生命早期负性应激对大鼠实验性牙周炎的影响

生命早期负性应激对大鼠实验性牙周炎的影响

２３１，２１，２

刘飞１，　张林　肖刚　郭青玉＊

（１．西安交通大学口腔医学院陕西省牙颌疾病临床研究中心　陕西西安　７１０００４；

２．西安交通大学口腔医院儿童牙病科　陕西西安　７１０００４；

）３．河南科技大学第一附属医院口腔科　河南洛阳　４７１０００

［探究生命早期负性应激对大鼠成年后实验性牙周炎进展的影响。方法：在３周龄雄性Ｓ摘要］Ｄ大鼠建立　目的：，）慢性温和不可预知应激（模型，以正常饲养大鼠为对照。应激５周后对所ｕｎｒｅｄｉｃｔａｂｌｅｃｈｒｏｎｉｃｍｉｌｄｓｔｒｅｓｓＵＣＭＳ　　　ｐ有大鼠右上第二磨牙进行实验性牙周炎处理。通过行为学实验评估大鼠情绪状态；ＥＬＩＳＡ检测血清皮质酮、ＩＬ－测量牙槽骨丧失量。结果：１Ｆ－α水平；Ｐ＜０．ＨＥ染色观察破骨细胞数目，ＵＣＭＳ大鼠出现糖水偏好下降（β和ＴＮ

）、）。等抑郁样行为；强迫游泳实验中不动时间增加（血清皮质酮及炎性细胞因子水平升高（００１０１０５）Ｐ＜０．Ｐ＜０．；其次为对照组牙周炎侧，再次为对照组正常侧（ＣＭＳ大鼠牙周炎侧牙槽骨吸收量最大，００１）ＨＥ染色可见ＵＰ＜０．）。血清皮质酮含量与牙周破坏程度呈正相关关系（。结论：破骨细胞数目变化趋势与之类似（００１０５）Ｐ＜０．Ｐ＜０．生命早期负性应激可能通过ＨＰ加剧大鼠实验性牙周炎病变程度。Ａ轴增强体液免疫，［关键词］　生命早期　应激　实验性牙周炎　大鼠

（）［文献标识码］文章编号］中图分类号］７８１．４　　［６７１—７６５１２０１７０３—０２４４—０５　Ａ　　［　１　Ｒ［］／ｄｏｉ０．１３７０１．ｃｎｋｉ．ｋｘ．２０１７．０３．００３　１ｊｑｙｙｊ

１２

，ＩＵ　ｅｉｉｎ３，Ｉ－ＥｆｆｅｃｔｏｆＥａｒｌＬｉｆｅＳｔｒｅｓｓｏｎｔｈｅＰｒｏｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥｘｅｒｉｍｅｎｔａｌＰｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓｉｎＲａｔｓ．ＬＦＺＨＡＮＧ　ＬＸ　　　　　　　　　　　ｙｇｐ　１２１２＊

ｕｏＡＧＧＱ．１．ＣＲＣｏＳＰＤａＭＯ　ａｎＵＯ　ｉｎｌｉｎｉｃａｌｅｓｅａｒｃｈ　ｅｎｔｅｒｈａｎｘｉｒｏｖｉｎｃｅｒ　ｅｎｔａｌｎｄ　ａｘｉｌｌｏａｃｉａｌ　　　　　ｆｆ　ｇ，ｇ－ｙｆＤｉｓｅａｓｅｓ，ｏｌｌｅｅｔｏｍａｔｏｌｏｉｎｉａｏｔｏｎｎｉｖｅｒｓｉｔｉｎ１０００４，ｈｉｎａ；ｅａｒｔｍｅｎｔｅｄｉａｔｒｉｃ２．ＣｏＳＸ＇ａＪＵＸ＇ａ７ＣＤｏＰ　　　　ｇｇｙ，ｇ　ｙ．ｐｆ　ｆ　

，

，

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Ｄｅｎｔｉｓｔｒ７３．ＣｏＳＸ＇ａＪＵＸ＇ａＣＤｏＳｏｌｌｅｅｔｏｍａｔｏｌｏｉｎｉａｏｔｏｎｎｉｖｅｒｓｉｔｉｎ１０００４，ｈｉｎａ；ｅａｒｔｍｅｎｔｔｏｍａ－　　　　ｙ，ｆ　ｆ　ｇｇｙ，ｇ　ｙ．ｐｏｌｏｉｒｓｔｏｓｉｔａｌｅｎａｎ　ｎｉｖｅｒｓｉｔｃｉｅｎｃｅｎｄ　ｅｃｈｎｏｌｏｕｏａｎ７１０００，ｈｉｎａｉｌｉａｔｅｄ　ｔＦＡＨｏＨＵｏＳａＴＬＣ　　　ｇｙ，ｐｙｇｙ，ｙｇ４ｆｆｆ　ｆ　　

