　ｎｅｓｅ　ｐｏｐｕ－　－ｌａｔｉｏｎ．ＨＢｓ　ｃｏｎｓｔａｎｔ　ｓｐｒｉｎｇ，ｑｕｏｎｇ　ｓｚｅ　ａｎｄ　ｗｅｓｔｍｅａｄ［Ｊ］．Ｈｅｍｏｇｌｏ—　ｂｉｎ，２０１０，３４（６）：５８７—５９３．　［１３］Ｓｉｒｉｅｈｏｔｉｙａｋｕｌ　Ｓ，Ｗａｎａｐｉｒａｋ　Ｃ，Ｓａｅｔｕｎｇ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｈｉｓｈ　ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ　ＤＮＡ　ｍｅｌｔｉｎｇ　ａｎａｌｙｓｉｓ：ａｎ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｐｒｅｎａｔａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｔｈａｌｓａｓｅｍｉａ　［Ｊ］．Ｐｒｅｎａｔ　Ｄｉａｇｎ，２０１０，３０（４）：３４８—３５１．　（下转第６１６页）　６１６　ＩｎｔｅｒｎａｌＭｅｄ＇ｗｉｎｅ。，ＣｈｉｎａＤｅｃ．２０１３．Ｖｏ／．８．，Ｎｏ．６　．也可见于成人，但较少见　，本组发生于１８岁以上的成人　４例，占１２．１２％（４／３３）。发生部位以直肠、乙状结肠居多，　癌倾向于低分化或黏液性，已有幼年性息肉恶变的报道　。　本组患者未见恶性病变，但１例多发者伴有轻度不典型增　生，提示该病具有恶变的潜在危险胜，建议定期复查　。　该病的诊断主要根据病理检查，一般情况下诊断并不　本组占８１．８１％（２７／３３），与文献　报道基本相似。该病多　为单发有蒂或亚蒂息肉，本组单发３２例，占９６．９７％　（３２／３３）；全部息肉均有蒂或亚蒂，表面色暗红，常有浅表溃　疡形成。本组３３例患者中息肉表面充血糜烂或有溃疡者　２６例，占７８．７９％（２６／３３），出血为患者临床上常见的症状。　难，但有些局部病灶，由于黏液分泌过多，呈囊状扩张的腺　管上皮被破坏消失，杯状细胞被挤压等，可形成类似胶样癌　的组织相，此时要注意预防误诊。该病的治疗首选内镜下　电凝切除，其简便、安全及微创已得到公认　。　参包薛郁，黄洁，赵病理组织学检查显示，息肉表现为分化良好而大小不规则　的腺体，有的形成囊性扩张，贮有液体，故称为潴留性息肉。　可伴发急性炎症，或者形成表面溃疡，以无痛性血便为主要　临床表现，本组有血便者占６６．６７％（２２／３３），与文献报道　较相似。　考文献　锐，等．成年人大肠幼年性息肉临床病理分　析［Ｊ］．肿瘤预防与治疗，２０１０，２３（５）：４１９．　娟，杨菱芳，盛伟松，等．ｄ，ＪＬ息肉内镜治疗：附５８４例临床　分析［Ｊ］．临床儿科杂志，２０００，１８（３）：１５２—１５４．　陈村龙，方国存，张月彩，等．幼年性息肉癌变３例［Ｊ］．实用医学　杂志，２００１，１７（６）：５２０．　该病的发病原因尚未完全清楚，可能与多种因素有关，　如①饮食因素：饮食因素与幼年型直肠息肉的形成有一定　关系，特别是细菌和胆酸相互作用，可能是息肉形成的基　础；②遗传因素：一般认为，息肉形成与基因突变和遗传因　素有密切关系，目前研究情况表明，突变基因可以由父母遗　传给后代子女，在遗传机会上男女是均等的，没有性别的差　谭郁彬，张乃鑫，主编．外科诊断病理学［Ｍ］．天津：天津科学技　术出版社，２０００：４９４—４９５．　…　异。③炎症刺激：直肠黏膜长期被炎症刺激，可引起肠黏膜　幼年型直肠息肉，这是由于肠黏膜的炎症充血水肿，糜烂溃　疡愈合之后，导致瘢痕逐渐收缩，形成息肉状，又由于慢性　陈芝兰，楼焕进，朱冬春，等．成人大肠幼年性息肉２５例内镜特　点分析［Ｊ］．临床内科杂志，２００５，２２（４）：２８０．　白青山，韩明子，金世柱，等．成人潴留性息肉ｌ例分析［Ｊ］．胃肠　病学和肝病学杂志，２０１３，２２（１）：５６．　季峰，陈岳亮，孙燕，等．６５例成人大肠幼年性息肉的内镜　特点及病理分析［Ｊ］．中华消化内镜杂志，２００４，２１（６）：４１８—　４１９．　炎症刺激，致腺体阻塞，黏液储留而发病。④粪便、异物刺　激和机械性损伤：粪便粗渣和异物长期刺激肠黏膜。　有人认为潴留性息肉是大肠黏膜炎性增生的结果，也　有人认为是真性肿瘤，对于是否会恶变尚无定论。部分报　蔡芳钦，钟碧慧，王锦辉，等．大肠幼年性息肉及息肉病６６例分　析［Ｊ］．新医学，２００６，３７（８）：５１８—５１９．　巢齐常，孙晓滨，农春燕，等．幼年性息肉１２例回顾分析［Ｊ］．四　川医学，２００６，２７（１２）：１２５７．　（收稿日期：２０１３—１０－０８修回日期：２０１３—１１—１７）　道认为有恶变可能，其恶变过程推测为幼年性息肉一腺瘤　一癌；存在于潴留性息肉中的腺瘤，通过潴留性息肉腺体的　异型增生恶变成结直肠癌的可能性更大，所形成的结直肠　（上接第６３９页）　［１４］李茹，廖灿，李东至，等．