响应面分析法优化四药门花叶总黄酮提取工艺

坠塑壅　中国食品添加剂　一响应面分析法优化四药门花叶总黄酮提取工艺　贺银菊　，彭召旭　，杨再波　一，郭治友　（１．黔南民族师范学院化学化工学院，都匀５５８０００；　２．贵州省高校民族药用植物资源开发工程研究中心，都匀５５８０００）　摘要：研究四药门花叶中总黄酮提取工艺优化，采用单因素试验和响应面法考察了乙醇的体积分数、液　料比、提取时间和提取温度对四药门花叶中总黄酮得率的影响。总黄酮提取最佳条件为：乙醇体积分数８３％，　液料比３１　ｍＬ／ｇ，提取时间８０　ｍｉｎ，提取温度５９℃，四药门花叶中总黄酮的得率为４，１４５％。　关键词：响应面法；四药门花叶；总黄酮；提取　中图分类号：ＴＳ２０２．１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００６—２５１３（２０１８）０６—００５５—０６　Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｌｆａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒＯｍ　Ｌｏｒｏｐｅｔａｌｕｍ　ｓｕｂｃｏｒｄａｔｕｍ　ｌｅａｖｅｓ　ｂｙ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　ＨＥ　Ｙｉｎ－ｊｕ。·２　ＰＥＮＧ　Ｚｈａｏ－ＸＩＩ　，ＹＡＮＧ　Ｚａｉ－ｂｏ　２。ＧＵＯ　Ｚｈｉ－ｙｏｕ　（１．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｑｉａｎｎａｎ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｆｏｒ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，　Ｄｕｙｕｎ　５５８０００；２．Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｅｔｈｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｐｌａｎｔ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　Ｅｘ——　ｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｕｙｕｎ　５５８０００）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｐｕｒｐｏｓｅ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ　ｉｓ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｌｏｒｏｐｅｔａｌｕｍ　ｓｕｂｃｏｒｄａｔｕｍ　ｌｅａｖｅｓ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｓｏｌｖｅｎｔ，ｓｏｌｉｄ－ｔｏ－ｌｉｑｕｉｄ　ｒａｔｉｏ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｗａｓ　ａｓ　ｆｏｌｌｏｗ：ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｃｅ　８３％（Ｖ，、，），ｓｏｌｉｄ－ｔｏ－ｌｉｑｕｉｄ　ｒａｔｉｏ　３１　ｍＬ／ｇ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　８０　ｍｉｎ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　５９℃，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｌｆａｖｏｎｏｉｄｓ　ｗａｓ　４．