植物冠瘿生长调控及相关基因研究进展

维普资讯 http://www.cqvip.com 西北植物学报２００２，２２（５）：１２８２－－１２８８　Ａｃｔａ　Ｂｏｔ．Ｂｏｒｅａｌ，一０ｃｃｉｄｅｎｔ．Ｓｉｎ．　文章编号：１０００—４０２５（２００２）０５—１２８２—０７　植物冠瘿生长调控及相关基因研究进展　张丽华，李建明　（西北农林科技大学园艺学院，陕西杨凌，７１２１００）　摘要：阐述了植物冠瘿产生的影响因素及冠瘿的生长和调控，并对冠瘿发生有关的基因进　行了综述。　关键词：植物冠瘿；生长与调控；冠瘿发生基因　中图分类号：Ｑ９４６—３３　文献标识码：Ａ　Ａｄｖａｎｃｅ　ｏｆ　ｇｒｏｗｔｈ　ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｇｅｎｅｓｉｓ　ｇｅｎｅ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ＺＨＡＮＧ　Ｌｉ—ｈｕａ，ＬＩ　Ｊｉａｎ—ｒｕｉｎｇ　（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　ＨｏｒｔｉｃｕＩｔｕｒｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｓｃｉ—Ｔｅｃｈ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ’　Ｓｈａａｎｘｉ　７１　２１Ｏ０，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｉｓ　ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ，Ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ａｎｄ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｇｅｎｅｓｉｓ　ｇｅｎｅｓ　ａｎｄ　ａｆｆｅｃｔｏｒｓ　ａｒｅ　ａｌｌ　ｒｅｖｉｅｗｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｐａｐｅｒ・　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｐｌａｎｔ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ；ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ；ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｇｅｎｅｓｉｓ　ｇｅｎｅ　人类患有癌症，植物也有“类癌之症”，即冠瘿。植物的冠瘿细胞与人类及动物的癌细胞相类似，它能　形成不同大小及类型的瘿或瘤，所以称之为冠瘿。冠瘿细胞一旦形成，就能不依赖于外源植物激素而快　速地分裂和增殖。因此可以利用植物的冠瘿细胞来生产某些具有重要价值的物质。而冠瘿组织的研究是　利用冠瘿细胞生产某些物质的基础。　１冠瘿产生的影响因素　１．１菌株类型　农杆菌属于根瘤菌科的革兰氏阴性菌，包括根癌农杆菌、放射性农杆菌、发根农杆菌和悬钩子农杆　菌４个种Ⅲ。根癌农杆菌根据其诱导植物细胞产生的冠瘿碱种类不同可分为３种类型，即章鱼碱型（。ｃ一　收稿日期：２００１—０４—２５；修改稿收到日期：２ｏ　一１１一　．．　者简介　张丽华（１９７４一），女（汉族），在读博士，讲师。　