］：［ｂｓｔｒａｃｔｌｉｆｅｓｔｒｅｓｓｏｎｔｈｅｒｏｒｅｓｓｉｏｎｏｆｅｘｅｒｉｍｅｎｔａｌｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓｉｎｂｅｃｔｉｖｅＴｏｅｘｌｏｒｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｅａｒｌＡ　　　　　　　　　Ｏ　　　　　ｐｇｐｐｐｙｊ　：ｗａｓｓｕｆｍａｌｅＳＤｒａｔｓｏｆ３ｗｅｅｋｓｏｌｄｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｗｏｒｏｕｓｒａｎｄｏｍｌ．Ｏｎｅｒｏｕｒａｔｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｗｅｎｔ　　　　　　　　　　　　　ｙｇｐｙｇｐ　　－ｅｒｅｄｔｈｅｕｎｒｅｄｉｃｔａｂｌｅｃｈｒｏｎｉｃｍｉｌｄｓｔｒｅｓｓ（ＵＣＭＳ）ｐｒｏｃｅｄｕｒｅａｎｄｔｈｅｏｔｈｅｒｗａｓｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｒｏｕ．Ａｆｔｅｒｆｉｖｅｆ　　　　　　　　　　　　　ｐｇｐ，ｗｅｅｋｓ＇ＵＣＭＳｒｏｃｅｄｕｒｅａｌｌｒａｔｓｒｅｃｅｉｖｅｄｔｈｅｏｅｒａｔｉｏｎｏｆｅｘｅｒｉｍｅｎｔａｌｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ（ＥＰ）．Ｔｈｅｎｔｈｅｂｅｈａｖｉｏｒａｌ　　　　　　　　　　ｐｐｐｐ，，ＥＬＩＳＡ，ａｎｄＨＥｓｔａｉｃｔｏｋｉｎｅｓｂｔｅｓｔｓｓｕｃｒｏｓｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｔｅｓｔｓｅｒｕｍｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅ（ＣＯＲＴ）ａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒ　　　　　　　ｐｙｙｙ　　－：，ｅｎｈａｎｃｅｄｉｍｍｏｂｉｌｗｅｒｅｅｒｆｏｒｍｅｄ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅＵＣＭＳｒａｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈｅｄｅｒｅｓｓｉｏｎ－ｌｉｋｅｂｅｈａｖｉｏｒｓｉｎｃｌｕｄｉｎｉｎｎ　　　　　　　　ｐｐｇｇ　　－）），ｉＰ＜０．Ｐ＜０．ｔｅｓｔ（ｔｉｍｅｉｎｆｏｒｃｅｄｓｗｉｍｍｉｎｔ０１ａｎｄｌｏｗｅｒｓｕｃｒｏｓｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｔｅｓｔ（００１．Ｓｅｒｕｍｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅ　　　　　　　　ｙｇｐ　　，）ｒａｔｓｗｉｔｈＥＰｓｈｏｗｅｄａｎｏｂｖｉｏｕｓａｌｖｅｏｌａｒｂｏｎｅ０５．ＩｎＨＥｓｔａｉｎｉｎＩＬ－１ｎｄＴＮＦ－αｗａｓａｌｓｏｅｌｅｖａｔｅｄ（Ｐ＜０．　　　　　　　　　　　　ｇβａｌｏｓｓｃｏｍａｒｅｄｗｉｔｈｔｈａｔｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒａ－ｌａｔｅｒａｌｌｅｆｔｓｉｄｅ．ＴｈｅａｌｖｅｏｌａｒｂｏｎｅｌｏｓｓｉｎｔｈｅＵＣＭＳｒａｔｓｗａｓｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌ　　　　　　　　　　　　　　　　　ｐｇｙ）ｍｏｒｅｓｅｖｅｒｅｃｏｍａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｒｏｕ００１．Ｔｈｅｓａｍｅｔｅｎｄｅｎｃｗａｓｆｏｕｎｄｉｎｔｈｅｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｎｕｍｂｅｒｓ（Ｐ＜０．Ｐ　　　　　　　　　　　　ｐｇｐ（ｙ　））：Ｐ＜０．００１．ＰｏｓｉｔｉｖｅｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｗａｓｆｏｕｎｄｂｅｔｗｅｅｎｓｅｒｕｍｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅａｎｄｓｅｖｅｒｉｔｏｆＥＰ（０５．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ＜０．　　　　　　　　　ｙ　ＥａｒｌｌｉｆｅｓｔｒｅｓｓｃｏｕｌｄａｒａｖａｔｅｔｈｅｒｏｒｅｓｓｉｏｎｏｆＥＰ，ｗｈｉｃｈｍｉｈｔｂｅｒｅｕｌａｔｅｄｂＨＰＡａｘｉｓａｎｄｈｕｍｏｒａｌｉｍｍｕ　　　　　　　　　　　　　　　ｙｇｇｐｇｇｇｙ　　－ｉｔ．ｎｙ