１４５％．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ；ｌｏｒｏｐｅｔａｌｕｍ　ｓｕｂｃｏｒｄａｔｕｍ　ｌｅａｖｅｓ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　四药门花属金缕梅科四药门花属的常绿灌　木或小乔木，四药门花为稀有植物，数量少、分　一类广泛存在于植物体内的化合物［５－１０１，具有　多种生物活性：抗炎抑菌，抗氧化，降血糖，抗　布区狭窄，呈零星分布，目前已被ＩＵＣＮ列为稀　肿瘤，抗癌，抗辐射以及增强免疫能力等药理作　有植物，也是我国二级保护植物。分布于香港及　用［１１－１６１，植物体含有多种黄酮类化合物。响应　广西龙州，但植株数量极为稀少，８Ｏ年代后期　在贵州荔波也发现其分布［１－４］。黄酮类化合物是　面分析法是利用合理的试验设计方法并通过实验　得到一定数据，采用多元二次回归方程来拟合因　２０１８－０２－０９　收稿日期：　２０１５１０６７００２２）ｌ贵州省科学技术联合基金项目（ＬＨ字【２０１５】７７１４）Ｉ贵州省教育厅自然　基金项目：　国家级大学生创新训练项目（科研青年项目（黔教科【２０１４】３１４号）ｌ中央财政专项子项目（ｑｎｓｙ２０１５ｚｃｚｙ０５）　作者简介：　贺银菊（１９８６一），女，硕士，讲师，研究方向：天然产物的研究与开发，Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｅｙｉｎｊｕ２００７＠１６３．ｔｏｍ。　Ｃｈｉ中国食品添加剂　ｎａ　ＦｏｏｄＡｄｄ　试验ｘ．Ｊｔ－－究　素与响应值之间的函数关系，通过对回归方程的　分析来寻求最优工艺参数。四药门花叶革质，互　生，椭圆形，全缘或上半部有少数小腺齿；托叶　披针形，被星状毛。查阅文献资料发现，目前几　乎未见关于四药门花叶活性化学成分的研究报　道，为更好地利用其价值，本文以四药门花叶为　研究对象，采用单因素试验考察了提取剂、液料　比、提取时间和提取温度对其叶片中总黄酮提取　率的影响，并运用Ｂｏｘ－Ｂｅｎｈｎｋｅｎ的中心组合原　理进行响应面优化设计，筛选出四药门花叶总黄　酮的最佳工艺条件，以芦丁为对照品用紫外分光　光度法测定了四药门花叶中的总黄酮得率，以期　为珍稀植物四药门花的开发利用提供理论参考。　１材料与方法　１．１材料与试剂　材料：四药门花叶采于贵州省黔南州荔波县　茂兰镇。　试剂：芦丁标准品：合肥博美生物科技有限　责任公司。无水乙醇：重庆川东化工（集团）有　限公司，石油醚（３０￣Ｃ～６０℃）：成都金山化学　试剂有限公司，无水乙醇、石油醚均为分析纯。　１．２仪器与设备　ＳＨＺ－ＤＩＩＩ循环水真空泵（郑州英峪予华仪　器有限公司）；ＢＳ１　１０５电子天平（北赛多利斯天　平有限公司）；ＴＵ－１９０１型双光束紫外分光光度　计（上海诺顶仪器设备有限公司）；粉碎机（浙　江金华武义屹立仪器公司）；ＤＺ－２Ａ型真空干燥　箱（英欲予华仪器厂）；电热恒温槽（上海卢奥　明科仪器有限公司）。　１．３实验方法　１．３．１标准曲线的绘制　称取干燥至恒重的芦丁对照品ｌ０．００　ｍｇ于　５０　ｍＬ容量瓶中，用乙醇溶液溶解、稀释至刻　度，摇匀、静置，得０．２０００　ｍｇ／ｍＬ的芦丁对　照品溶液，保存备用。