维普资讯 http://www.cqvip.com 塑　张丽华等：植物冠瘿生长调控及相关基因研究进展　１２８３　ｔｏｐｉｎｅ　ｔｙｐｅ）、胭脂碱型（ｎｏｐａｌｉｎｅ　ｔｙｐｅ）和农杆碱型（ａｇｒｏｐｉｎｅ　ｔｙｐｅ）．分别诱导合成章鱼碱、胭脂碱和农　杆碱。发根农杆菌根据转化根中合成的冠瘿碱种类不同可分为３种菌株类型（能诱导合成７种冠瘿碱）：　农杆碱型（能诱导合成农杆碱、农杆碱酸、甘露碱、甘露碱酸、农杆碱素Ａ）、甘露碱型（能诱导合成甘露　碱、甘露碱酸、农杆碱素Ｃ）和黄瓜碱型（能诱导合成黄瓜碱）。　不同类型的菌株诱导冠瘿的能力不同。王连铮等［２］利用根癌农杆菌的１５个株系对２　７５９个大豆品　种的致瘤作用进行了研究．筛选出了７个致瘤能力较强的株系，致瘤效果较好的菌株为Ｂ３／７３、Ｃ５８、　Ａ２０８。李洪泉等［３　用Ｃｈｒｙ５，Ａ２８１．Ｔ３７农杆菌株系对我国１Ｏ个大豆品种子叶致瘤作用进行了研究，结　果表明，３种菌株都获得较高的感染率，其中Ｃｈｒｙ５效果最佳，略高于Ａ２８１，Ｔ３７最差，Ｃｈｒｙ５在７个品　种上致瘤作用比我国的超毒菌株Ａ２８１还强，对所有品种致瘤作用都高于Ｔ３７。Ｃｈｒｙ５对我国大豆具有　较强的致瘤性，它可以作为构建大豆基因工程载体的优良菌株。　１．２植物材料的基因型　农杆菌的感染能力还与受体基因型有关．同一种作物，基因型不同．被同一农杆菌菌株感染后，产生　冠瘿的能力不同。王连铮等［２］试验了１５个根癌农杆菌株系对２　７５９个大豆品种的致瘤作用，获得了８５８　个大豆的结瘤基因型，其余则不被感染，说明不同大豆基因型的易感染性差异很大。李洪泉等口］研究了　不同菌株对１Ｏ个大豆材料的致瘤效果，１Ｏ个大豆品种对Ｃｈｒｙ５的感染率均较高，其中以黑农２６、黑农　３３和合丰２５为最高，致瘤效果以合丰２５为最好。　１．３外植体类型和侵染时间　同一作物，同一基因型，所取的外植体的部位不同，产生冠瘿的能力也不同。余沛涛等ｒ４］研究了　ＬＢＡ９２—６根癌农杆菌对丝石竹无菌苗致瘤作用的影响，结果发现茎的上部切段成瘤率为４３．３　，下部　切段成瘤率为５９．１　．这是因为上部切段较幼嫩，在转化感染过程中易死去，即使感染成瘤也难以继续　生长。且不同外植体所产生的冠瘿瘤的形态也不同，基部切段产生的冠瘿呈球形，饱满，质地较紧密，上　部切段产生的冠瘿较松散．不呈明显的球形。盛长忠等Ｉ５］研究了土壤农杆菌Ｃ５８对东北红豆杉不同天数　叶愈伤组织致瘤作用的影响，结果表明．以２０　ｄ的愈伤组织最易被Ｃ５８菌转化，长出冠瘿的愈伤组织达　１５　，其次为３０　ｄ的愈伤，其冠瘿诱导率为１３．８　，而１０　ｄ的愈伤组织因为还处于生长迟滞期，冠瘿诱　导率只有５．８Ｚ，４０　ｄ的愈伤组织因为生长达到高峰．将近衰老，其冠瘿诱导率仅２．１　。盛长忠等Ｉ５］还试　验了侵染时间对冠瘿诱导率的影响，结果以感染５　ｍｉｎ效果较好，时间短，不利于愈伤组织细胞与细菌　的相互作用，时间长对愈伤组织细胞伤害较大。　冠瘿生长与调控的研究　２．１器官分化或再生的研究　Ｐｈｉｌｌｉｐｓ等Ⅲ以矮牵牛为材料，从其冠瘿组织中提取原生质体，后在不含外源激素的培养基上进行　培养，结果表明，这些冠瘿瘤原生质体在无外源激素的培养基上能够再生。Ｓａｋｕｒａｉ等　］对不同形态的烟　草冠瘿组织中的内源赤霉素（ＧＡ）进行了研究，以探求ＧＡ生产与植物细胞分化的关系．结果表明，在无　序细胞中ＧＡ的生物合成受到抑制，一旦细胞进行再分化，ＧＡ的生物合成就能恢复。Ｙｕｓｉｂｏｖ等　］利用　农杆菌质粒载体通过叶盘转化法将冠瘿诱导基因Ｔ—ｃｙｔ基因（来源于ｐＴｉＣ５８）导入烟草细胞中，在高细　胞分裂素条件下培养的烟草芽不能发根．也没有顶端优势，添加外源的植物激素调节物可以产生形态正　常的转基因植株。