寡核苷酸探针原位杂交操作流程-细胞爬片
一、 材料准备：
1.细胞爬片:细胞爬片经固定液-4%多聚甲醛/0.1 M PBS（PH7.0-7.6），含有1/1000 DEPC，固定15min。经无水乙醇、95%、85%和75%乙醇各2min脱水。
2. 探针: 多聚寡核苷酸探针-FITC 2ug/ml
二、 FISH操作流程
1. 暴露mRNA 核酸片段：细胞爬片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶（1ml 3% 柠檬酸加2 滴浓缩型胃蛋白酶，混匀），37℃消化5 分钟。
2. 原位杂交用PBS 洗3 次×5 分钟。蒸馏水洗1 次。
3. 无水乙醇、95%、85%和75%乙醇各2min脱水。
4. 预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20-30%甲酰胺150ml 以保持湿度。按每张爬片滴加20μl预杂交液。恒温箱37℃ 2小时。吸取多余液体，不洗。
5. 杂交:按每张切片20μι杂交液(内含寡核苷酸探针-FITC,2.0ug/ml)，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。如检测细胞爬片内的DNA需85-95℃变性6-8min；如检测细胞爬片内的RNA则无需变性。
6. 恒温箱37℃杂交过夜(16h)。
7. 杂交后洗涤:揭掉盖玻片，37℃水温的2×SSC 洗涤5 分钟×2 次；37℃ 0.5×SSC 洗涤15 分钟×1 次; 37℃0.2×SSC 洗涤15 分钟×1 次。或75℃, 0.3XSSC洗5-8min。
8. PBS洗2*3min。
9. 用内含0.001%DAPI缓中甘油封片,-20℃保存备用。
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