人凝血酶原复合物的制备及临床应用

临床医药实践２０１４年７月第２３卷第７期　・５２９・　［５］　Ｂｏｉｓｓｉｅｒ　Ｍ　Ｃ，Ａｓｓｉｅｒ　Ｅ，Ｆａｌｇａｒｏｎｃ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｓｈｉｆｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔａｌ　ｗｉｔｈ　ａ　ｄｅｆｔｃｉｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ＣＤ４’　ｉｍｂａｌａｎｃｅ　ｆｒｏｍ　Ｔｈｌ／Ｔｈ２　ｔｏ　Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ：ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｉｎｇ　ＣＤ２５　ｈｉｈｇ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒｌａ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｉｔｓ　ｐａｒａｄｉｇｍ［Ｊ］．Ｊｉｎｔ　Ｂｏｎｅ　Ｓｐｉｎｅ，　ｂｌｏｏｄ［Ｊ］．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（Ｏｘｆｏｒｄ），２００６，４５（１０）：　２００８，７５（４）：３７３—３７５．　１　２１０—１　２１７．　［６］　Ｒｕｓｃｈｐｌｅｒ　Ｐ，Ｓｔｉｅｈｌ　Ｐ．Ｓｈｉｔｆ　ｉｎ　Ｔｈｌ　ａｎｄ　Ｔｈ２　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　［１３］　Ｔａｋａｈａｓｈｉ　Ｔ，Ｔａｇａｍｉ　Ｔ，Ｙａｍａｚａｋｉ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ　ｍＲＮＡ　ｂａｌｎａｃｅ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｗｏ　ｎｅｗｈｉｓｔｏｌｏｇｉｅａｌ　ｍａｉｎ　ｔｙｐｅｓ　ｏｆ　ｓｅｌｆ—ｔｏｌｅｒａｎｃｅ　ｍａｉｎｔｉａｎｅｄ　ｂｙ　ＣＩ）２５　ＣＤ４　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　Ｔ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｉｔｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｅｌｌ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ，２００２，４８（３）：　ｃｅｌｌｓ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅｌｙ　ｅｘｐｒｅｓｓ—ｉｎｇ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　２８５—２９３．　—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ａｎｔｉｇｅｎ　４［Ｊ］．Ｊ　Ｅｘｐ　Ｍｅｄ，２ＯＯＯ，１９２（２）：　［７］Ｌａｕｒｉｅ　Ｓ　Ｄ，Ｊｏｈｎ　Ｊ　Ｃ，Ｓｃｈｕｌｚｅ—Ｋｏｏｐｓ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｒｈｅｕ－　３０３—３１０．　ｍａｔｏｉｄ　ｓｙｎｏｄａｌ　ＣＤ４　Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｅｘｈｉｂｉｔ　ａ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｃａｐａｃｉｔｙ　［１４］　Ｓｈｉｍｉｚｕ　Ｊ，Ｙａｍａｚａｋｉ　Ｓ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ　ｉｎｔｏ　ＩＬ一４一ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　Ｔ—ｈｅｌｐｅｒ一２　ｅｆ－　ｏｆ　ＣＤ４　ＣＤ２５　ｒｅｇｕｌａｔｏｒ￣Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ＧＩＴＢ　ｂｒｅａｋｓ　ｆｅｃｔｏｒ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｅｓ，２００１，３（１）：５４—６４．　ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｅｌｆｔｏｌｅｒｎａｃｅ［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００２，３　［８］　Ｎｏｒｉｉ　Ｍ，Ｙａｍａｍｕｒａ　Ｍ，１ｗａｈａｓｈｉ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｒｅ－　（２）：１３５—１４２．　ｃｒｕｉｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ＣＸＣＲ３　ａｎｄ　ＣＣＲ５　ＣＣＲ４　Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎｔｏ　［１５］　Ｕ　Ｍ　Ｏ，Ｗａｎ　Ｙ　Ｙ，ｎａｖｅｌ１　Ｒ　Ａ．Ｔ　ｃｅｌｌ—ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｔｒａｎｓ－　ｓｙｎｏｖｉｌａ　ｔｉｓｓｕｅ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｉｗｔｈ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．　ｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｂｅｔａ　ｃｏｎｔｒｏｌｓ　Ｔ　ｃｅｌｌ　ｔｏｌｅｒａｎｃｅ　ａｎｄ　Ａｃｔａ　Ｍｅｄ　Ｏｋａｙａｍａ，２００６，６Ｏ（３）：１４９—１５７．　ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　Ｔｈｌ　ａｎｄ　Ｔｈｌ７　ｃｅｌｌ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｉ—　［９］Ｈａｒｉｎｇｍａｎ　Ｊ　Ｊ，Ｓｍｅｅｔｓ　Ｔ　Ｊ，Ｒｅｉｎｄｅｒｓ—Ｂｌｎａｋｅｒｔ　Ｐ，ｅｔ　ｔｙ，２００９，２６（５）：５７９—５９１．　１ａ．Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ　ａｎｄ　ｃｈｍｏｋｉｎｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　［１６］　Ｙａｎｇ　Ｌ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ　Ｄ　Ｅ，Ｂａｅｃｈｅｒ—Ａｌｌａｎ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．ＩＬ一　ｐａｉｒｅｄ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｓｙｎｏｖｉａｌ　２１　ａｎｄＴＧＦ——ｂｅｔａｆｌ３ｇｅ　ｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆｈｕ・－　ｉｔｓｓｕｅ　ｏｆ　ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｓｔｉｓ　ａｎｄ　ｒｅａｃｔｉｖｅ　ｍａｎ　Ｔ（Ｈ）１７　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ　２００８，４５４（７　２０２）：３５０　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ａｎｎ　Ｒｈｅｕｍ　Ｄｉｓ，２００６（６５）：２９４　—３５２．　—３０ｏ．　［１７］　Ｂｏｎｉｆａｃｅ　Ｋ，Ｂｌｏｍ　Ｂ，Ｌｉｕ　Ｙ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｆｒｏｍ　ｉｎｔｅｄｅｕｋｉｎ一　［１０］　Ｓｈｅｖａｃｈ　Ｅ　Ｍ．Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｔ—ｃｅＵ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｂｙ　ＣＤ４　２３　ｔ０　Ｔ—ｈｅｌｐｅｒ　１７　ｃｅｌｌｓ：ｈｕｍａｎ　Ｔ—ｈｅｌｐｅｒ　ｅｅｌｌ　ｄｉｆｆｅＩ＂－　ＣＤ２５　ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒＴ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００１（１８２）：５８　ｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏ１　Ｒｅｖ，２００８（２２６）：１３２　—６７．　’　—１４６．　［１１］　Ｓａｋａｇｕｃｈｉ　ｓ，Ｓａｋａｇｕｃｈｉ　Ｎ，Ａｓａｎｏ　Ｍ，ｅｔ　１ａ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃ　［１８］　Ｈａｒｒｉｓ　Ｔ　Ｊ，Ｇｒｏｓｓｏ　Ｊ　Ｆ，Ｙｅｎ　Ｈ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｃｕｔｔｉｎｇ　ｅｄｇｅ：ａｌｌ　ｓｅｌｆｔｏｌｅｒａｎｃｅｍａｉｎｔｉａｎｅｄ　ｂｙ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　Ｔ　ｃｅｌｌｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｒｅｑｕｉｅｒｍｅｎｔ　ｆｏｒ　ＳＴＡＴ３　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｉｎ　Ｉ　ｌ７　ｄｅｖｅｌ－　ＩＬ一２　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ａｌｐｈａ—ｃｈａｉｎ（ＣＤ２５）：ｂｒｅａｋ　ｄｏｗｎ　ｏｆ　ａ　ｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｎ１７　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ［Ｊ］．Ｊ　Ｉｍｍｕ－　ｓｉｎｇｌｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｓｅｌｆｔｏｌｅｒａｎｃｅｃａｕｓｅｓ　ｖａｒｉｏｕｓ　ａｕｔｏｉｍ－　ｎｏｌ，２００７，１７９（７）：４　３ｌ３—４　３１７．　ｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．ＪＩｍｍｕｎｏｌ，１９９５，１５５（３）：１１５１—　收稿日期：２０１４一Ｏ１—１４　１　１６４．　（本文编辑：王作利）　［１２］Ｌａｗｓｏｎ　ｃ　Ａ，Ｂｒｏｎｗ　Ａ　Ｋ，Ｂｅｊａｒｎａｏ　Ｖ，ｅｔ　ａ１．Ｅａｒｌｙ　ｒｈｅｕ一　作者简介：冷雪娇（１９８１一），女，山东省文登市人，硕士学位，主管技师，主要从事免疫学工作。　人凝血酶原复合物的制备及临床应用（　黄瑶　（江西博雅生物制药股份有限公司，江西抚州　３４４０００）　人凝血酶原复合物（ＰＣＣ）来源于健康人血浆，　质，在规模生产时难以使用常规的分离手段将它们　是一种具有凝血作用的血浆蛋白静脉注射制剂。　分离，故一般的商品ＰＣＣ皆含有上述四种因子¨．２　Ｊ。　ＰＣＣ主要由维生素Ｋ依赖性的凝血酶原（ＦｌＩ）、凝　在临床上，ＰＣＣ已经被广泛应用于乙型血友病患者、　血酶原转化因子（ＦＶＩＩ）、抗血友病乙型因子（ＦＩＸ）和　维生素Ｋ依赖Ｉ生凝血因子缺乏症患者、肝病患者、过　自身凝血酶原（ＦＸ）等四种凝血因子组成。这些因　量服用抗凝药物者及长时间使用ＦⅧ而产生ＦⅧ抑　子都是在肝中合成的糖蛋白。由于这四种凝血因子　制剂的甲型血友病患者的出血症状　。近年来，　具有极其相似的相对分子质量和等电点、等理化性　ＰＣＣ的临床使用量越来越大，而国内由于该产品严　［１］本课题为江西省战略性新兴产业研发引导项目专项计划（项目编号：２０１３１ＡＦＣ３００４１）　本文通讯作者：黄番　・５３０・　禁进口、原料血浆有限和生产厂家少等原因，使得国　内ＰＣＣ产品缺口很大，严重供不应求。　１　ＰＣＣ的制备　直接用于ＰＣＣ制备的原材料主要有新鲜冷冻　血浆（ＦＦＰ）、去除冷沉淀后的血浆、采用低温乙醇法　除去Ｆ　Ｉ沉淀后的上清液和采用低温乙醇法得到的　Ｆ　ＩＩＩ沉淀。