虽然生根植株中的Ｔ—ｃｙｔ　ｍＲＮＡ为最初转化芽中的一半．但总的细胞分裂素的量却比　冠瘿瘤组织中要低的多。　２．２内源物质的研究进展　Ｓ　ｉ　。ｔ　等Ⅲ对两种转化组织（冠瘿瘤和畸态瘤）和未经转化的分化愈伤组织中的多胺进行了研　究，结果表明．在冠瘿瘤中多胺的含量为腐胺＞亚精胺＞精胺，而在畸态瘤中含量高低次序正好相反，在　维普资讯 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１２８４　西北植物学报　２２卷　分化的愈伤组织中为亚精胺＞精胺＞腐胺。冠瘿瘤和畸态瘤中的多胺含量不同，说明快速生长的转化组　织不一定含有高水平的腐胺，也说明各种多胺的相对含量与瘤的类型及特点有关。Ｔｅｒｒｙ等ｒｉｏ］利用琼脂　包埋技术研究了向日葵和番茄正常茎组织和冠瘿瘤茎组织中的Ｆｅ件的还原位点，将正常组织切片和冠　瘿瘤组织切片包埋于含有Ｆｅ”、ＢＰＤＳ及Ｆｅ。　指示剂的琼脂中，结果在被土壤农杆菌侵染的向日葵组织　中，Ｆｅ　大量被还原为Ｆｅ　，而在正常组织中没有被还原；对于番茄，不论正常组织还是瘤组织，只有茎　周边的Ｆｅ件被还原。Ｊｏｌｌｅｙ等［１１］以向日葵为材料，对冠瘿组织中的Ｆｅ进行了研究，结果表明，Ｆｅ高的还　原率与冠瘿细胞的增殖有关，且发现正常组织转化为冠瘿的机制似乎与活性Ｆｅ的还原有一定联系。　２．３外源基因在冠瘿瘤组织中的表达研究　有关外源基因在冠瘿瘤组织中表达的研究还比较少。Ｓａｓａｋｉ等［”　用Ｔｉ质粒来转化胡萝卜冠瘿细　胞，Ｔｉ质粒的ＩＡＡ生物合成基因得以转录和翻译，使得ＩＡＡ生产过量，但这种新合成的ＩＡＡ会立即代　谢为氨基酸结合态ＩＡＡ，内源ＩＡＡ含量维持在一个低水平，经液相色谱／质谱法对氨基酸结合态ＩＡＡ　进行鉴定，这种物质被确认为吲哚一３一乙酰天冬氨酸。　２．４冠瘿组织生长调控的研究　向日葵冠瘿瘤组织具有将Ｆｅ抖还原为Ｆｅｚ　的能力，所以能对Ｆｅ加以利用［ｎ　ｌ５］。Ｊｏｌｌｅｙ等［“　以１４　ｄ苗龄的健壮向日葵植株为材料，研究了铁的限量供应对冠瘿生长、营养及Ｆｅ仆还原为Ｆｅ　的影响。结　果表明，铁胁迫使冠瘿生长减慢，Ｆｅ件还原为Ｆｅ。　的量减少，且冠瘿组织中Ｆｅ的含量也降低。他们认为　冠瘿组织比非冠瘿组织含有更多的Ｆｅ、Ｃｕ和Ｐ，Ｆｅ的充足供应能够促进冠瘿组织的生长发育，缺乏时　会抑制其生长。Ｂｒｏｗｎ等　也以向Ｅｌ葵为材料研究了铁对冠瘿生长的影响，其研究结果与Ｊ＇ｏｌｌｅｙ等［】钉　的研究结果一致，发现冠瘿组织比非冠瘿组织含有更多Ｆｅ、Ｃｕ、Ｋ、Ｐ，含有较少的Ｚｎ、Ｍｇ，减少瘤周围环　境中的Ｆｅ会抑制冠瘿的生长［　１。　２．５物质生产的研究　尽管冠瘿组织具有快速分裂和增殖的特点，但利用冠瘿来进行物质生产的研究还不多见。Ｐｈｉｌｌｉｐｓ　等　Ⅲ以矮牵牛为材料，通过花瓣原生质体与冠瘿原生质体的体细胞融合，研究了激素自给条件下的色　素生产情况，结果表明，当异核体发育到四细胞阶段时，着色很弱，无法检测；当异核体直径达到１～２　ｍｍ时，１０％的微愈伤分化出色素细胞。Ｍｅｔｔｒｉｅ等ｍ　研究了烟草冠瘿组织中贝壳杉烯合成与内源ＧＡ　含量之间的关系，结果表明，在对数生长期开始时贝壳杉烯的合成达到高峰，且贝壳杉烯的合成能力与　Ｃ　。一ＧＡｓ问存在明显的相关关系。　３冠瘿发生的相关基因研究　土壤农杆菌在多种双子叶植物及一些单子叶植物上能引起肿瘤疾病（即冠瘿瘤），在感染植物时农　杆菌的致瘤Ｔｉ质粒，即Ｔ—ＤＮＡ就被转移到植物细胞中，并整合到植物的基因组中去。Ｔ—ＤＮＡ在被转　化植物细胞中的表达就会导致植物组织不依赖于生长素的肿瘤性生长及农杆菌特定氨基酸衍生物和生　物碱的合成。　３．