反相高效液相色谱法测定土壤中的恶唑菌酮及其残留

第４６卷第４期　２Ｏ０７年４月　农药　ＡＧＲ０Ｃ髓ⅦＣＡＬＳ　、，０Ｉ＿４６．Ｎｏ．４　Ａｐ１．２００７　反相高效液相色谱法测定．－ｆ－．壤中的嗯唑菌酮及其残留　郝征红　，邓立刚　，赵平娟　（１．山东省农业管理干部学院现代农业技术系，济南２５０１００；２．农业部食品质量监督检验测试中心，济南２５０１ｏｏ）　摘要：建立了利用Ｎｏｖａｐａｋ苯基柱，乙腈．０．０１　ｍｏｌ／Ｌ的磷酸二氢钾（体积比４５：５５，ｐＨ＝３）为流动相，测定土　壤中易保有效成分嚼唑菌酮残留量的反相高效液相色谱分析方法。进行了其最终残留和残留动态分析，其半　衰期为９．５　ｄ，为易消解农药（ｆｌ，２＜３０　ｄ）。　关键词：嚼唑菌酮；反相高效液相色谱；残留　中图分类号：ＴＱ４５０．２　文献标志码：Ａ　文章编号：１　００６．０４１　３（２００７）０４－０２６１－０２　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｅｓｔｉｃｉｄｅ　Ｒｅｓｉｄｕｅｓ　ｏｆ　Ｆａｍｏｘａｄｏｎｅ　ｉｎ　ＳｏｉＩ　ｂｙ　ＲＰ－ＨＰＬＣ　ＨＡＯ　Ｚｈｅｎｇ—ｈｏｎｇ’，ＤＥＮＧ　Ｌｉ—ｇａｎｇ　，ＺＨＡＯ　Ｐｉｎｇ－ｊｕａｎ　（１．Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ａｃ￣ｅｍｙ　ｏｆＡｄｍｉｎｉｓｔｅｒ　ｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｊｉｎａｎ　２５０１００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｆｏｏｄ－ｑｕａｌｉｔｙ　Ｓｕｐｅｒｖｉｓｏｒｙ，Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ＆Ｔｅｓｔｉｎｇ　Ｃｅｎｔｅｒ，　Ｍｉｉｓｔｎｒｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｊｉｎａｎ　２５０１００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｒａｐｉｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｈａｄ　ｂｅｅｎ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ，ｗｈｉｃｈ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓ　ｔｈｅ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｆａｍｏｘａｄｏｎｅ　ｉｎ　ｓｏｉｌ　ｂｙ　ＲＰ－ＨＰＬＣ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｐｈｅｎｙｌ　ｃｏｌｕｍｎ　ａｓ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｃｏｌｕｍｎ．Ｂｙ　ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ　ｆｉｎａｌ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ａｍｏｕｎｔ　ａｎｄ　ｎａｌａｙｚｅｄ　ｔｈｅ　ｄｙｎａｍｉｃ　ｏｆ　Ｆａｍｏｘａｄｏｎｅ　ｒｅｓｉｄｕｅ　ｉｎ　ｓｏｉｌ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｔｈｅ　ｈａｌｆ－ｌｉｆｅ　ｏｆ　Ｆａｍｏｘａｄｏｎｅ　ｉｎ　ｓｏｉｌ　ｗａｓ　９．５　ｄ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｆａｍｏｘａｄｏｎｅ；ＲＰ－ＨＰＬＣ；ｒｅｓｉｄｕｅ　易保（Ｅｑｕａｔｉｏｎ　ｃｏｎｔａｃｔ）是美国杜邦公司生产的一种新型　Ｍｅｔｔｌｅ公司），ＦＳ一４５０型超声波萃取仪（上海生析超声仪器有　杀菌剂，商品为６８．７５％ＷＧ，是由嚼唑菌酮（ｆａｍｏｘａｄｏｎｅ）和　限公司）。嚼唑菌酮标准品（杜邦公司，纯度大于９９％），乙　代森锰锌（ｍａｎｃｏｚｅｂ）复配而成的一种保护性杀菌剂【ｌ】。该农　撑硫脲标准品（杜邦公司，纯度大于９９％）；乙腈（色谱　药施用后药液与植物叶片的蜡质和角质深层紧密结合，附　纯），甲醇（优级纯），重蒸水，磷酸（ＧＲ），磷酸二氢钾　着力强，遇雨水、露水冲刷时药膜还有二次再分布能力，　（ＧＲ）。标准溶液的配制：称取嚼唑菌酮标准品５０　ｒａｇ（精　降低施药成本。同时具有多作用位点杀死病原菌，并能抑　确至０．０００１　ｇ），置于５０　ｍＬ棕色容量瓶内，用乙腈定容，　制病原菌体内丙酮酸氧化的功能，因而防病效果较好。对　得到１　ｏｏｏ　ｍｇ／Ｌ的嚼唑菌酮标准贮备液。临用前用流动相　葡萄霜霉病、马铃薯晚疫病、苹果轮纹病与炭疽病等具有　配成标准工作液。　良好的防治作用，并对锈病、叶枯病等有效【２】。其中有效成　１－２操作步骤　分之一的嚼唑菌酮，其作用机制为抑制络合物Ⅲ处细胞　１－２．１样品的制备　色素Ｃ氧化还原酶的功能，属保护性抑菌剂［３－４】。易保中的　除去土壤中植物根、杂物后，过２０目筛。充分混匀后　代森锰锌为代森锰和锌离子的结合物，属有机硫类保护　按四分法保留５００　ｇ装瓶。于一２０％冰柜中保存备用。　性杀菌剂。其残留分析目前多采用气相色谱法检测［６－７】。　２－２提取　为评价易保在土壤中的安全性，本文建立了测定土壤中嚼　１－唑菌酮的高效液相色谱分析方法，并用此方法完成了土壤　样品中嚼唑菌酮最终残留量的测定与降解动态分析。　称取样品１０　ｇ（精确至０．０１　ｇ）于离心管，加入２　ｍＬ水和　３５　ｍＬ甲醇，超声提取２０　ｍｉｎ，离　Ｌ，２０　ｍｉｎ（８０００　ｒ／ｍｉｎ），倾　出上清液入圆底烧瓶中；残渣再加入甲醇２５　ｍＬ，重复以　１实验部分　１．１仪器与试剂　上提取操作步骤，合并两次滤液，于４０　ｏＣ水浴中旋转蒸　发掉甲醇。用甲醇一磷酸盐（体积比为８．５：１．５）缓冲液冲洗　高压液相色．谱仪（Ｗａｔｅｒｓ公司），Ａｌｌｉａｎｃｅ２６９５溶剂管理系　圆底烧瓶，定容至４　ｍＬ，离　Ｌ，２０　ｍｉｎ（８０００　ｒ／ｍｉｎ），取上清　统（泵、自动进样器、柱温箱）、光电二极管阵列检测器　液进行ＨＰＬＣ分析。　（ＰＤＡＤ），ＺＦＱ８５Ａ型旋转蒸发器（上海医械专机厂），ＬＤ５—２Ａ　型离心机（北京医用离心机厂），ＡＥ２４０型电子天平（瑞士　收稿日期：２００６．０７．１２，修返日期：２００６－１０－１９　１－２．３分析　色谱柱：Ｎｏｖａｐａｋ苯基柱３．９　ｎｌｌｉｌ×１５０　ｒａｍ（４　ｔｔｍ），柱　作者简介：郝征红（１９７１－），女，硕士，讲师，研究方向：食品营养与安全分析。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｅｎｇｈａｏ２２７＠１６３．ｃｏｒｎ。　维普资讯 http://www.cqvip.com