有研究表明，采用去除冷沉淀的血浆为原　料比使用其他原料所得到的产品好，主要原因如下：　第一，ＦＦＰ中含有一定量的冷沉淀，而冷沉淀的存在　会影响ＰＣＣ的回收，且冷沉淀是制备ＦＶＩ的主要原　料，直接采用ＦＦＰ不利于血浆的综合利用。第二，采　用低温乙醇法获得的原料中含有一定量的乙醇，而　这部分乙醇易灭活血浆中含有的一些天然抑制剂，　造成凝血因子活化。目前，国内普遍采用去除冷沉　淀后的血浆为原料制备ＰＣＣ【４　Ｊ。ＰＣＣ制备技术主要　有无机盐吸附法和离子交换吸附法，其中离子交换　吸附法包括批式吸附法、半流动吸附法和扩张床吸　附法等。　１．１无机盐吸附法　无机盐吸附法主要是将无机盐吸附剂加入原料　血浆中吸附制备ＰＣＣ的方法，常用的吸附剂有磷酸　三钙、氢氧化铝、硫酸钡等　Ｊ。采用无机盐吸附法制　备的ＰＣＣ能够满足临床上的要求，能达到较好的效　果，但经该方法处理过的血浆难以制备其他产品，不　利于血浆的综合利用。另外，原料血浆供应商在采　集时普遍采用枸橼酸盐作为抗凝剂，而枸橼酸盐易　与吸附剂发生反应，从而抑制ＰＣＣ的吸附。因此，　目前该方法已经很少使用。但国外还有个别企业沿　用该方法，如Ｂａｘｔｅｒ公司出品的Ｐｒｏｐｌｅｘ　Ｔ仍采用无　机盐（磷酸三钙）吸附法制备　Ｊ。　１．２离子交换吸附法　１．２．１批式吸附法　批式吸附法是将离子交换树脂一次性投入原料　血浆中进行吸附制备ＰＣＣ的方法。１９７３年，Ｈｅｙｓｔｅｋ　等　建立了经典的ＤＥＡＥ　Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ａ一５０吸附法：　即采用ＤＥＡＥ　Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ａ一５０为凝胶递质从原料血　浆中吸附ＰＣＣ所包含的四种凝血因子（ＦＩＩ，ＦⅦ，Ｆ　Ⅸ和ＦＸ），吸附一段时间后，分离凝胶并使用低离　子强度缓冲液洗涤凝胶上吸附能力弱的杂蛋白或其　他杂质，再使用高离子强度的缓冲液洗脱下所需的　蛋白质，再进行病毒灭活、超滤浓缩、稀配、冷冻干燥　等后续处理得到ＰＣＣ。通过该方法处理过的血浆还　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ。Ｊｕ１．２０１４，Ｖｏｌ　２３　Ｎｏ．７　可用于制备其他血液制品。虽然批式吸附法使用范　围最广，但该方法依然存在较多的不足，如：吸附必　须在搅拌罐内进行，所用凝胶在搅拌过程中易破碎，　需要将凝胶转移至层析柱中进行洗涤和洗脱，操作　繁琐，周期较长且容易造成交叉污染等。故多年来，　有许多研究者对批式吸附法进行了研究和改进。刘　欣晏等　以ＤＥＡＥ　Ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ａ一５０凝胶为吸附剂，　采用两步吸附法制备ＰＣＣ，产品回收率达７０％，其　他指标均符合要求。ＭｃＣａｎｎ等　以Ｗｈａｔｍａｎ　ＤＥ３２　为吸附剂，以ＦＩ上清液为原料，洗脱液中ＦＩＸ的回收　率达７８％。余蓉等　以ＤＥＡＥ　Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆａｓｔ　Ｆｌｏｗ　凝胶为吸附剂，以ＦＦＰ为原料，制品中ＦＩＸ的回收率　达８９．９４％，且比活达１６．２８　ＩＵ／ｍｇ。　１．２．２半流动吸附法　为克服批式吸附法的缺点，Ｔｈａｒａｋａｎ等¨　和邱　家山等　提出了一种新型的ＰＣＣ制备方法，即：半　流动吸附法。该方法主要用到一个带搅拌器的容器　收集凝胶，将血浆以一定的速度从容器的一方进入，　同时由另一方流出，使得血浆处于一种动态的吸附　和分离过程中。该方法相比批式吸附法，主要避免　了吸附后凝胶的转移，减少了手工操作，容器的选择　性大，血浆与凝胶接触充分，缩短了操作时间，能有　效降低凝血因子活化的风险。但由于半流动吸附法　投资成本大，目前国内很少有单位采用。　１．２．３扩张床吸附法　扩张床吸附法是一种新的分离方法，它兼具流　化床和固定床的特点，具有高效的分离能力、较低的　返混程度等多种优势，因此较好地弥补了目前批式　吸附法中存在的不足。目前，已有较多关于扩张床　吸附法应用于ＰＣＣ制备的研究，并取得了较好的效　果，如ＭｃＣａｎｎ等　从以低温乙醇法制备的组分Ｉ　上清液为原料，以Ｓｔｒｅａｍｌｉｎｅ　Ｑ—ＸＬ为递质，采用扩　张床吸附法制备ＰＣＣ，结果整个实验过程仅耗时约　２．