电针遏制癫痫小发作时脑内氨基酸含量的变化

维普资讯 http://www.cqvip.com 针刺研究第２７卷２００２年第３期　・　１７７　・　中图分类号：Ｑ５１７文献标识码：Ａ文章编号：１０００—０６０７｛２００２｝０３—０１７７—０３　电针遏制癫痫小发作时脑内　氨基酸含量的变化　张　煜　吴定宗　万　平　（上海中医药大学，上海　２０００３２；　华东师范大学，上海　２０００６２）　内容提要　目的：本课题前阶段已证明电针能遏制癫痫小发作，现拟探查此时脑内一些氨基酸含　量的变化。　方法：在戊四氮注射及闪光刺激造成癫痫小发作的大鼠，收集脑内一些部位在电针穴　位前后的灌　流液．测定四种氨基酸的含量。结果：皮层运动区、视区的７一氨基丁酸、甘氨酸及牛磺　酸在电针后　显著增加，谷氨酸减少。．丘脑网状核、黑质网状部的ｙ一氨基丁酸亦明显增加。结论：电　针促使脑内　与抑制有关的氨基酸含量增加，而兴奋性氨基酸有减少趋势。　．　关键词　癫　痫小发作　电针　脑内氨基酸　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｅｌｅｃｔｒｏａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ　ｏｎ　Ｂｒａｉｎ　Ａｍｉｎｏ　Ａｃｉｄ　Ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｄｕｒｉｎｇ　Ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ　Ｐｅｔｉｔ　Ｍａｌ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｒａｔ　ＺＨＡＮＧ　Ｙｕ，　ＷＵ　Ｄｉｎｇｚｏｎｇ，　ＷＡＮ　Ｐｉｎｇ　（Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ．２０００３２　Ｅａｓｔ　Ｃｈｉｎａ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，２０００６２）　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｒａｉｎ　ｄｕｒｉｎｇ　ｅｌｅｃｔｒｏａｃｕＤｕｎｃｔｕｒｅ　（ＥＡ）ｉｎｄｕｃｅｄ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ　ｐｅｔｉｔ　ｒｅａ１．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ａ　ｔｏｔａｌ　ｏｆ　５　ＳＤ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　ｅｐｉｌｅｐｓｙ　ｗｅｒｅ　ｏｂ．　ｓｅｒｖｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｔ　ｐａｐｅｒ　Ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ。ｐｅｔｉｔ　ｒｅａｌ　ｗａｓ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｅｎｔｙｌｅｎｅｔｅｔｒａｚｏｌ（ＰＴＺ，３５　ｍｇ／ｋｇ）ｏｒ　ＰＴＺ．（１５　ｍｇ／ｋｇ）ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｐｌｕｓ　ｎｅｏｎ—ｌａｍｐ　ｌｉｇｈｔ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ　（０．５　Ｈｚ，６０　ｓｅｃ）ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｙｅ．“Ｄａｚｈｕｉ”（ＧＶ　１４）ａｎｄ“Ｊｉｚｈｏｎｇ”（ＧＶ　６）ｗｅｒｅ　ｐｕｎｃｔｕｒｅｄ　ａｎｄ　ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ　ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌｌｙ　ｆｏｒ　２０　ｍｉｎ　ｗｉｔｈ　Ｇ６８０５　ＥＡ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　ｂｙ　ｓｅｔｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ａｓ　ｅｌｅｃｔｒｉｃ　ｃｕｒ．　ｒｅｎｔ　ｏｆ　５　ｍＡ　ａｎｄ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ　ｏｆ　８０　Ｈｚ．Ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｆｌｕｉｄ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｓｅｎ８ｏｒｙ－ｍｏｔｏｒ　ａｒｅａ　ａｎｄ　ｖｉｓｕａｌ　ａｒｅａ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｃｏｒｔｅｘ，ｒｅｔｉｃｕｌａｒ　ｎｕｃｌｅｕｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｈａｌａｍｕｓ　ａｎｄ　ｒｅｔｉｃｕｌａｒ　Ｄａｒｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｕｂｓｔａｎｔｉａ　ｎｉｇｒａ　ｖｉａ　ｔｈｅ　ｉｍｐｌａｎｔｅｄ　ｃａｎｎｕｌａ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｇｌｕｔａｍａｔｅ（Ｇｌｕ）．