２６２　农药ＡＧＲＯＣＨＥＭＩＣＡＬＳ　第４６卷　温：３５℃，流动相：乙腈－０．０１　ｍｏｌ／Ｌ的磷酸二氢钾（体积比　析其含量【９】，本试验将乙撑硫脲的标准品在曝唑菌酮的色谱　４５：５５），ｐＨ＝３，流速：１．０　ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长：２３０　ｎｍ，保　条件下进样，获得色谱图见图２。由色谱图可知，其出峰时　留时间：ｌ１．６　ｍｉｎ。准确移取４０　Ｌ处理好的试液，在上述　间在２　ｒａｉｎ左右。综上所述，样品中即使有代森锰锌及其分　色谱条件下，绘制土壤样品的色谱图。　解产物乙撑硫脲，也不会干扰嚼唑菌酮的测定。　２结果与讨论　２．３标准曲线的建立　２．１流动相的选择　在上述仪器条件下，注射标准系列溶液，进样量均为　根据嚼唑菌酮的化学结构，可以判定其是碱性化合　４０　Ｉ．ｔＬ，以进样质量分数为横坐标，峰面积为纵坐标，得线　物。其ｐＨ值为７．８－８．９ｔ　，由于反相键合柱的固定相表面有　性方程为ｙ＝一１．４５５×１０３＋３．１３５×１０４ｘ，ｒ－－０．－９９９ｌ。线性范围：　残存的Ｓｉ—ＯＨ基，当ｐＨ大于４时，以ｓｉ—ｏ‘形式存在，能吸　６－６０　ｎｇ。根据农业部颁布的《农药残留试验准则》中方法　附阳离子或碱性化合物，因此调整流动相的ｐＨ值是非常重　最低检出质量分数的计算公式，本方法的最低检出质量分　要的；同时，硅胶基体在酸碱中的稳定范围是ｐＨ值２—８ｔ８ｌ。　数为０．０２　ｍｇ／ｋｇ，最小检出量为２　Ｘ　１０一ｇ（Ｓ／Ｎ＝３）。　所以我们在流动相中调节ｐＨ＝３。又根据反相保留机理［８１。　２．４回收率及方法精密度　在流动相中减少有机溶剂用量，增加水溶液用量，可以增　在土壤的空白样品中分别加入３种质量分数（２．０、０．５、　加目标化合物的保留值，有利于与杂质的分离。　０．１　ｍｇ／ｋｇ）自勺嗯唑菌酮标准品，测定回收率（，ｌ＝３）。实验的平　因此在实验中，流动相最终选择为乙腈．０．０１　ｍｏｌ／Ｌ的磷　均回收率为８９．２％一９９．６％、８８．１％一９４．５％、９２．２％一１０３．６％，相　酸二氢钾（体积比为４５：５５），ｐＨ＝３，嚼唑菌酮的标准品在此　对标准偏差均小于５．８％Ｏ‘数据符合农残检测中回收率　色谱条件下保留时间为ｌｌ　ｍｉｎ￣Ｅ右，测定的空白土样中在此　７０％一ｌｌ０％的要求。　保留时间下未见有干扰物，测定样品中被分析物与附近杂　峰达到基线分离，获得良好分离效果，色谱图见图ｌ。　２．５鹋．７５％易保ＷＧ在土壤中的最终残留分析　按照６８．７５％易保ＷＧ的施药说明以及农药残留试验基　本规范要求，用１３７５、６８７．５　ｍｇ／ｋｇ两个质量分数施用在苹　果中，每个质量分数分别喷施３次和４次，每个处理３次重　复，每次喷药间隔１４　ｄ。土壤样品的采集：取苹果树下土　壤，在０－１０　ｃｍ表层多点采样１－２　ｋｇ，空白土壤取１　ｋｇ。测　定的样品分别为距末次施药７、１４、２８　ｄ。试验样品用四分　２．００　４．００　６．００　８．００　１０．００　ｌ２．