５　ｈ，有效缩短了时间，且产品中Ｆ１１，ＦＩＸ和ＦＸ收　率分别为６３％，４０％和７１％，不含Ｆ　ＶＩＩ。Ｌｉｈｍｅ　等Ｌ１　以ＦＦＰ为原料，以ＤＥＡＥ—ｔｕｎｇ—ｓｔｅｎ　ｃａｒｂｉｄｅ　ａｇａｒｏｓｅ为递质，采用扩张床吸附法制备ＰＣＣ，结果产　品中Ｆ　１１，Ｆ　ＸＩ，Ｆ　Ｘ回收率分别为７ｌ％，４８％和　８０％，不含ＦⅦ。陈刚等¨　以Ｓｔｒｅａｍｌｉｎｅ　ＤＥＡＥ为递　质进行研究也取得了较好的结果。　２临床应用　临床上ＰＣＣ的应用至今已有５０多年，早期主　临床医药实践２０１４年７月第２３卷第７期　要用于乙型血友病的治疗。近年来，随着医疗技术　的发展及临床经验的积累，ＰＣＣ的临床应用范围越　来越广Ｌｌ　Ｊ，需求量也越来越大。　２．１治疗乙型血友病　乙型血友病是一种伴ｘ染色体遗传的隐陛遗传　病，其中男性的发病率较高，约为１／３０　０００ｎ　。２０　世纪７０年代，开始出现人为输注凝血因子用于治疗　乙型血友病的替代疗法。由于ＰＣＣ中ＦＩＸ含量较　高，故ＰＣＣ在临床上基本能够满足乙型血友病患者　治疗的需要，但由于ＰＣＣ具有引发血栓和传播病毒　的风险，故研究者一直在寻求治疗乙型血友病的替　代药品。虽世界血友病联盟均重点推荐使用重组Ｆ　Ⅸ和高纯ＦＩＸ来治疗乙型血友病¨　Ｊ，但受制造技术　及费用的制约，国内ＰＣＣ依旧是治疗乙型血友病重　要而有效的制品¨引。　２．２产生ＦⅧ抑制剂的甲型血友病患者的治疗　患有甲型血友病的患者，主要是血液中缺少Ｆ　Ⅷ，如常年输注ＦＶｉ进行治疗，约２０％的患者血液中　会产生ＦＶＩ抑制剂，产生ＦⅧ抑制剂后，再使用ＦⅧ　进行治疗，效果不理想。此时可使用ＰＣＣ进行治　疗，ＰＣＣ具有抑制ＦⅧ抑制剂的作用　。　２．３维生素Ｋ依赖性的凝血因子缺乏症　华法林作为一种常用的抗凝药，作用原理主要　是通过拮抗维生素Ｋ而影响维生素Ｋ依赖性凝血　因子的合成。在临床上，华法林的过量服用将导致　出血并发症，严重者将致死。由于不同患者的体质　相差较大，对华法林钠的耐受能力也不同，因而部分　人群极易使用华法林过量而导致体内维生素Ｋ依赖　性凝血因子缺乏¨　，治疗这部分患者时需及时使用　ＰＣＣ进行过度抗凝逆转治疗。对于遗传性的维生素　Ｋ依赖性凝血因子（ＦⅡ或ＦＸ）缺乏症，目前还没专　门的特效药，只能输注ＰＣＣ进行治疗　。　２．４大出血时和冷沉淀联合使用止血　患者大出血时，短时间内血液中的凝血因子浓　度将降到一个较低的水平，易出现凝血功能异常现　象。ＰＣＣ中含有ＦⅡ，ＦⅦ，ＦＩＸ和ＦＸ。冷沉淀含有　丰富的ＦＶｉ、纤维结合蛋白、ｖＷＦ等，两者联合使用　能快速补充血液中凝血因子的含量，明显缩短患者　的凝血时间，挽救患者生命　。　３展　望　由于ＰＣＣ的临床需求量越来越大，且当前国内　原料血浆采集量低、ＰＣＣ的生产厂家少及效率低等　・５３１・　原因，导致国内ＰＣＣ供求市场严重失衡。因此，为　彻底解决ＰＣＣ的供应问题，国内血液制品企业首先　要做的是加大研发力度和提高原料血浆的采集量。　目前，国内ＰＣＣ的制备依旧沿用传统的批式吸附　法，生产工艺落后，为提升ＰＣＣ的质量和产量，急需　进一步深入研究效果较好的ＰＣＣ制备方法（如扩张　床吸附法等），争取早日实现规模化生产。同时，还　需进一步探索其他的新技术新方法。　参考文献：　［１］　焦丽华，代旭兰，刘文芳．凝血酶原复合物的制备及　其临床应用进展［Ｊ］．中国输血杂志，２００８，２１（９）：　７３７—７４１．　［２］　Ｆｒａｎｃｈｉｎｉ　Ｍ，Ｌｉｐｐｉ　Ｇ．Ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｃｏｎｃｅｎ—　ｔｒａｔｅｓ：ａｎ　ｕｐｄａｔｅ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ　Ｔｒａｎｓｆｕｓ，２０１０，８（３）：１４９　—１５４．　［３］Ｌｕｓｈｅｒ　Ｊ　Ｍ，Ｓｈａｐｉｒｏ　Ｓ　Ｓ，Ｐａｌａｓｃａｋ　Ｊ　Ｅ．Ｅｆｉｆｃａｃｙ　ｏｆ　ｐｒｏ－　ｔｈｒｏｍｂｉｎ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ　ｉｎ　ｈｅｍｏｐｈｉｌｉａｃｓ　ｗｉｔｈ　ａｎ－　ｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｔｏ　ｆａｃｔｏｒⅧＡ　ｍｕｈｉｃｅｎｔｅｒ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｔｒｉａｌ［Ｊ］．　