［］Ｋｅｗｏｒｄｓａｒｌｌｉｆｅｔｒｅｓｓｘｅｒｉｍｅｎｔａｌｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓａｔｓ　Ｅ　Ｓ　Ｅ　　Ｒｙｐｐｙ　　

编号：基金项目　陕西省科技统筹创新工程计划项目（０１５ＫＴＣ０３２

）－０７

，作者简介　刘飞（男，陕西西安人，博士在读，研究方向为９８９～）１

儿童口腔医学。

电话：７２１５０７６０２９－８＊通讯作者　郭青玉，

　　牙周炎作为一种牙周组织炎症性破坏性疾病，

主要临床表现包括牙龈出血、深牙周袋形成、牙槽骨吸收和牙齿松动脱落等。牙周炎不但是导致成人失牙的主要原因，还与许多全身性疾病，如糖尿病、心脑血管疾病、结缔组织病、肥胖、早产等有密切关系。

０１７年３月第３３卷第３期　口腔医学研究２２４５对所有实验动物进行糖水偏好实验。测试前１４ｈ禁水，测试时对每只大鼠给予双瓶饮水，一瓶为１％称量测蔗糖溶液，一瓶为自来水。测试时间为１ｈ，试前后各瓶质量，即饮水消耗量，计算糖水偏好指（糖水消数。糖水偏好指数＝１００％×糖水消耗量／。耗量＋纯水消耗量）

５　建立大鼠实验性牙周炎模型　应激５周后对１．

所有大鼠右上第二磨牙进行丝线结扎以建立实验性牙周炎模型，以左上第二磨牙作为自身空白对照。大鼠仰卧位固定，０％水合氯醛腹腔麻醉后，１４－０非吸收性外科缝线（扬州富达医疗器械有限公司）结扎于右上第二磨牙颈部龈沟内，每周检查１次，若丝

６］

。线脱落则再次结扎［

Ｋａｓｓｅｂａｕｍ等系统性回顾了从１９９０～２０１０年重度

牙周炎在全球范围内的流行状况，结果显示：重度牙周炎已成为全球第六大最流行的疾病，在１５岁以上／人群中，其２０１０年的新增病例人数为７０１１０万；而如果涵盖轻度和中１％左右，２０１０年的患病率为１

［］

度牙周炎，其患病率可能将超过５０％１。受局部和全身等多种　　牙周炎的发病机制复杂，

因素影响。牙菌斑及细菌代谢产物是引发牙周炎的

２］

，吸烟、饮酒、糖尿病、合并感染（如疱疹始动因子［

病毒）等，也可能加快或加重牙周炎的发生、发

３，４］

。精神心理因素与许多慢性疾病的病理生理展［

过程密切相关，其中包括牙周炎。但是精神心理应激是否为牙周炎确切的危险因素，目前尚无定论。其中７项ｅｒｕｚｚｏ等对符合纳入标准的１４项研究（Ｐ

为病例对照研究，６项为横断面研究，１项为队列研究）进行系统评价，７．１％发现精神心理因素与牙周５炎发病存在明显的相关性，而１４．２％则为阴性结

５］

。目前，果［关于二者关系的基础研究较少，且其机

１．６　行为学测试　实验性牙周炎手术后第３周进

，和强迫游泳实验行旷场实验（ｎｆｉｅｌｄｔｅｓｔＯＦＴ）ｏｅ　　ｐ，。２个测试之间间隔３（ｏｃｅｄｓｗｉｍｍｉｎｔｅｓｔＦＳＴ）ｆ　ｇ　

。ＯＦＴ将大鼠置于１００ｃｍ×１００ｃｍ×４５ｃｍ的不ｄ

由置于旷场箱上透明树脂玻璃箱内，自由活动１ｈ，方的录像追踪系统记录其运动轨迹。分析指标包括：前１进入中央区０ｍｉｎ运动距离，１ｈ运动距离，次数和中央区停留时间百分比。ＦＳＴ装置为直径高３测试时将大鼠置于５ｃｍ、５ｃｍ的有机玻璃桶，２

