转染前一天(24h左右)胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染时汇合度为70～90％. 转染前1h，将细胞培养基更换为Opti—MEM或者DMEM基础培养基（若使用Opti-MEM，PEI转染效果更佳）.
用一定体积的Opti—MEM稀释质粒，小心混匀，记为A液;用相等体积的Opti-MEM稀释PEI，小心混匀，记为B液（质粒:PEI=1：2，W/W),室温静止5min.
将B液缓慢加到A液中并混匀,最好使用旋涡振荡器边加边震荡。然后室温放置20min. 将DNA-PEI混合液缓慢加入到细胞培养基中,轻轻混匀。 转染4h后更换为完全培养基。 培养皿面积（cm2） 转染DNA量(ug) 稀释DNA/PEI的培养基体积（ul） 96孔板 48孔板 24孔板 12孔板 6孔板 6cm平板 10cm平板 15cm平板 0。32 1.1 1.9 3.5 9。6 21.5 56.7 147 0。2 0。5 0.8 1。6 4 8 16 32 25 35 50 100 250 500 1000 2000
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