Ｎ　Ｅｎｓｌ　Ｊ　Ｍｅｄ，１９８０，３０３（８）：４２１—４２５．　［４］　包正琦，何彦林．人凝血酶原复合物制备工艺研究现　状［Ｊ］．微生物学免疫学进展，２０１３，４１（４）：７９—８４．　［５　ｌ　Ｊｏｓｉｃ　Ｄ，Ｈｏｆｆｅｒ　Ｌ，Ｂｕｃｈａｃｈｅｒ　Ａ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｖｉｔａｍｉｎ　Ｋ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｓｕｃｈ　ａｓ　ｃｌｏｔｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒｓⅡ，Ⅶ，　ⅨａｎｄＸａｎｄ　ｃｌｏｔｔｉｎｇ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｃ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｈｒｏｍａ．　ｔｏｇｒ　Ｂ，２００３，７９０（１／２）：１８３—１９７．　［６　Ｉ　Ｈｅｙｓｔｅｋ　Ｊ，Ｂｒｕｍｍｅｌｈｕｉｓ　Ｈ　Ｇ　Ｊ，Ｋｒｕｎｅｎ　Ｈ　Ｗ．Ｃｏｎｔｒｉｂｕ．　ｔｉｏｎｓ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｕｓｅ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｂｌｏｏｄ　ＩＩ　Ｔｈｅ　ｌａｒｇｅ—　ｓｃａｌｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ　ｃｏｍｐｌｅｘ．Ａ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｗｏ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ａｎｉｏｎ　ｅｘｃｈａｎｇｅｒｓ　ＤＥＡＥ　—ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ　ＤＥ　５２　ａｎｄ　ＤＥＡＥ—ｓｅｐｈａｄｅｘ　Ａ一５０［Ｊ］．　Ｖｏｘ　Ｓａｎｇ，１９７３，２５（２）：１１３—１２３。　［７］　刘欣晏，王凤山，仲立军，等．采用两步凝胶吸附法制　备人凝血酶原复合物的工艺研究［Ｊ］．中国生化药　物杂志，２００９，２９（１）：２６—２９．　［８］　ＭｃＣａｎｎ　Ｋ　Ｂ，Ｇｅｍｍｅ　Ｐ　Ｔ，Ｗｕ　Ｊ。ｅｔ　ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｘｐａｎｄｅｄ　ｂｅｄ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｆｏｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｆｒｏｍ　ｃｏｈｎ　ｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ　Ｉ［Ｊ］．　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，２００８，３６（４）：２２７—２３３．　［９］　余蓉，李晓红，祁辉，等．批武吸附法制备人凝血因子　Ⅸ复合物［Ｊ］．中国现代应用药学杂志，２００３，２０　（６）：４５０—４５２．　［１Ｏ］Ｔｈａｒａｋａｎ　Ｊ　Ｐ，Ｇｅｅ　Ｄ　Ｍ，Ｃｌａｒｋ　Ｄ　Ｂ．Ａ　ｓｅｍｉ—ｃｏｎｔｉｎｕ．　ＯＵＳ　ｍｅｔｌｌｏｄ　ｆｏｒ　ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｆａｃｔｏｒ　ＩＸ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｆｒｏｍ　ｈｕｍａｎ　ｐｌａｓｍａ［Ｊ］．Ｖｏｘ　Ｓａｎｇ，１９８９（５７）：２３３—２３９．　［１１］　邱家山，徐琦，方为茂，等．人凝血酶原复合物分离纯　化工艺的研究进展［Ｊ］．生物技术通报，２００６（２）：１７　—２０．　