水温２记录其不桶内（水深２５ｃｍ、２±１℃）６ｍｉｎ，动时间。实验结束后将动物立即擦干，放回原笼饲养。

，Ｃ及炎性７　血清皮质酮（ｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｎｅＯＲＴ）１．ｃ

细胞因子水平测定　ＦＳＴ结束后２ｈ内，０％水合１／氯醛腹腔麻醉大鼠，摘眼取血，０００ｒｍｉｎ４℃下３，取上清冻存－８离心１５ｍｉｎ０℃。按照ＥＬＩＳＡ试剂盒说明书操作，测定血清ＣＯＲＴ，ＩＬ－１β以及Ｆ－α含量。ＴＮ

８　组织病理学检测　取血后颈椎脱位法处死大１．鼠，分离上颌磨牙区牙槽骨，Ｄ４％多聚甲醛固定，Ｅ－酒精梯度脱水，石蜡包埋，顺牙体长轴进ＴＡ脱钙，

行近远中方向连续切片，进行ＨＥ染色。光镜下，（日本）观察牙周组织病ｉｃｏｎＥＣＬＩＰＳＥＴＳ－１００，Ｎ　理学改变，以牙槽嵴顶至釉牙骨质界的距离评估牙槽骨丧失量。高倍视野下将牙周膜置于视野直径，观察上颌第二磨牙远中牙槽嵴顶下３个视野中的破骨细胞数。

数９　统计分析　使用ＳＰＳＳ１３．０进行统计分析，１．

糖水偏据以均值±标准误表示。体重、ＦＴ、ＦＳＴ、Ｏ好实验及Ｅ牙槽骨丧ＬＩＳＡ采用两独立样本ｔ检验；失量及破骨细胞数比较采用单因素方差分析，ｏｎＢ－制并不明确。

　　本研究拟通过建立大鼠慢性温和不可预知应激

，Ｕ（模型，ｎｒｅｄｉｃｔａｂｌｅｃｈｒｏｎｉｃｍｉｌｄｓｔｒｅｓｓＣＭＳ）ｕ　　　ｐ探究生命早期负性应激与成年后实验性牙周炎严重程度的相关性。

１　材料与方法

，白介素（１　主要试剂　大鼠皮质酮、ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１．ｉ，、及肿瘤坏死因子（ｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒＩＬ）－１ｔ　　β

上海优选生物科技有限ＴＮＦ）－αＥＬＩＳＡ试剂盒（。公司）

２　实验动物及分组　雄性３周龄Ｓａｕｅ－１．ｒｇｐ

（，大鼠２平均体重（购于ＤａｗｌｅＳＤ）０只，０±５）６ｙｇ陕陕西省医学实验动物中心，合格证编号：ＣＸＫ（Ｓ。将大鼠随机分为两组，分每组１２０１２－００３）０只，

别作为Ｕ对照组于４只同笼饲ＣＭＳ组和对照组，养，室温（ＣＭＳ组单笼单只饲养。饲养环境：２±Ｕ２）℃，湿度在（日光灯采光，正常光暗周１０±５）％；６

（，自由获取食期为１２ｈ∶１２ｈ７：００ａ．ｍ～７：００ｍ）ｐ．物和水。

３　建立大鼠ＵＣＭＳ模型　对ＵＣＭＳ组大鼠每１．

禁水２日给予慢性温和应激，处理包括：禁食２４ｈ，４倾斜笼子１持续黑暗２持续光照２ｈ，４５°２ｈ，４ｈ，４，

昼夜颠倒，空笼子１各应激按随湿笼子１２ｈ，２ｈ等，机化方法排表，避免动物预料其出现而适应。对照组大鼠饲养于类似环境而不进行任何干预。每周于固定时间４　糖水偏好实验　应激开始后，１．

２４６

ｆｅｒｒｏｎｉ检验进行两两比较；ｅａｒｓｏｎ相关性检验分Ｐ析血清Ｃ破骨细胞数之间的ＯＲＴ与牙槽骨吸收量、相关惯性；检验水准α０５。＝０．

２　实验结果

１　旷场实验　ＵＣＭＳ组及对照组大鼠在ＯＦＴ２．

）、前１总运动距ｔ＝０．Ｐ＝０．０ｍｉｎ运动距离（６７，５１２）、进入中央区的次数（离（ｔ＝０．Ｐ＝０．ｔ＝０．２２２，８２７及中央区停留时间百分比（Ｐ＝０．ｔ＝０．３３２，７４４）