００　法缩分后取０．５　ｋｇ。对土壤样品按照１．２所述操作步骤进行　图１测定土壤样品中嗯唑菌酮色谱图　测定，用标准曲线法进行计算，结果见表１。　２．２代森锰锌的干扰　表１嗯唑菌酮在土壤中的最终残留　间隔期，ｄ药剂质量５Ｐ＇￣／（ｍｇ．ｋｇ　）施药次数，次平均含￣／（ｍｇ．ｋｇ　）　０．００　２．００　４．００　６．００　８　００　１０．００　１２．００　图２乙撑硫脲标准品色谱图　易保为代森锰锌和嚼唑菌酮的复配农药。代森锰锌　为代森锰和锌离子的结合物，不溶于水及甲醇、乙腈等　大多数有机溶剂【５】。分析方法通常为气相色谱法【６．　，原　实验结果表明，随着施药质量分数和施药次数的增　理为代森锰锌在密闭反应瓶中加热与氯化亚锡．盐酸溶液　加，实验地土壤中曝唑菌酮的残留量增加。即施倍量药　反应，产生定量的二硫化碳气体。抽取气体，进行气相　的残留大于施常量药的残留量；施４次药的残留量大于施　色谱分析，求得样品中代森锰锌的含量。因此在试验中　３次药的残留量。但由于嚼唑菌酮在土壤中的降解，其残　采用甲醇作提取剂，代森锰锌不会提取至甲醇溶液中。　留量随采样间隔时间的增加而明显变小。　但是，代森锰锌的分解产物乙撑硫脲可用液相色谱方法分　（下转第２６８页）　维普资讯 http://www.cqvip.com

２６８　农药ＡＧＲＯＣＨＥＭＩＣＡＬＳ　第４｜６卷　药，２００３，４２（９）：４ｌ－４３．　４５（１Ｏ１：７ｌ２－７ｌ５．　【６】　马韵升，刘长令．新型白粉病杀菌剂环氟菌胺【Ｊ】．农药，２００５，　【ｌ４】张明星，刘长令，张弘．新型杀虫、杀螨剂螺甲螨酯【Ｊ】．农药，　４４（３）：ｌ２８－ｌ２９．　２００５，４４（１　２）：５５９－５６０．　【７】　侯春青，李志念，刘长令．新型Ｓｔｒｏｂｉｎ类杀菌剂唑菌胺酯【Ｊ】＿农　【ｌ５】刘长令．２００５年英国植保会议公开的新农药品种【Ｊ】．农药，　药，２００２，４ｌ（６）：４ｌ－４３．　２００５，４４（１２）：５７３．　【８】　殷锦捷，马海云。关爱莹，等．高效杀菌剂氟嘧菌酯【Ｊ】＿农药，　［１　６】刘长令．２００４年公开的农药新品种【Ｊ】．农药，２００５，４４（１）：４５＿４６．　２００３，４２（３）：４０－４２．　【ｌ７】刘长令．世界农药大全一除草剂卷【Ｍ】．北京：化学工业出版　【９】　刘长令．２００２年英国Ｂｒｉｇｈｔｏｎ植保会议公开的新农药品种【Ｊ】．　社，２００２　农药，２００３，４２（１）：４８．　【ｌ８】张宗俭，陈亮，李峰．新型玉米、大豆田选择性除草剂—烯草　【１０】刘长令．国外农药品种手册（增补本）【Ｍ】．沈阳：全国农药工业　胺【Ｊ】．农药，２００２，４１（８）：４４．　信息站，２０００．　【ｌ９】刘长令．２００６年公开的新农药品种【Ｊ】＿农药，２００７，４６（２）：１２７－　【ｌｌ】刘长令．新型高效杀虫剂茚虫威【Ｊ】．农药，２００３，４２（２）：４２　．　１２８．　［１２】刘长令．新农药研究与开发文集【Ｍ】．北京：化学工业出版社，　【２０】胡宗岩，柴宝山，刘长令．新型除草剂氨草啶【Ｊ】＿农药，２００６，　２００２：１９３．１９５．　４５（１２、：８４７－８４８．　【１３】刘长令．第ｌｌ届ＩＵＰＡＣ国际农药化学会议概况【Ｊ】．农药，２００６，　责任编辑：赵平　（上接第２６２页）　二氢钾（体积比为４５：５５，ｐＨ＝３）为流动相，在３５℃下测定　２．６　６８．