Ｉ冠瘿发生的相关基因　人们最早研究的农杆菌株系为胭脂碱型株系Ｃ５８，Ｃ５８的Ｔ—ＤＮＡ含有２个基因区：右手区，这是许　多农杆菌株系所共有的保守区域，约ｉ０　ｋｂ，这一保守Ｔ—ＤＮＡ片段就称为“共同Ｔ—ＤＮＡ”，它包括５，ｉ—　ａａＭ，ｉｐｔ，６ａ，ｔｍｌ，ｔｍ２，ｔｍｒ．ａｃｓ，ｎｏｓ和６ｂ等基因；左手区，含有一串功能未知的基因。保守区含有许多冠　瘿瘤诱导所必须的基因，ｔｍ１和ｔｍ２编码生长素ＩＡＡ生物合成过程中所需要的一些酶，而ｔｍｒ则负责　细胞分裂素的合成，这些激素就促进了瘤的生长，基因５和６ｂ与瘤的形态有关，基因ａｃｓ（：ｌ：壤杆菌素碱　合成酶基因）和ｎｏｓ（胭脂碱合成酶基因）分别编码生物碱合成过程中的一些酶。另外基因６ａ还与生物碱　的分泌有关［１　９　。　维普资讯 http://www.cqvip.com ５期　张丽华等：植物冠瘿生长调控及相关基因研究进展　１２８５　对一些胭脂碱型农杆菌进行研究表明．转录产物ａ、ｂ、Ｃ、ｄ、ｅ是由左手Ｔ—ＤＮＡ区所编码的，它们的　具体功能还不清楚。许多研究者的研究工作表明Ｃ５８和Ｔ３７虽然都有自己特定的Ｔ—ＤＮＡ结构，但它们　仅在左手区Ｔ—ＤＮＡ的ＥｃｏＲ　Ｉ酶切片段ｌ４处相差一１．６　ｋｂ的缺失小片段。Ｃ５８或Ｔ３７　Ｔ—ＤＮＡ的左手　区域是胭脂碱型株系所特有的，Ｗｉｌｌｍｉｔｚｅｒｄ等［２７３对该片段进行的转录分析发现有６个功能未知的区域　（ａ—ｆ）。Ｊｏｏｓ等［２８］对ａ—ｆ区进行突变分析初步认为该片段不参与瘤的形成。但Ｂｒｏｅｒ等［２９］鉴定了土壤农杆　菌Ｃ５８　Ｔ—ＤＮＡ基因ｅ、ｆ及它们对冠瘿瘤形成的影响，并报道基因ｅ在诱导番茄茎产生瘤中是必须的，　且能促进其它植物瘤的形成，并发现基因ｅ所编码的蛋白与发根农杆菌ｒｏｌＢ基因及土壤农杆菌基因５　的产物很相似。　Ｂｒｏｅｒ等ｃｚ。］认为ｅ和ｆ这２个基因的功能是调节植物对生长素的反应。基因ｅ的突变农杆菌株系只　能诱导产生少量的冠瘿，甚至不能诱导冠瘿的产生，所以他们认为基因ｅ的产物与冠瘿瘤的形成有关。　用基因ｆ的突变农杆菌株系去感染作物及其在转基因烟草中的表达都没有产生形态上的变化，与基因ｅ　相比，基因ｆ在冠瘿瘤的形成中似乎是非必须的。为了确定基因ｆ是否为活性基因，又研究了基因ｆ在植　物及农杆菌中的表达，结果发现在植物中基因ｆ的启动子介导的是一种组织特异性表达，尽管ｆ基因在　农杆菌和植物中都能表达，但该位点的功能还不清楚，对ｆ基因位点的ＤＮＡ相似性分析表明该位点是　一类似于嵌合体的ＤＮＡ结构，说明此位点可能是农杆菌在进化过程中不同株系间基因互换的结果。０ｔ—　ｔｅｎ等［２２　对Ｃ５８　Ｔ—ＤＮＡ的左半部分（ａ—ｄ区）及ａｃｓ—ｉａａＭ片段进行测序，并评价了胭脂碱型农杆菌株系　特定Ｔ—ＤＮＡ片段（ａ—ｆ）在瘤形成中的作用。结果表明，基因Ｃ编码一种新的未知Ｔ—ＤＮＡ蛋白，基因ａ与　土壤杆菌素合成酶基因是同系物，基因ｂ、Ｃ、ｄ、ｅ是一大家族的一部分，它们与Ｔ—ＤＮＡ基因５、ｒｏｌＢ、ｌｓｏ　和３，相联系，基因５、ｒｏｌＢ、ｌｓｏ能够诱导或改变植物的生长，被称为Ｔ—ＤＮＡ癌基因，基因３　（位于章鱼碱　型株系的ＴＲ—ＤＮＡ上）也是一癌基因，来源于Ｃ５８的ｂ－ｅ　Ｔ—ＤＮＡ片段。其单个基因缺乏生长诱导活性。　Ｃ５８　ｅ基因缺失突变型在所有被实验的植物上都表现出充分的烈性。Ｃ５８和Ｔ３７的Ｔ—ＤＮＡ结构见图　１Ｃ２９］。　Ｔ３７　二二二二二二二］　△１　６№　上　Ｃ５８　上　１４　墅上上上上鱼盟盥●　Ｅ　Ｅ　图１　Ｃ５８和Ｔ３７的Ｔ—ＤＮＡ结构　Ｆｉｇ．