DTT是否既能激活一些酶又能使一些酶失活,为什么?
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发布时间：2022-04-22 19:38
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时间：2023-10-26 12:43
二硫苏糖醇（Dithiothreitol，简称为DTT）
CAS号 3483-12-3
PubChem 446094
SMILES SC[C@@H](O)[C@H](O)CS
DTT是一种小分子有机还原剂。其还原状态下为线性分子，被氧化后变为包含二硫键的六元环状结构。二硫苏糖醇的名字衍生自苏糖（一种四碳单糖）。DTT的异构体为Dithioerythritol（DTE），即DTT的氧化结构。
DTT是一种很强的还原剂，其还原性很大程度上是由于其氧化状态六元环（含二硫键）的构象稳定性。它的氧化还原电势在pH为7时为-0.33伏。二硫苏糖醇对一个典型的二硫键的还原是由两步连续的巯基-二硫键交换反应所组成。
其中，第一步反应所形成的中间态很不稳定，因为DTT上的第二个巯基趋向于与被氧化的硫原子连接，使中间态很快被转化为DTT的环状氧化结构，从而完成对二硫键的还原。
DTT的还原力受pH值的影响，只在pH值大于7的情况下能够发挥还原作用。这是因为只有脱去质子的硫醇盐负离子（-S–）才具有反应活性，硫醇（-SH）则没有；而巯基的pKa一般为～8.3。
DTT的用途之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体，特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验（如DNA在生物感应器中的固定）的效率；而在DNA溶液中加入DTT，反应一段时间后除去，就可以降低DNA的二聚化。
DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键(能够保护正常晶体蛋白所含的半胱氨酸等成分不受氧化修饰，减少其变性可能性)。但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性（高温加热或加入变性剂，如6M 盐酸胍、8M 尿素或1% SDS）。反之，根据DTT存在情况下，二硫键还原速度的不同，可以判断其包埋程度的深浅。
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巯基保护试剂如DTT、巯基乙醇对酶活力有显著的激活作用，但是同时DTT可以逆转激活作用,因为它同时也是蛋白质变性剂，破坏二硫键。变性目的蛋白,破坏二硫键能帮助打开蛋白质的二硫键，使待分析的蛋白质分离成为单一的蛋白亚基。DTT是一种硫醇还原剂，当其浓度达到50mM时可促进大多数蛋白的半胱氨酸残基被还原。
