还原糖的测定—直接滴定法

还原糖的测定—直接滴定法

1 原理

样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定标定过的碱性酒石酸铜液，以次甲基蓝作指示剂，按照样品液消耗体积，计算还原糖量。

2 试剂

碱性酒石酸铜甲液

称取15g硫酸铜（CuSO4•5H2O）及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000mL。 碱性酒石酸铜乙液

称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。

乙酸锌溶液

称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。 亚铁氰化钾溶液（+）

称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。 葡萄糖标准溶液（1mg/mL）

精密称取1.000g通过98～100℃干燥至恒量的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mL盐酸，并以水稀释至1000mL。此溶液每毫升相当于1mg葡萄糖。

盐酸 3 仪器

实验室常规仪器和设备 古氏坩埚或G4垂融坩埚

1

-

4 操作步骤 样品处置

将样品捣碎混匀待用，样品应避免暴露在空气和阳光下，并尽可能迅速地进行分析。 称取约～5g样品，置于250mL容量瓶中，加50 mL水，摇匀后慢慢加入乙酸锌溶液5mL及亚铁氰化钾溶液（+）5mL，加水至刻度，混匀。静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。

标定碱性酒石酸铜溶液

吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9mL葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色恰好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的整体积，同时平行操作三份，取其平均值，计算每10mL（甲、乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。

样品溶液预测

吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并维持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色恰好褪去为终点，记录样液消耗体积。

样品溶液测定

吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加比预测体积少1mL的样品溶液，使在2min内加热至沸，趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定，直至蓝色恰好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积。

2

-

5 结果计算

按下式计算还原糖的含量：

C*V*N

还原糖 (以葡萄糖计,g/L) ＝───── V1

式中：

C──葡萄糖标准溶液的浓度，mg/mL； V──标按时消耗葡萄糖标准溶液的整体积，mL V1—测按时平均消耗样品溶液体积，mL N—被测样品稀释倍数 7 精密度

同一样品两次平行测定值相对差不得超过15%。

还原糖滴定法-反滴定法

1.2.2 空白滴定

精准吸取费林甲、乙液各5mL放入150mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL。再用滴定管加入%葡萄糖标准液9mL。摇匀在电炉(或煤气灯)上加热,使其在2min内沸腾,沸腾30s后,匀速滴入%葡萄糖标准液至蓝色消失即为终点。记录沸腾前后共耗用葡萄糖液毫升数(A)。

1.2.3 预备滴定

精准吸取费林甲、乙液各5mL,放入150mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL,再加1mL10%样品稀释液。按照样品含糖量的高低(估量数),可用糖液滴定管先加入必然量的%葡萄糖液(空白滴定

3

-

耗用葡萄糖液一般在10mL以上),摇匀加热,沸腾30S后,匀速滴入%葡萄糖液,至蓝色消失即为终点,记下沸腾前后共耗用%葡萄糖标准液毫升数,作正式滴按时参考用。

1.2.4 正式滴定

精准吸取费林甲、乙液各5mL,放入150mL锥形瓶内,加蒸馏水10mL及1mL10%样品稀释液,再用糖液滴定管加入比预备滴定耗用量少左右的%葡萄糖标准液,摇匀后加热,使其在1～2min内沸腾,沸腾30S后匀速滴入%葡萄糖标准液至蓝色消失即为终点,记下沸腾前后共耗用%葡萄糖标准液的毫升数 (B)。做平行测定,两次相差不得超过。

计算 (A -B) ×C

还原糖 (以葡萄糖计,g/100mL或g) ＝─────×100………………… (1) W

式中: A——空白滴定耗用%葡萄糖标准液数, mL; B——正式滴定耗用%葡萄糖标准液数, mL; C——%葡萄糖标准液含葡萄量 (即0.001g); W——吸取样液相当样品量,mL或g

测糖：

样液4

0 1 2 3 4 5 6 7 -

号 稀释18 倍数

OD值：

不稀15 12 10 6 2 释 样液0 号 稀释倍数

不稀释 释 不稀3 10 20 30 40 40 1 2 3 4 5 6 7 5