［１２］Ｌｉｈｍｅ　Ａ，Ｈａｎｓｅｎ　Ｍ　Ｂ，Ｖａａｒｓｔ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｎｏｖｅｌ　ＣＯｒｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｐｌａｓｍａ　ｂｙ　ｅｘｐａｎｄｅｄ　ｂｅｄ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ］．Ａｎａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，２０１０，　３９９（１）：１０２—１０９．　・５３２・　ｒＬ　ｒＬ　ｒＬ　ｒＬ　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ。Ｊｕ１．２０１４，Ｖｏｌ　２３　Ｎｏ．７　１Ｊｎ　陈刚，赵红卫，Ｍ　：２　徐琦，等．离子交换树脂吸附分离人凝　　１Ｊ］Ｊ　１Ｊ　［１７］　Ｋｅｅｌｉｎｇ　Ｄ，Ｔａｉｔ　Ｃ，Ｍａｋｒｉｓ　Ｍ．Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｉｓｅ　ｏｆ　ｈｅｒａｐｅｕｔｔｉｃ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｔｏ　ｔｒｅａｔｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ　ａｎｄ　血酶原复合物研究［Ｊ］．四川化工，２００６，９（５）：４—　８．　ｏｔｈｅｒ　ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ　ｂｌｅｅｄｉｎｇ　ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ［Ｊ］．Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｉａ，　２００８，１４（４）：６７１—６８４．　Ｐａｂｉｎｇｅｒ　Ｉ，Ｂｒｅｎｎｅｒ　Ｂ，Ｋａｌｉｎａ　Ｕ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ（Ｂｅｒｉｐｌｅｘｗ　Ｐ／Ｎ）ｆｏｒ　ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ　ａｎｔｉｅｏａｇｕｌａｔｉｏｎ　ｒｅｖｅｒｓａｌ：ａ　ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ　ｍｕｌｉｔｎａｔｉｏｎａｌ　［１８］　李斌，吴竞生。血友病的综合治疗［Ｊ］．血栓与止血　学，２０ｌ１，ｌ７（２）：８８—９１．　［１９］　周志忠，曹艳花，林妙，等．冷沉淀与凝血酶原复合物　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｔｒｉｌ［Ｊ］．Ｊａ　Ｔｈｒｏｍｂ　Ｈａｅｍｏｓｔ，２００８，６（４）：６２２　—６３１．　联合在大出血中的应用［Ｊ］．海南医学院学报，２００９，　１５（９）：１　０７３—１　０７４．　Ｌｅｓｓｉｎｇｅｒ　Ｃ　Ａ，Ｂｌａｔｔ　Ｐ　Ｍ，Ｈｏｏｔｓ　Ｗ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｒｏｌｅ　ｏｆｐｒｏ—　ｔｈｒｏｍｂｉｎ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ　ｉｎ　ｒｅｖｅｒｓｉｎｇ　ｗａｒｆａｒｉｎ　ａｎ・　［２０］　Ｒｏｂｂｌｅｅ　Ｊ　Ａ，Ｗｉｌｋｅｓ　Ｐ　Ｒ，Ｄｉｃｋｉｅ　Ｓ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｂｌｅｅｄｉｎｇ　ｉｎ　ａ　ｊｅｈｏｖａｈ’Ｓ　ｗｉｔｎ￣ｓ　ｐａｔｉｅｎｔ　ｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇ　ａ　ｒｅｄｏａｏｒｔｉｃ　ｖａｌｖｅ　ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ　ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｒｙｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅ　ａｎｄ　ａ　ｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ：ａ　ｒｅｎｅｗ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｈｅｍａ－　ｔｏｌ，２００８，８３（２）：１３７—１４３．　