杂交分子杂交的类型

发布网友 发布时间：2024-10-24 07:26

我来回答

共1个回答

热心网友 时间：2024-10-27 20:12

杂交分子技术在核酸探针分类中有多种类型，主要分为放射性探针与非放射性探针。放射性探针包括DNA探针（如双/单链DNA，针对细菌/人类基因等）和RNA探针，而cDNA探针则是通过逆转录酶合成，用于基因克隆和表达。

DNA探针因其持久性和标记方法的多样性而常用，如AMV逆转录酶合成的cDNA探针，常用于基因组DNA文库筛选。然而，真核与原核基因DNA结构不同，cDNA探针检测基因表达效率相对较低。体外转录技术如PSP和PGEM载体有助于生成同义或反义RNA探针，适用于基因转录研究。

寡核苷酸探针，如寡核苷酸，因其短小、序列简单在序列未知时具有优势，但识别变异能力有限，适合病原体检测而非点突变检测。选择特异寡核苷酸探针时需注意长度、碱基组成、无互补区、重复碱基以及与核酸库的同源性等原则。

探针标记和杂交条件优化至关重要，如通过比较特异和非特异杂交信号确定最佳温度。标记方法包括缺口平移、快速末端标记、T4多核苷酸激酶标记等，非放射性标记如生物素和荧光染料逐渐替代了放射性同位素标记，以降低辐射风险。

在固相核酸杂交中，如斑点杂交和Southern印迹，DNA变性、预杂交、杂交、洗涤和结果显示（非放射性或放射性自显影）是关键步骤。液相杂交如液闪计数法则通过膜处理、加入闪烁液和液体闪烁计数器测定放射性强度，适用于信号强度比较。

分子杂交技术（molecular hybridization）是在研究DNA分子复性变化基础上发展起来的一种技术。其原理是，具有互补核苷酸序列的两条单链核苷酸分子片段，在适当条件下，通过氢键结合，形成DNA-DNA，DNA-RNA或RNA-RNA杂交的双链分子。这种技术可用来测定单链分子核苷酸序列间是否具有互补关系。