）之间均无统计学差异。表明两组大Ｐ＝０．４４３７８４，鼠的探索和运动能力具有可比性，见图１。

，ｏｕｒｎａｌｏｆＯｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＲｅｓｅａｒｃｈＭａｒ．２０１７，Ｖｏｌ．３３，Ｎｏ．３　Ｊ　　　　

表２　血清ＣＯＲＴ、ＩＬ－１Ｆ－α含量β以及ＴＮ

ａｂｌｅ２　ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｓｅｒｕｍＣＯＲＴ，ＩＬ－１ｎｄＴＮＦ－αｌｅｖｅｌｓｂＴ　　　　　　ｙβａ

ＥＬＩＳＡ指标

　／·Ｌ－１ＣＯＲＴｇμ

　／·Ｌ－１ＩＬ－１ｇβμ　／·Ｌ－１ＴＮＦ－αｇμ珚±ｘｓ对照组１１．５１±２．３９　５．９２±０．４３　４１．４３±２．８８　

ＣＭＳ组Ｕ

１７．９２±１．２６＊８．７８±０．５８＊＊５３．９５±３．２１＊

０５，０１　注：＊Ｐ＜０．＊＊Ｐ＜０．

图１　旷场实验ｉ．１　ＯｅｎｆｉｅｌｄｔｅｓｔＦ　　ｐｇ

２．２　强迫游泳实验　与对照组相比，ＣＭＳ组大Ｕ

鼠在Ｆｔ＝３．Ｐ＝０．ＳＴ中不动时间显著增加（５４５，），表现出抑郁样行为，见图２。００３

两组大鼠的糖水３　糖水偏好实验　应激开始前，２．

偏好基线值无显著差异，应激开始后１周，ＣＭＳＵ组大鼠糖水偏好降低，随应激时间增加糖水偏好指数下降越明显，至应激３周后组间出现统计学差异），（见图３。Ｐ＜０．００１

图４　苏木精－伊红染色及牙槽骨丧失量比较

Ｆｉ．４　ＭｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆａｌｖｅｏｌａｒｂｏｎｅｌｏｓｓｂＨＥｓｔａｉｎｉｎ　　　　　　ｇｙｇ　

图５　破骨细胞计数ｉ．５　ＮｕｍｂｅｒｓｏｆｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓＦ　　ｇ

图２　强迫游泳实验　　图３　糖水偏好实验

Ｆｉ．２　Ｆｏｒｃｅｄｓｗｉｍｍｉｎｔｅｓｔｉ．３　Ｓｕｃｒｏｓｅｒｅｆｅｒｅｎｃｅｔｅｓｔ　　　Ｆ　　ｇｐｇｇ　

２．４　血清ＣＯＲＴ、ＩＬ－１Ｆ－α含量　与β以及ＴＮ

对照组相比，ｔ＝２．ＣＭＳ组大鼠血清中ＣＯＲＴ（Ｕ）（、以Ｐ＝０．ｔ＝０．Ｐ＝０．０３９１Ｌ－１４１３，００１）３７２，Ｉβ

（）及ＴＮ含量显著升高，见ｔ＝２．Ｐ＝０．Ｆ－α９０５，０１１表１。

２．５　ＨＥ染色及牙槽骨丧失量比较　ＵＣＭＳ组及

对照组大鼠右上第二磨牙均出现牙龈红肿或糜烂、探诊出血等表现；作为自身空白对照的左上第二磨牙牙龈色、形、质未见明显异常。ＨＥ染色可见，空白对照牙牙龈上皮结构完整，结合上皮附着于釉牙骨质界附近，固有牙槽骨形态结构完整，结缔组织内。实验性牙周炎未见明显的炎症细胞浸润，见图４ａ牙齿的牙龈上皮有大量炎症细胞浸润，结合上皮向

０１７年３月第３３卷第３期　口腔医学研究２７２４

一方面可以造　　通过对大鼠磨牙进行丝线结扎，

成牙龈的机械刺激，另一方面使得牙周局部菌斑堆积，促进牙周组织炎症发生。在本研究中，实验性牙周炎较对侧空白对照牙位，均出现了炎细胞浸润、胶原纤维变性溶解、破骨细胞活跃和牙槽骨吸收等病理表现，且ＵＣＭＳ组大鼠的牙周炎严重程度重于对照组的牙周炎侧。说明慢性应激加重了牙周组织的破坏。但ＵＣＭＳ组大鼠的自身对照牙并未出现牙周炎或牙龈炎的临床表现，说明慢性应激本身并不会导致牙周炎发生，而是在有局部刺激因素的情况下加速或加重牙周炎的进展。