Ｇｍｂｈ　Ｓ　Ｋ．Ｆｒｅｉｂｕｒｇ　６　ｆａｃｔｏｒⅧｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ．ｆａｃｔｏｒ　ＶＥ／　ｙｏｎ　ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ　ｆａｃｔｏｒ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ，ｆａｃｔｏｒ　ＩＸ　ｃｏｎｃｅｎ．　ｐｍｔｈｍｍｂｉｎ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ［Ｊ］．Ｃａｎ　Ｊ　Ａｎａｅｓｔｈ，　２０１２，５９（３）：２９９—３０３．　收稿日期：２０１４—０３—１４　ｔｒａｔｅｓ，ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｐｒｏｔｈｒｏｍｂｉｎ　ｃｏｍｐｌｅｘ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ［Ｊ］．　Ｔｒａｎｓｆｕｓ　Ｍｅｄ　Ｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００９，３６（６）：４０９—４１８．　（本文编辑：王作利）　作者简介：黄皤（１９８５一），男，江西省吉安县人，硕士学位，助理工程师，主要从事血液制品的研究与开发工作。　浅谈２型糖尿病的基因检测　王雪涛，朱燕萍　（西山煤电总公司职工总医院，山西太原０３００５３）　糖尿病是一种慢性病、常见病、多发病，根据世界　卫生组织估计，全球糖尿病患者到２０２５年将达３　亿¨Ｊ。我国已经成为全球第一糖尿病大国。２０１０版　叶酸还原酶（ＭＴＨＦＲ）、脂联素蛋白（ＡＤＩＰＯＱ）、钙激　活蛋白酶ｌＯ（ＣＡＰＮ一１０）、尾加压素Ⅱ基因　（ＵＴＳ２）、磺脲类药物受体１基因（ＡＢＣＣ８别名　ＳＵＲ１）、维生素Ｄ３受体（ＶＤＲ）、瘦蛋白（ＬＥＰ）、脂蛋　白脂酶基因（ＬＰＬ）、载脂蛋白Ｂ（ＡｐｏＢ）、载脂蛋白Ｅ　中国糖尿病指南指出２０岁以上糖尿病患病率９．７％，　大约１０人有１人是糖尿病，这是令人震惊的事实！　糖尿病分为１型糖尿病、２型糖尿病、妊娠期糖尿病、　其他特殊类型糖尿病四种。其中２型糖尿病占９５％。　２型糖尿病发病原因不明，但公认的是遗传和外界因　素互相作用的结果。在２型糖尿病发病之前，可以通　（ＡｐｏＥ）、解偶联蛋白３基因（ＵＣＰ３）、解偶联蛋白２　基因（ＵＣＰ２）、雌激素受体（ＥＳＲ１）、细胞毒性Ｔ淋巴　细胞相关抗原４基因（ＣＴＬＡ４）、Ｅ一选择素（ＳＥＬＥ）、　白细胞介素１（ＩＬ１Ａ）。在这ｌ６种基因中，大体有五　过糖尿病基因检测进行评估和预防。所谓糖尿病基　因检测，是指通过基因芯片等方法对细胞中的ＤＮＡ　分子进行检测，并分析被检测者所含糖尿病致病基　因、疾病易感性基因等情况的一种技术。　１　２型糖尿病基因检测现状　类。第一，血胰岛素抵抗相关基因：ＭＴＨＦＲ，ＡＤＩ—　ＰＯＱ，ＣＡＰＮ一１Ｏ。第二，胰岛Ｂ细胞功能相关基因：　ＵＴＳ２，ＳＵＲ１，ＶＤＲ。第三，与肥胖相关基因：ＬＥＰ，　ＩＪＰＬ，ＡｐｏＢ，ＡｐｏＥ，ＵＣＰ３，ＵＣＰ２。第四，免疫调节相关　基因：ＣＴＬＡ４，ＳＥＬＥ，ＩＬｌＡ。第五，ＥＳＲ１。　目前糖尿病公认的主要易感因素有：年龄、糖耐　量减低（ＩＧＴ）或空腹血糖受损（ＩＦＧ）、糖尿病家族　史、现代的生活方式以及肥胖等。其中糖尿病家族　２　２型糖尿病基因检测报告单　２型糖尿病基因检测通过检测报告单显示。笔　者选用的是联合基因集团的基因检测报告单。选择　它的原因是：联合基因以４　０００多项的基因专利技　史一般指父母和同胞兄弟姐妹有无糖尿病。２型糖　尿病的发生、发展分为４个阶段：遗传易感性——胰　岛素抵抗和Ｂ细胞功能缺陷——糖耐量减低和空腹　术，高居国内第一位，且２００２年联合基因已经拥有　了７９条糖尿病相关基因的专利。联合基因集团是　我国第一个也是目前我国领航基因企业，糖尿病基　因报告分为６个梯度：一一，一，＋一，＋，＋＋，＋　血糖受损——临床糖尿病。糖尿病的基因检测与此　有关。常见的２型糖尿病基因有１６种：亚甲基四氢