高分辨熔解曲线分析技术检测中国　人常见Ｂ地贫基因突变［Ｊ］．中国优生与遗传杂志，２０１１，　ｌ９（７）：１９—２１．　和东南亚人群常见缺失与突变型ｏｔ－地贫［Ｊ］．中华医学遗传学　杂志，２０１１，２８（６）：６７０—６７４．　［２０］谢建红，汪国庆，肖奇志．等．高效液相色谱法在异常血红蛋白病　筛查中的应用［Ｊ］．中华生物医学＝＝ｒ　程杂志，２０１２，１８（６）：４７３—　４７６．　［１５］余玲玲，田可港，冯晶晶，等．ＨＲＭ技术检测Ｂ一地贫ＩＶＳ－２－６５４（Ｃ　＞Ｔ）：与．２８（Ａ＞Ｇ）：突变方法的建立及初步应用［Ｊ］．中华检　验医学杂志，２０１２，３５（８）：７３０—７３５．　［１６］Ｐｒａｊａｎｔａｓｅｎ　Ｔ，Ｆｕｅｈａｒｏｅｎ　Ｓ，Ｆｕｃｈａｒｏｅｎ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｅｎａｔａｌ　ａｎｄ　ｐｏｓｔ—　ｎａｔａｌ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　８－ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ　ａｎｄ　ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ　Ｅ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　Ｔｈａｉｌａｎｄ　［２１］陈文强，陈萍，庞丽红，等．应用Ｔａｑｍａｎ—ＭＧＢ探针法检测地贫　ＨｂＷｅｓｔｍｅａｄ突变［Ｊ］．重庆医学，２０１２，４１（３２）：３４０８—３４０９，　３４１１．　［２２］赵［２３］黄华，李代渝，何婧菁．血红蛋白电泳及ＰＣＲ一反向斑点杂交法　肯，潘红飞．肽核酸夹提高孕妇血浆胎儿父源性Ｂ珠蛋白突　ｕｓｉｎｇ　ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　Ｒｅｐ，２０１３，４０（４）：３１７３—３１７９．　诊断Ｂ　地贫［Ｊ］．泸州医学院学报，２０１２，３５（３）：２９１—２９３．　变基因检出率的研究［Ｊ］．中华血液学杂志，２０１３，３４（３）：２３３—　２３６．　［１７］Ｌｉ　Ｑ，Ｌｉ　ＬＹ，Ｈｕａｎｇ　ＳＷ，ｅｔ　ａ１．Ｒａｐｉｄ　ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ　ｏｆ　ｋｎｏｗｎ　ｍｕｔａｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ　ｉｎ　ｂｅｔａ－ｇｌｏｂｉｎ　ｇｅｎｅ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ＤＨＰＬＣ　ｐｒｏｆｉｌｅ　ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｏｆ　ｈｏｍｏｄｕｐｌｅｘｅｓ　ａｎｄ　ｈｅｔｅｒｏｄｕｐｌｅｘｅｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｂｉｏｅｈｅｍ，　２００８，４１（９）：６８１—６８７．　［２４］Ｓａｌｅｈｉ　Ｒ，Ｆｉｓｈｅｒ　ＣＡ，Ｂｉｇｎｅｌｌ　ＰＡ，ｅｔ　ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｅａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｎｏｖｅｌ　ｍｕｔａｔｉｏｎｓ［４１（Ａ＞Ｃ），ｃｏｄｏｎ　２４（一Ｇ），ａｎｄ　ＩＶＳ—Ｉ一１０９（一Ｔ）］，ｉｎ　ａ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｂｅｔａ．ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ　ａｌｌｅｌｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｉｓｆａｈａｎ　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　Ｉｒａｎ［Ｊ］．　Ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ，２０１０，３４（１）：１１５—１２０．　［１８］郑琳，黄海龙，范向群，等．高效液相色谱技术检测Ｂ一地贫的临　床价值探讨［Ｊ］．中国妇幼保健，２０１１，２６（１１）：１６６５—１６６６．　［１９］贾兴元，卫小静，唐宁，等．变性高效液相色谱法检测中国南方　（收稿日期：２０１３．１０－１３修回日期：２０１３．１２－０５）