慢性应激可以通过机体免　　作为一种负性刺激，疫系统的应答，影响细胞因子释放水平，改变了疾病的病理生理进程，或影响病灶愈合。对于慢性应激如何影响实验性牙周炎的进展，本文从ＣＯＲＴ和炎性细胞因子两方面进行测定。将机体处于应激状态时，下丘脑－垂体－肾上腺（ｏｔｈａｌａｍｉｃ－ｐｉｔｕｉｔａｈｐｙ－，ＨＰ轴首先被激活，慢性应激会使ｒ－ａｄｒｅｎａｌＡ）ｙ

交感神经系统兴奋，促肾上Ａ轴功能持续亢进，ＨＰ

腺皮质激素释放激素、促肾上腺皮质激素相继增加，最终ＣＯＲＴ水平升高。ＣＯＲＴ分泌增多抑制了细胞免疫而增强了体液免疫，引起ＩＬ－１Ｆ－αβ和ＴＮ

１２，１３］

，分泌增加，从而加剧了局部牙周组织的破坏［

根方增殖，胶原纤维变性，牙槽嵴顶高度降低，见图、。测量发现牙周炎侧牙槽骨丧失量显著多于ｂ４ｃ４

）；对侧（Ｐ＜０．００１ＣＭＳ组牙槽骨丧失量多于对照Ｕ）。，见图４组牙周炎侧（Ｐ＜０．０５ｄ

２．６　破骨细胞计数　图５ａ所示为牙槽骨中的骨吸

收陷窝和破骨细胞，破骨细胞呈典型的多核巨细胞形态。经计数统计后发现牙周炎侧破骨细胞数目显，且Ｕ著多于对侧（Ｐ＜０．００１）ＣＭＳ组破骨细胞数

），见图５多于对照组（Ｐ＜０．０５ｂ。２．７　血清ＣＯＲＴ与牙周破坏程度的相关性检测　进一步分析血清中ＣＯＲＴ与大鼠实验性牙周炎破坏程度的相关性，结果发现ＣＯＲＴ与术侧牙槽骨吸；收量呈显著正相关（ｒ＝０．Ｐ＝０．６１５，０３３）ＯＲＴＣ

与术侧破骨细胞数也呈显著正相关关系（ｒ＝０．５７９，）。Ｐ＝０．０４８３　讨论

但是它　　牙周炎是一种高发的慢性进展性疾病，

不是仅局限于局部组织的炎症反应，而是与全身多种疾病密切相关。已有较多国内外临床研究表明，精神心理因素所致的疾病，如抑郁症和焦虑等，与牙周炎患病之间可能存在相关关系。长期处于高度紧张、压抑的生活环境，会促进牙周炎的发生或发展。尤其是发生与生命早期或成年期的　　心理应激，慢性应激，可以导致机体出现抑郁状态。ＵＣＭＳ是一种慢性心理应激动物模型，具有良好表观效度、结

７］

。在本研究中，通过对３周龄构效度和预测效度［

表现为炎细胞浸润、破骨细胞活跃及牙槽骨的吸收。参考文献

，［］ａｓｓｅｂａｕｍ　ＮＪＢｅｒｎａｂｅＥ，ＤａｈｉａＭ，ｅｔａｌ．Ｇｌｏｂａｌｂｕｒｄｅｎ１　　　　　Ｋｙ

ｏｆｓｅｖｅｒｅｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓｉｎ１９９０－２０１０：ａｓｓｔｅｍａｔｉｃｒｅｖｉｅｗ　　　　　　ｐｙ］，）ａｎｄｍｅｔａ－ｒｅｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ．ＪＤｅｎｔＲｅｓ２０１４，９３（１１∶１０４５　　　ｇ－１０５３

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ａｔｉｃｒｅｖｉｅｗｏｆｓｔｒｅｓｓａｎｄｓｃｈｏｌｏｉｃａｌｆａｃｔｏｒｓａｓｏｓｓｉｂｌｅｒｉｓｋ　　　　　　　　　ｐｙｇｐ］，ｆａｃｔｏｒｓｆｏｒｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ．ＪＰｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ２００７，７８　　　　ｐ（）８∶１４９１－１５０４

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［］，７ｉｌｌｎｅｒＰ．Ｖａｌｉｄｉｔｒｅｌｉａｂｉｌｉｔａｎｄｕｔｉｌｉｔｏｆｔｈｅｃｈｒｏｎｉｃｍｉｌｄ　Ｗ　　　　　ｙｙｙ　　