量取０．２０００　ｍｇ／ｍＬ的　芦丁对照品溶液０．５０　ｍＬ、１．００　ｍＬ、１．５０　ｍＬ、　２．００　ｍＬ、２．５０　ｍＬ，分别置于１０　ｍＬ容量瓶中，　加入５％ＮａＮＯ２溶液０．４０　ｍＬ，静置１０　ｍｉｎ，加入　１０％Ａ１（ＮＯ３）３溶液０．４０　ｍ　Ｌ，静置１０　ｒａｉｎ，再　加人４％ＮａＯＨ溶液３．００　ｍＬ，用乙醇溶液定容　至刻度，摇匀、静置，即得ｌＯ．００　ｇｇ／ｍＬ、２０．００　ｇｇ／ｍＬ、３０．００　ｇｇ／ｍＬ、４０．００　ｇｇ／ｍＬ、５０．００　ｇｇ／ｍＬ　的标准溶液，以乙醇溶液为参比溶液，用紫外分　光光度计于４９８　ａｍ处测定吸光度。以芦丁浓度　（Ｃ）为横坐标，吸光度（Ａ）为纵坐标绘制标准　曲线。　１．３．２样品溶液总黄酮测定　将四药门花叶自然晾干，粉碎后过８０目　筛子备用。准确称取１．００００　ｇ四药门花叶粉末　２５０　ｍＬ于圆底烧瓶中，加入２０　ｍＬ石油醚加热　０．５　ｈ除去脂溶性成分后过滤，残渣室温下挥发　干，按用乙醇溶剂浸泡、提取，之后按照表１的　响应面分析试验因素和水平进行实验，提取完成　后过滤，滤液用乙醇溶液定容到５０　ｍＬ的容量瓶　中，即得待测溶液。用乙醇溶液将待测液稀释５０　倍，取１　ｍＬ稀释后的溶液佘１０　ｍＬ容量瓶中，　按照１．３．１的方法测定其总黄酮提取率。　总黄酮提取率＝Ｃ×Ｖ×Ｎ／ｍ×１００％　式中，Ｃ为提取液中总黄酮的浓度，ｇｇ／ｍＬ；　Ｖ为提取液的体积，ｍＬ；Ｎ为总稀释倍数；ｍ为　所称取的四药门花叶粉末的质量，ｇ。　１．３．３　四药门花叶总黄酮提取单因素试验　以乙醇体积分数（６０％、７０％、８０％、９０％、　１００％）、液料比（１０、２０、３０、４０、５０　ｍＬ／ｇ）、　提取时间（０．５、ｌ、１．５、２、２．５　ｈ）和提取温　度（４０、５０、６Ｏ、７０、８０℃）为单因素试验条　件。基本条件定为：乙醇体积分数８０％，液料比　４０　ｍＬ／ｇ，提取时间２　ｈ，提取温度６０℃。改变其　中一个条件以分别考察乙醇体积分数、液料比、　提取时间和提取温度对四药门花叶总黄酮提取的　影响，按照１．３．２的方法测定总黄酮得率。　１．３．４总黄酮提取响应面优化设计试验　表１响应面分析试验因素和水平　Ｔａｂｌｅ　１　Ｌｅｖｅｌｓ　ａｎｄ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｆ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　墼堑　根据单因素试验的结果和Ｂｏｘ—Ｂｅｎｈｎｋｅｎ的　着液料比的增大，总黄酮提取率升高，液料比　中心组合试验设计原理，设计响应面优化试验，　具体的试验因素及水平见表１。根据响应面优化　设计试验结果进行验证性试验，并计算总黄酮提　取率。　２结果与分析　２．１芦丁标准曲线的线性关系　根据１．３．１以芦丁浓度（ｃ）为横坐标，吸　光度（Ａ）为纵坐标用Ｏｒｉｇｉｎ８．０绘制标准曲　线。结果如图１所示，图ｌ可知：该方法在　１Ｏ．ｏｏ～５０．Ｏ０￣ｔｇ／ｍＬ范围内吸光度Ａ与浓度呈　良好的线性关系，回归方程为：ｙ＝Ｏ．Ｏ１１２２ｘ－　０．０４９８，Ｒ　＝０．９９９６６。　４　４　３　料爵　匾掘　３　３　３　３　２　Ｏ　８　６　４　２　０　Ｏ．５　Ｏ．４　Ｏ．３　Ｏ．２　Ｏ．１　０．Ｏ　１０　２Ｏ　３Ｏ　４０　５０　Ｃ（￣ｇ／ｍＬ）　图１芦丁标准标准曲线　Ｆｉｇ．１　Ｒｕｔｉｎ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｃｕｒｖｅ　２．２单因素对四药门花叶总黄酮提取的影响　２．２．