ｙ－ａｍｉｎｏｂｒｔｙｒｉｃ　ａｃｉｄ　（ＧＡＢＡ），ｇｌｙｃｉｎｅ（Ｇｌｙ）ａｎｄ　ｔａｕｒｉｎｅ（Ｔａｕ）ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｒｅ．　ｓｕｉｔｓ：Ａｆｔｅｒ　ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，Ｇｌｕ（ｅｘｃｉｔａｔｏｒｙ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ）ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｅｎｓｏｒｙ—ｍｏｔｏｒ　ａｒｅａ　上海市教委资助课题（ＮＯ　９７Ｃ０９）　维普资讯 http://www.cqvip.com ・　１７８　・　针刺研究第２７卷２００２年第３期　ａｎｄ　ｖｉｓｕａｌ　ａｒｅａ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｃｏｒｔｅｘ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｓｌｉｇｈｔｌｙ　ｂｕｔ　ｈａｄ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｗｉｔｈ　ｐｒｅ—ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ＧＡＢＡ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ）ｃｏｎｔｅｎｔｓ　Ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｅｎｓｏｒｙ—ｍｏｔｏｒ　ａｒｅａ　ａｎｄ　ｖｉｓｕａｌ　ａｒｅａ，　ｒｅｔｉｃｕ１ａｒ　ｎｕｃ１ｅｕｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｈａｌａｍｕｓ　ａｎｄ　ｒｅｔｉｃｕｌａｒ　ｐａｒｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｕｂｓｔａｎｔｉａ　ｎｉｇｒａ，Ｇｌｙ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ）　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｅｎｓｏｒｙ—ｍｏｔｏｒ　ａｒｅａ　ａｎｄ　ｖｉｓｕａｌ　ａｒｅａ　ａｌｌ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｃｏｎｓｉｄｅｒａｂｌｙ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｐｒｅ—ＥＡ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ　ｐｅｔｉｔ　ｍａｌ（Ｐ＜０．０５～０．０１）．Ｔａｕ（ｔｈｅ　ｅｘｃｉｔａｎｔ　ｏｆ　Ｇｌｙ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ）ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｅｎｓｏｒｙ－ｍｏｔｏｒ　ａｒｅａ　ａｎｄ　ｖｉｓｕａｌ　ａｒｅａ　ａｌｓｏ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｒｅｍａｒｋａｂｌｙ（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｄｕｒｉｎｇ　ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ　ｐｅｔｉｔ　ｍａ１．ＥＡ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ　ｃａｎ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈｅ　ｅｘｃｉｔａｔｏｒｙ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｔＯ　ａ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｄｅｇｒｅｅ　ａｎｄ　ｒａｉｓｅ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｒａｉｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｃｈｅｃｋｉｎｇ　ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ　ｐｅｔｉｔ　ｍａｌ　Ｏｆ　ｔｈｅ　ｒａｔ．　Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ　Ｅｐｉｌｅｐｔｉｃ　ｐｅｔｉｔ　ｍａｌ　ＥＡ　Ｇｌｕｔａｍａｔｅ　癫痫发作现在知道与脑内兴奋性氨基酸与　抑制性氨基酸作用密切相关。在癫痫小发作中　这些氨基酸的参与情况以及电针制癫涉及这些　氨基酸的情况如何，这是一个具有重要意义的　问题。本文对此进行了实验探讨，测定大鼠的　大脑皮层某些区域以及皮层下一些核团某些氨　基酸在电针前后的含量变化，借以了解电针遏　制小发作的机理。　ｌ材料与方法　１．１造模方法　第一种：ＳＤ大鼠腹腔注射戊四氮（ＰＴｚ）　３５　ｍｇ／ｋｇ，此后脑电出现典型的小发作棘慢　波。电针督脉穴位，“大椎”及“脊中”，频率为　８０　Ｈｚ，电流强度５０　ｍＡ，时间２０　ｍｉｎ。在ＰＴＺ　造模后２０　ｍｉｎ及电针穴位２０　ｍｉｎ后分别收集　大脑皮层感觉运动区及丘脑网状核与黑质网状　部的灌流液。第二种：用氖泡闪光刺激鼠眼（频　率为０．５次／ｓｅｃ，持续６０　ｓｅｃ），大鼠事先腹腔注　射少量ＰＴＺ　１５　ｍｇ／ｋｇ，这也可引发棘慢波。　ＳＤ大鼠由上海中医药大学实验动物中心　提供，常规饲养，雌雄不拘，体重２１１．２０±　２７．０６　ｇ，随机分十组，每组５只。在实验前４～　６天分别在有关脑区（通过定向仪，按Ｐａｘｉｏｎｏｓ　图谱）埋置推挽套管。实验时先用氨基甲酸乙　ＧＡＢＡ　Ｇｌｙｃｉｎｅ　ａｎｄ　Ｔａｕｒｉｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｒａｉｎ　酯麻醉，电针采用上海医用电子仪器厂出的　６８０５型电针仪。　１．２灌流液的收集　分别在麻醉大鼠的大脑皮层感觉运动区、　视区、丘脑网状核与黑质网状部埋置推挽套管，　并用胶水和牙托粉固定于颅骨上，埋置术后４　～５天进行实验。用人工脑脊液进行灌流，收　集灌流液。　１．３氨基酸的测定　取谷氨酸、甘氨酸、牛磺酸及７一氨基丁酸　（ＧＡＢＡ）标准品（Ｓｉｇｍａ）用ＡＣＳＦ稀释，与待测　样品分别加入衍生液后，用高效液相系统及　１５７型荧光检测器测定。绘制浓度一峰值标准　曲线，并作校正。由样品液测得的峰值与标准　曲线比较定出样品中氨基酸浓度。　１．４统计学处理　数据用均数±标准误表示，Ｐ＜０．０５为差　别显著，Ｐ＜０．０１为差别很显著。　２　结　果　由表１可以看出，大脑皮层感觉运动区及　视区、丘脑网状核、黑质网状部的ＧＡＢＡ含量　在电针后均高于针前。皮层感觉运动区、视区　的甘氨酸与牛磺酸含量在电针后亦高于针前；　而皮层这两区的谷氨酸含量变化不明显。　维普资讯 http://www.cqvip.com 针刺研究第２７卷２００２年第３期　・１７９・　表ｌ　电针前后脑内一些氨基酸含量的变化（　＝５，ｎｍｏｌ／Ｌ）　与电针前比较：＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１。　３讨　论　尚未达显著程度）。另一反映皮层兴奋性的光　诱发电位，在少量注射戊四氮后，光刺激鼠眼可　引发皮层棘慢波，而在电针后则否　也说明皮　层兴奋性下降。另一方面，逆向刺激锥体束　皮层引导出的表面负波（ＳＮ波反映回返抑制　大小），在注射戊四氮后波幅减小，而电针后迅　速增大，表明电针促进皮层抑制过程。对照皮　层抑制性氨基酸（ＧＡＢＡ、甘氨酸、牛磺酸）含量　的测定，在电针后（与针前比较）含量显著上升，　说明电针对皮层抑制过程有明显作用。　作为兴奋性氨基酸的谷氨酸在大脑皮层中　含量很高，其作用快而短，引起神经元去极化，　产生兴奋性突触后电位。血浆中谷氨酸含量据　报道－１　Ｊ与癫痫小发作有关，小发作时谷氨酸异　常增多。ＧＡＢＡ为脑内主要抑制性递质，甘氨　酸亦为抑制性递质，牛磺酸为甘氨酸受体的激　动剂，在脑内异常放电时具有抑制效应。　结合本实验所观察到的电针后上述四种氨　基酸含量的变化与我们前一工作中有关皮层兴　奋与抑制的实验结果（电针使皮层兴奋性下降，　抑制增强）－２　Ｊ相互印证，更能说明电针的作用。　参考文献　１　Ｇｅｌｄｅｒ　Ｖ，Ｇｕｙ　Ｌ，Ｆｉｓｈｅｒ　Ｒ　Ｆｅｌｉｎｅ　ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ　ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ　皮层诱发电位的幅度与潜伏期可反映皮层兴奋　性高低。电刺激大鼠坐骨神经引起的皮层诱发　电位在注射戊四氮（小发作造模）后波幅变大，　潜伏期缩短，再进行穴位电针，波幅减小而潜伏　ｅｐｉｌｅｐｓｙ：Ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｇｌｕｔａｍｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｔａｎｒｉｎｅ　ｐａｒａｌｌｅｌ　ｔｈｅ　ｐｒｏｇｒｅ￣ｉｖｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｉｎ　ｅｘｃｉｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｏｒｔｅｘ．Ｅｐｉｌｅｐｓｉａ，　１９８３，２４：２００　２吴定宗，万平，张志雄，等，电针遏制癫痫小发作的实验　期延长，表明皮层兴奋性下降。对照皮层谷氨　酸的含量，在电针后较针前有减小倾向（虽统计　研究（一）．上海针灸杂志，１９９９，１８（６）：３２　（收稿日期：２０００—０８—２５）