幼鼠施加慢性的温和刺激因子，使动物产生躯体不适并进一步出现心理状态的改变。且由于这些刺激因子为随机排列，避免了动物因记忆而对刺激适应，保证了该模型的成功率。

运动功能ＦＴ是动物在新鲜环境中探索能力、　　Ｏ

［］

和警觉心理等多方面的综合反应。Ｚｈａｉ等８发现探ＣＭＳ可导致大鼠在旷场中运动的总路程减少、Ｕ

索行为减少等；ｅＶｙ等的实验中出生后应激反而增加了大鼠进入中央区的次数、穿梭总次数和停留在

９］１０］

；，而与一些研究者的结果类似［中央区的时间［

在本实验中我们并未发现ＵＣＭＳ大鼠在１ｈ的旷

场行为发生明显变化，表明两组大鼠的短时运动能力具有可比性。而ＵＣＭＳ大鼠在ＦＳＴ中的不动时

１１］

。间显著增加则表现出其放弃挣扎的绝望样状态［

糖水消耗是另一个常用于评价动物抑郁状态的指标。随着慢性应激的进展，ＣＭＳ大鼠的糖水偏好Ｕ指数降低，表现为抑郁症的核心症状之一，即快感缺

７］

。乏［

２４８

：ｓｔｒｅｓｓｍｏｄｅｌｏｆｄｅｒｅｓｓｉｏｎａ１０－ｙｅａｒｒｅｖｉｅｗａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　　　　　　　ｐ［］）（），Ｊ．ＰｓｃｈｏｈａｒｍａｃｏｌｏＢｅｒｌ９９７，１３４４∶３１９－３２９１ｙｐｇｙ（［］，／Ｍ８ｈａｉＸＪＣｈｅｎＦ，ＣｈｅｎＣ，ｅｔａｌ．ＬＣ－ＭＳＳｂａｓｅｄｓｔｕｄｉｅｓ　Ｚ　　　　　　

ｏｎｔｈｅａｎｔｉ－ｄｅｒｅｓｓａｎｔｅｆｆｅｃｔｏｆｈｅｒｉｃｉｎｉｎｔｈｅｃｈｒｏｎｉｃｕｎ　　　　　　　　　ｐｙｐ－，ｅｄｉｃｔａｂｌｅｍｉｌｄｓｔｒｅｓｓｒａｔｍｏｄｅｌ［Ｊ］．ＪＥｔｈｎｏｈａｒｍａｃｏｌｒ　　　　　ｐｐ

（）２０１５，１６９３∶３６３－３６９

［９］ｅＬＴ，ＲｏｓａＨＺ，ＢａｒｃｅｌｏｓＲＣ，ｅｔａｌ．Ｓｔｒｅｓｓｄｕｒｉｎｔｈｅ　Ｖ　　　　ｙｇ　　

ｅｓｔａｔｉｏｎａｌｅｒｉｏｄｍｏｄｉｆｉｅｓｕｓ＇ｅｍｏｔｉｏｎａｌｉｔａｒａｍｅｔｅｒｓａｎｄ　　　　ｇｐｐｐｙｐ　］ｆａｖｏｒｓｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｍｏｒｈｉｎｅｉｎａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｒａｔｓ［Ｊ．Ｂｅｈａｖ　　　　　　ｐｐ，（）ＢｒａｉｎＲｅｓ２０１６，２９６３∶４０８－４１７　

［］１０ａｎＣ，ＬｉＭ，ＳａｗｍｉｌｌｅｒＤ，ｅｔａｌ．Ｃｈｒｏｎｉｃｍｉｌｄｓｔｒｅｓｓ－ｉｎ　Ｗ　　　　　ｇ　－ｄｕｃｅｄｃｈａｎｅｓｏｆｒｉｓｋａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｂｅｈａｖｉｏｒｓｉｎｍｉｃｅａｒｅｒｅ　　　　　　　　　ｇｐ－ｖｅｎｔｅｄｂｃｈｒｏｎｉｃｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈｆｌｕｏｘｅｔｉｎｅｂｕｔｎｏｔｄｉａｚｅａｍ　　　　　　　ｙｐ　［］，（）Ｊ．ＰｈａｒｍａｃｏｌＢｉｏｃｈｅｍＢｅｈａｖ２０１４，１１６１∶１１６－１２８　　

，ｏｕｒｎａｌｏｆＯｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＲｅｓｅａｒｃｈＭａｒ．２０１７，Ｖｏｌ．３３，Ｎｏ．３　Ｊ　　　　

