实验名称 蛋白质的沉淀反应 (2课时)
一、实验目的:
①加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识
②区分可逆沉淀作用及不可逆沉淀作用,了解它们在实际工作中的应用
二、实验原理:
多数蛋白质是亲水胶体,当其稳定因素被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后,即沉淀析出。
三、实验仪器、试剂和材料:
1.仪器:试管及试管架、离心机和离心管、药匙。
2.试剂和材料:
蛋白质氯化钠溶液、饱和硫酸铵溶液、硫酸铵粉末、95%乙醇、蛋白质溶液、2%硝酸银溶液、0.5%硝酸铅溶液、1%硫酸铜溶液、10%三氯乙酸溶液、1%乙酸溶液、5%鞣酸溶液、饱和苦味酸溶液。
四、实验步骤
1.蛋白质的盐析作用
取10ml离心管一支,加入蛋白质氯化钠溶液3ml和饱和硫酸铵溶液3ml,混匀,静置数分钟,观察实验现象及结论。离心5分钟(2000r/min),上清液倾入另一只10ml离心管。取少许沉淀,加少量水,搅拌,观察,描述实验现象及结论.向盛上清液的离心管中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止,静置,观察,实验现象
及结论。离心5分钟(2000r/min),弃上清液,加少量水,搅拌,观察实验现象及结论。
2.酒精沉淀蛋白质
取蛋白质氯化钠溶液1ml,加入95%乙醇2ml,摇匀,观察并描述实验现象。离心,取沉淀,加少量水,搅拌,观察沉淀是否溶解,为什么?
3.重金属盐沉淀蛋白质
取3支试管,均加入约1ml蛋白质溶液再分别向3支试管逐滴加入2%硝酸银溶液,0.5%硝酸铅溶液,1%硫酸铜溶液,观察并描述现象。取任意试管离心,取沉淀,加水搅拌,观察并描述实验现象,说明原因。
4.生物碱试剂沉淀蛋白质
取 2支试管,各加蛋白质溶液1ml及1%醋酸2滴,向一管中加5%鞣酸溶液2滴,另一管中加饱和的苦味酸溶液4滴,振荡,观察并描述现象。取任意试管离心,取沉淀,加水搅拌,观察并描述实验现象,说明原因。
5.有机酸沉淀蛋白质
取1支试管,加入蛋白质溶液约1ml,然后滴加10%三氯乙酸溶液3滴,观察并描述现象。离心,取沉淀,加水搅拌,观察并描述实验现象,说明原因。
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