１乙醇体积分数对四药门花叶总黄酮提取的　影响　不同浓度的乙醇（体积比为６０％、７０％、　８Ｏ％、９０％、１００％）对总黄酮的提取率影响见图　２。由图可见，随着乙醇浓度的增大，总黄酮提　取率升高，乙醇浓度为８０％时提取率最高，乙醇　浓度超过８０％后，随着乙醇浓度的增大，总黄酮　率降低，因此选择７５％、８０％、８５％作为响应面　设计的３个水平。　２．２．２液料比对四药门花叶总黄酮提取的影响　不同液料比（１０、２０、３Ｏ、４０、５０　ｍＬ／ｇ）　对总黄酮提取率的影响见图３。由图可见，随　为３０时提取率最高，液料比超过３０后，随着液　料比的增大，总黄酮率降低，因此选择２５、３０、　３５　ｍＬ／ｇ作为响应面设计的３个水平。　６Ｏ　７Ｏ　８Ｏ　９Ｏ　ｌＯＯ　乙醇　图２　乙醇体积分数对四药门花叶总黄酮提取率的影响　Ｆｉｇ．２　Ｅ　ｔ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｆｏ　ｌｆａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｈｔｅ　Ｌｏｒｏｐｅｔａｌｕｍ　ｓｕｂｃｏｒｄａｔｕｍ　ｌｅａｖｅｓ　４．１　４．０　３．９　鬟　骧　３．４　３＿３　ｌ０　２０　３Ｏ　４０　５Ｏ　液料比ｍＬ／ｇ　图３液料比对四药门花叶总黄酮提取率的影响　Ｆｉｇ．３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｆｏ　ｍａｔｅｒｉａｉ　ｔｏ　ｓｏｌｖｅｎｔ　ｒａｔｉｏ　ｏｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍｔｈｅＬｏｒｏｐｅｔａｌｕｍｓｕｂｃｏｒｄａｔｕｍ　ｌａｅｖｅｓ　２．２．３提取时间对四药门花叶总黄酮提取的影响　不同时间（０．５、１、１．５、２、２．５　ｈ）对总黄　酮提取率的影响见图４。由图可见，随着提取　时间的增加，总黄酮提取率升高，提取时间为　１．５　ｈ时提取率最高，提取时间超过１．５　ｈ后，随　着提取时间的增加，总黄酮率降低，因此选择１、　１．５、２　ｈ作为响应面设计的３个水平。　２　８　（　口ＦｏｏｄＡ　４　２　中国食品添加剂　试验研究　３　６　４　ｌ　４　０　装　釜　隘枢　３　３　３　９　８　７　３　５　取率（Ｙ）的回归方程：　４　４　４　述斟餐　器槭　、　３　３　３　３　Ｙ（％）＝４．０４＋０．３４Ａ＋０．ｍ　∞　０５４Ｂ一０．０５２Ｃ一　∞　踟　０．０２４Ｄ－０．０３９ＡＢ＋０．０６７ＡＣ－０．０６１ＡＤ－０．０５５ＢＣ一　０．０５０ＢＤ＋０．０３４ＣＤ－０．２８Ａ２－０．２３Ｂ　一Ｏ．０５３Ｃ２－０．１２　０．５　１．０　１．５　２．０　２．５　提取时间／ｌｌ　图４提取时间对四药门花叶总黄酮提取率的影响　Ｆｉｇ．４　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｔｉｍｅ　ｏｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　Ｌｏｒｏｐｅｔａｌｕｍ　ｓｕｂｃｏｒｄａｔｕｍ　ｌｅａｖｅｓ　２．２．４提取温度对四药门花叶总黄酮提取的影响　不同温度（４０、５０、６０、７０、８０℃）对总黄　酮提取率的影响见图５。由图可见，随着提取温　度的升高，总黄酮提取率也升高，提取温度为６０　℃提取率最高，提取温度超过６０℃后，随着提取　温度的升高，总黄酮率降低，因此选择５５、６０、　６５℃作为响应面设计的３个水平。　４Ｕ　５Ｕ　６０　７０　８Ｏ　提取温度／℃　图５提取温度对四药门花叶总黄酮提取率的影响　Ｆｉｇ．５　Ｅｆｆｅｃｔｏｆｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆ　ｌｆａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｈｔｅ　Ｌｏｒｏｐｅｔａｌｕｍ　ｓｕｂｃｏｒｄａｔｕｍ　ｌｅａｖｅｓ　２．３响应面试验优化　２．３．１响应面试验设计及结果　根据Ｂｏｘ－Ｂｅｎｈｎｋｅｎ的中心组合试验设计原　理，设计４因素３水平的２９组试验，优化试验数　据见表２。根据表２的试验数据用ｄｅｓｉｇｎ－ｅｘｐｅｒｔ　８．０．６进行分析与拟合后，得四药门花叶总黄酮提　Ｄ　（其中Ａ、Ｂ、ｃ、Ｄ为４个因素的编码）。　表２响应面设计试验结果　Ｔａｂｌｅ　２　Ａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　因素及其因素间的交互作用对总黄酮得率的　影响见表３，由表可见：模型的Ｆ＝Ｉ１．８４，Ｐ＜　０．０００１，表明试验的二次模型是极显著的，能够　正确反映各因素与响应值之间的变化关系。确定　系数Ｒ　＝０．９２２１，校正确定系数Ｒａｄｉ２＝Ｏ．８４４２，变　异系数ＣＶ＝３．１ｌ％较小，说明试验稳定、可靠。　Ａ、Ａ　、Ｂ　的Ｐ值均小于０．００１，表明其对总黄　酮得率影响极显著，Ｄ　的Ｐ值均小于０．０５表明　其对总黄酮得率影响显著。因素Ｂ、ｃ、Ｄ及交　互项ＡＢ、ＡＣ、ＡＤ、ＢＣ、ＢＤ、ＣＤ的Ｐ值大于　０．０５，表明其对总黄酮得率没有显著性影响。由　各因素Ａ、Ｂ、ｃ、Ｄ的Ｆ值（或者Ｐ值）大小可　以得出各因素对总黄酮得率影响大小顺序为Ａ＞　Ｂ＞Ｃ＞Ｄ。　表３方差分析　Ｔａｂｌｅ　３　Ｖａｄａｎ￣ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　Ｓｏｕｒｃｅ　Ｓｕｍｏｆ　ｓｑｕａｒｅｓ　ｄｆ　Ｍｅａｎ　ｓｑｕａｒｅ　Ｆｖａｌｕｅ　Ｐｖａｌｕｅ显著性　注：Ｐ＜０．０５，差异显著ｌ　Ｐ＜０．００１，差异极显著。　墼堑　四个因素的两两因素为考察对象，做出各因　素交互作用响应面，见图６。由图６可以看出各　因素相互作用对总黄酮得率影响，即响应面对各　因素的敏感程度，反映了在其他两个因素固定的　条件下，另外两两因素对总黄酮得率影响，响应　面坡面越陡峭，表明响应面受实验因素变化就越　大，反之响应面坡面越平缓，表明响应面受实验　因素变化就越小。在图６中，各因素两两交互响　应面坡面陡峭顺序为ＡＣ＞ＡＤ＞ＢＣ＞ＢＤ＞　ＡＢ＞ＣＤ，即乙醇体积分数和提取时间的交互　作用响应面最陡峭，说明乙醇体积分数和提取时　间的交互作用对总黄酮得率影响最大，而提取时　间和提取温度的交互作用响应面最平缓，说明提　取时间和提取温度的交互作用对总黄酮得率影响　最小。　２．３．２响应面试验优化及验证试验　通过ｄｅｓｉｇｎ－ｅｘｐｅｒｔ　８．０．６软件，对回归模型　进行预测得到四药门花叶总黄酮提取最佳工艺　为：乙醇体积分数８２．９６％、液料比３０．７１　ｍＬ／ｇ、　提取时间１．３５　ｈ、提取温度５８．３９℃，此时总黄酮　理论得率为４．１５７％。根据预测条件和实际操作设　计总黄酮提取条件为：乙醇体积分数８３％、液料　比３１　ｍＬ／ｇ、提取时间８０　ｍｉｎ（１．３３　ｈ）、提取温　度５９℃，进行３次平行试验，测得四药门花叶　的平均总黄酮得率为４．１４５％。预测结果和实测结　果拟合良好，参数准确可靠。　３结论　本文用紫外分光光度计在２８０～６００　ｎｍ之　间进行扫描，样品液和芦丁标准液在４９８　ｎｍ处　有最大吸收，因此选择４９８　ｎｍ为测定波长。响　应面分析试验结果表明：二次模型是极显著的，　准确性较高。