［］，１１ｉｕＦ，ＭａＪＺｈａｎＨ，ｅｔａｌ．Ｆｌｕｏｒｉｄｅｅｘｏｓｕｒｅｄｕｒｉｎｄｅ　Ｌ　　　　　ｇｐｇ　　－］ｖｅｌｏｍｅｎｔａｆｆｅｃｔｓｂｏｔｈｃｏｎｉｔｉｏｎａｎｄｅｍｏｔｉｏｎｉｎｍｉｃｅ［Ｊ．　　　　　　　ｐｇ，（）ＰｈｓｉｏｌＢｅｈａｖ２０１４，１２４１∶１－７　ｙ

［］１２ｕｎ　ＷＬ，ＣｈｅｎＬＬ，ＺｈａｎＳＺ，ｅｔａｌ．Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｃｔｏ　Ｓ　　ｇｙｙ　　－，，ｋｉｎｅｓａｄｉｏｎｅｃｔｉｎｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｃｃｏｎｔｒｏｌ　　　　ｐａｆｔｅｒｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｉｎａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｔｅ２ｄｉａｂｅｔｅｓ　　　　　　　ｐｐｙｐ］，ａｎｄｃｈｒｏｎｉｃｅｒｉｏｄｏｎｔｉｔｉｓ［Ｊ．ＩｎｔｅｒｎＭｅｄ２０１１，５０（１５）∶　　　ｐ１５６９－１５７４

［］李威，李一梓，等．牙周炎伴Ｃ１３ＯＰＤ患者血清２５－（ＯＨ）　韩静，

］口腔医学研究，Ｌ－６水平检测的研究［Ｄ、ＴＮＦ－α和ＩＪ．（）０１４，３０８∶７４３－７４６２

］［收稿日期：０１６－１０－２５２

（本文编辑　汪喻忠）

唇腭裂易感基因研究取得新进展

　　武汉大学口腔医学院边专教授团队和安徽医科大学孙良丹教授团队合作完成的唇腭裂易感基因研究取得新进展，相关成果以“ａｌａｔｅｉｄｅｎｔｉｆｆｏｕｒｔｅｅｎｅｎｏｍｅ－ｗｉｄｅａｎａｌｓｅｓｏｆｎｏｎ－ｓｎｄｒｏｍｉｃｃｌｅｆｔｌｉｗｉｔｈＧ　　　　　　　ｐｙｙｙｐ　　”（《非综合征型唇腭裂全基因组关联分析发现了１ｅｎｅｔｉｃｈｅｔｅｒｏｅｎｅｉｔｎｏｖｅｌｌｏｃｉａｎｄ４个新的易感位点和　　　　ｇｇｙ

）为题，遗传异质性》于２０１７年２月２４日在Ｎａｔｕｒｅ子刊ＮａｔｕｒｅＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ在线发表。该研究受国家　）、、国家重点研发计划（自然科学基金（１１２０１０８０１０，８１４７０７２７，８１３００８７０ａｎｄ８１５７１４３８０１６ＹＦＣ１０００５０５）８２　

）等多项基金资助。７３前期项目（０１２ＣＢ７２２４０４９２其引起的软组织畸形和不同程度的骨组织缺损，会对患儿的进　　唇腭裂是人类最常见的颅颌面出生缺陷，

食、面部美观、语音发展、心理和社会交往等方面造成严重影响，给患儿家庭和社会带来了巨大的医疗负担。唇腭裂的发生与不同的人种、环境、社会经济条件等多种影响因素相关，中国新生儿唇腭裂发生率约为１．／，Ｎ为发病率最高的地区之一，非综合征型唇腭裂（４２１０００，ｏｎ－ＳｎｄｒｏｍｉｃＣｌｅｆｔＬｉｗｉｔｈＰａｌａｔｅＳＣＬＰ）Ｎ　　　ｙｐ　是最常见且最严重的亚型，因此，对其发病机制的研究对于提高我国出生人口质量有着重要的意义。其中，遗传因素发挥了重要作用。边专教授课题ＳＣＬＰ是在遗传因素与环境因素相互作用下发生的，　　Ｎ

，组利用目前已知最大的唇腭裂研究队列，采用全基因组关联分析（ｅｎｏｍｅ－ＷｉｄｅＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎＳｔｕｄＧ　　ｙ），发现了１并验证了以往ＧＷＡ在此基础ＧＷＡＳ４个新的ＮＳＣＬＰ相关易感基因，Ｓ报道的１２个易感位点，

之上的跨表型、跨人种的验证分析，进一步提供了有力的遗传学证据，说明唇腭裂的发生在不同的临床表型和不同的人种之间具有较强的遗传异质性。本项目的研究结果不仅加深了对非综合征型唇腭裂遗传机制的认识，也为建立适合中国人群的唇腭裂孕前－围受孕期风险评价指标、预警模型和早期干预防控策略的制定提供依据。