７５％易保ＷＧ在土壤中的降解动态残留分析　土壤中易保有效成分嗯唑菌酮残留量的ＨＰＬＣ的分析方法，　在果园另辟一块空地约２０　ｍ　，易保１３７５　ｍｇ／ｋｇ药　方法的回收率在９１％以上，相对标准偏差小于５．８％，最低检　液喷雾施药一次后，于当天第１、４、８、２４　ｈ和２、３、　测质量分数为０．０２　ｍｇ／ｋｇ。而且进行了其最终残留和残留动　７、１４、２８　ｄ分别采集土壤１～２　ｋｇ，采集土壤深度０～ｌ０　ｃｍ　态分析，其半衰期为９．５　ｄ，为易消解农药（ｆｍ＜３０　ｄ）。　（１０个点以上），用于易保的降解动态残留量测定。同　参考文献：　时采集土壤对照。　【ｌ】　李宗成．近年来农药开发的新品种【Ｊ】＿农药，２００１，４０（２）：４５４７．　易保在土壤中的降解动态结果见图３。实验结果表　【２】李斌．杀菌剂研发进展【Ｊ】＿农药，２００１，４０（５）：６－８．　【３】ＮＡＴＨＡＬＩＥ　ＧＲＡＺＹ　Ｊ，ＪＥＡＮ－ＬＵＣＧ，ｅｔａ１．ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＭｏｄｅ　明，易保中嚼唑菌酮在土壤中的原始沉积量为０．３８５　ｍｇｌｋｇ，　ｏｆ　Ｆａｍｏｘａｄｏｎｅ　ｏｎ　Ｐｌａｓｍｏｐａｒａ　ｖｉｔｉｃｏｌａ　ａｎｄ　Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ　降解动态方程为Ｃ＝Ｏ．３４６０ｅ　肺　，１＂－＝０．９７７９，半衰期９．５　ｄ。　Ｉｎｆｅｓｔａｎｓ［Ｊ］．Ｃｒｏｐ　Ｐｒｏ￣ｃｆｉｏｎ，２００１，２０：２５３－２６０．　降解规律符合一级指数方程模式。　【４】　亦冰编译．新颖杀菌剂霜脲氰，唑菌酮的开发及作用特性【Ｊ】．世　界农药，２００１，２３（５）：４７－４９．　【５】　农业部农药检定所主编．新编农药手册【Ｍ】．北京：中国农业　出版社，１９９７：２８６．２８７．　昙　【６】　冯秀琼，李琥，赵秋霞，等．代森锰锌及其代谢物乙撑硫脲在　鲻　苹果及土壤中的残留研究【Ｊ】．农药，１９９７，３６（５）：３　１．３３．　揠　【７】　马恒麟，纪然，张永刚，等．西瓜、瓜叶及土壤中代森锰锌残留　气相色谱分析方法的研究【Ｊ】．农药学学报，２０００，（２）：６３—７０．　【８】　于世林．高效液相色谱方法及应用【Ｍ】．北京：化学工业出版　社，２００１：８５．９１．　图３嗯唑菌酮在土壤中的降解动态曲线　【９】　刘祖兰，张永刚，马恒麟，等．西瓜、瓜叶及瓜田土壤中乙撑　３结论　硫脲残留量的液相色谱分析方法研究【Ｊ】．化工环保，２００１，（１）：　４７．５１．　建立了利用Ｎｏｖａｐａｋ苯基柱，乙腈与０．０１　ｍｏｌ／Ｌ的磷酸　责任编辑：夏彩云　随着国内无公害农业的迅猛发展，我国高效低残留农药进口　大增。今年ｌ一２月份仅从张家港保税区进口的该类农药就高达４６１　吨，是去年同期进口ｔ的４．２倍。主要有来自德国、巴西等国的骠　马、大骠马、威霸、螨危、康福多和艾美乐等品种。　业内人士认为进口ｔ增加的主要原因：一是随着我国居民生活　水平的提高，食品安全问题越来越突出，市场上对无公害蔬菜和水　果的需求ｔ加大，导致高效低残留农药的使用越来越普及；二是随　着日本肯定列表制度的实行，出口蔬菜和水果使用的农药必须是高　效低残留的；三是许多地区已限制高残留农药的使用，但一时还没　有足够的国产替代产品；四是２００６年冬天是个暖冬．２００７年农业的　病虫危害可能较重。因此贸易商备货较多。＜ｚＰ）