由回归方程和各因素交互作用响应　面可知各因素对总黄酮得率影响大小不同，其大　小顺序为Ａ＞Ｂ＞ｃ＞Ｄ，即乙醇体积分数位　居第一，液料比居第二，提取时间位次之，提取　温度对总黄酮提取率影响最小。根据回归模型进　行预测和验证性实验，建立了四药门花叶中总黄　酮提取的最佳工艺：乙醇体积分数８３％、液料比　３１　ｍＬ／ｇ、提取时间８０　ｍｉｎ、提取温度５９℃，四　药门花叶中平均总黄酮提取率为４．１４５％。　Ｃ　ｈｉｎ　ａ　Ｆ　ｏｏｄ　Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ　堕堡　＝：竺＝！二　一　一　僻　得　畦　ｊ｝皿＝　ｊ　蕊　瓤　龆　（％）　摹　～　摹　一　讲　眭　瞬　ｌ盐　器　粗　ｊ　匿　椒　ｊ　（％）　一　一　嗽　褂　吐　疆　辄　露　瓤　趣　００　Ｌ／ｇ）Ｄ　图６各因素两两交互作用的响应面　Ｆｉｇ．６　Ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｗｏ　ｆａｃｔｏｒｓ　参考文献：　Ｉ１　华　约门化扦插繁琐披小＝…．现代　艺，２０１３（１２）：　．ｑ＋ｌｔｌｆ　野　｝　珍稀濒危植物和国家　３３　３４　９１施伟悔，杨凯．　（４）：ｌ０９　１　Ｉ６．　建稍，晦ｚ：响ｊ、　法ｆ忙化红花紫制树ｎｆ‘　中总黄　的趟Ｊ＊波辅助挺　Ｉ：艺Ｉ　ＪＩ＿一ｆ，旧食　锅添加剂，２０１４　１０ｌ陈建福，钟艳琴，曾小疗，　（１０）：６６　７２．　２Ｉ蒋谦　’，何秀ｚ：，修小娟，　．响Ｊ　ｌ、ｌ＝ｌｆ　化超声辅助提墩　承　ｔ　保护野，Ｊ　ｆｆ｛物凋　ＩＪｌ广东林、Ｉ　科技，２［聊，２３（２）：２８　３１　３ｌ孙红协，陈彦，梁银行，等．濒危植物叫药门花的组织培养　研究初探…．脱代阔岂，２０１５（２）：１２　１３．　胡萝【、ｎ１‘总黄酬的ｊ　岂研究Ｉ　Ｊｌ·｛Ｉ　食ｌ１ｆ　添ＪＪ　【】刺，２０１７　１１１方‘杰，徐岩成，　色屯，等．嚣酬　化ｆ７物的约动　和药　９　一Ｐ｝　研究进展…陕ｐ　４Ｉ顺每，张奠浦Ｉ．濒临植物叫药门花的ｎ化授粉…．植物分类　’　理作用研究逊提Ｉ　Ｊｌ＿约　＇Ｔｑｌｌ￣纡　研究，２０１５，１５（１）：　ｌ２１魏良柱，拿筱玲．数酮类化　物药　农、　科学，２０１４，６０（１２）：５２　５６　ｌ：报，２００８，４６（５）：６５１　６５２．　５】畅再波，龙成协，毛海、　，等．鄙匀楼梯　总茨　目提取工艺及其　饥氧化性能研究Ｉ　Ｊ　Ｊｌ黔南民族帅范　：院　’　：报，２０１３（６）：７　９．　６】　亚静，张ｔ尧龙，常Ｈ　，　．响』、；ＺｉＩｉｉ优化走［ｉ，｝ｉ波法提取黑豆异　黄酮的Ｉ　艺研究『Ｊ１Ｊ食　Ｊｌ　ｑｋ，￣ｑ－技，２０１３，３４（５）：２５９　２６３．　７】池幸色　，煲媛，梁　，刘贵珊微波辅助法提取枸杞叶黄酮　的Ｊ：艺研究ｆＪ１．　｛·倒食晶添ｌ『ＪｆＩ剂，２０ｌ３（４）：８３　８９．　ｌ３　Ｊ褂秋月，郭　，张成义嚣刚类化介物约州作ＨＪ的研究ｆＪ１　１　８３　北华大学　、　：报（ｎ然科　、　：胍），２０ｌ１，１２（２）：１　药，２０１０，６（４）：１２６　１２８　ｌ４　Ｊ罗艺萍．　ＩＩＩｌｉ】类化　物ｎ０约　“ｒｉ，ＹＩ－￣Ｏｌ－究逃憾【Ｊ　Ｊ亚太传统医　ｌ５１刘蕊．黄酮类化合物的药　２（）ｌ（），２３（２）：２３４　２３６．　川ｔ们｝＇ｙ￣：ｉ　－腿…．黑尼江隈药．Ｊ　嚣酬蹩化　物约　作Ｉ｝ｊ的研　８Ｉ　观芳，赵成爱，余悔燕，等响Ｊ、　面法优化八宝景天叶　总黄酮的趟声提取ｌ　艺…．食１　＿ｌＪ　ｑｋ￣＇ｔ技，２０１３，３４（１）：　２２４　２２８　Ｊ６ｌ曹纬凼，刘志勤，ｆ｛Ｉ；￡　，　究进展…．西』七械物　报．！（Ｈ）３（Ｉｉ’）：２２４１　２２４７