１　Ｔ—ＤＮＡ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　Ｃ５８　ａｎｄ　Ｔ３７　Ｃ５８能诱导多种寄主植物产生非分化状态的瘤，尽管Ｃ５８与Ｔ３７仅在ｆ基因区相差　一１＿６　ｋｂ的序列，但是Ｔ３７诱导产生的瘤是能分化芽的。Ｂｒｏｅｒ等ｍ　的研究结果表明，　．　１．６　ｋｂ的缺失片段与Ｃ５８、Ｔ３７诱导产生的瘤不同无关，而Ｃ５８、Ｔ３７诱导产生瘤不同的　原因尚不清楚。　维普资讯 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西北植物学报　３．２激素合成的相关基因　植物病源菌所产生的激素是在冠瘿形成过程中产生的。病原菌Ｅｒ＇ｗｉ　ｉａ　ｈｅｒｂｉ　。　Ｄ　．　ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａｅ能诱导Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａ植物产生冠瘿，这种病原菌具有ＩＡＡ特异性生产基因，也　具有负责细胞分裂素生物合成的位点［３ｏ］。在病原菌中细胞分裂素生物合成的关键酶为异　戊烯转移酶（Ｉｐｔ），在所有能诱导产生冠瘿的菌中发现都有编码Ｉｐｔ的基因。另一个同源基　因为来源于胭脂型菌的ｔｚｓ基因，它受ｖｉｒ调节子的调控。在Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｙｒｉ　ｇａｅ　ｐｖ．　Ｓａｖａｓｔａｎｏｉ中细胞分裂素是由ｐｔｚ基因编码的，它在结构上与农杆菌基因相似。与ｔｚｓ植　物酚类化合物诱导下的表达相比，ｐｔｚ基因能够高效表达并有一个与Ｅ．ｃｏｌｉ相类似的启　动子。另外一个细胞分裂素合成基因与前两个不同，是从Ｒｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｓｃｉａｎｓ中分离到　的。细胞分裂素生物合成基因在冠瘿形成中的作用已有报道，ｉｐｔ基因诱导产生的是生根　型冠瘿，ＩＡＡ缺陷型突变菌诱导产生的是出芽型冠瘿。Ｓｕｒｉｃｏ等［３　］在对ＩＡＡ或细胞分裂　素生物合成突变菌进行分析的基础上提出Ｐ．Ｓｙｒｉｎｇａｅ　ｐｖ．ｓａｖａｓｔａｎｏｉ的ｐｔｚ基因与冠瘿　的大小有关。Ｌｉｃｈｔｅｒ等［３０］报道Ｅ．Ｈｅｒｂｉｃｏｌａ　ｐｖ．ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａｅ能分泌玉米素、玉米素核苷　等，他们还研究了Ｅ．Ｈｅｒｂｉｃｏｌａ　ｐｖ．ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａｅ细胞分裂素合成基因的特点及其在冠瘿形　成中的作用，研究发现，细胞分裂素合成基因位于ｐＰＡＴＨ质粒上专门生产ＩＡＡ的基因　群处，对该位点进行的序列分析表明，细胞分裂素生物合成基因ｅｔｚ与其他人报道的细胞　分裂素合成基因同源。ｅｔｚ标记交换突变体在Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａ剪枝上诱导产生的冠瘿较小，用　完整的ｅｔｚ基因与交换突变体进行互补能诱导细胞分裂素的大量产生，诱导出的冠瘿个　较大，这证明ｅｔｚ基因与细胞分裂素的生产和冠瘿的大小有关。ｐｒｅ—ｅｔｚ的插入突变体分析　表明，在该突变体中ｅｔｚ特定转录物产量及细胞分裂素的产量都大大降低，说明ｐｒｅ—ｅｔｚ　基因与ｅｔｚ基因具有协同作用，共同调节细胞分裂素的含量及冠瘿的形成与大小。　３．３序列分析及检测　Ｓｕｚｕｋｉ等＿２６　对一种胭脂碱型Ｔｉ质粒（ｐＴｉ—ＳＡＫＵＲＡ）的核苷酸序列进行了测定，在长２０６　４７９　ｂｐ　的核苷酸序列上共有１９５个开放阅读框（ＯＲＦｓ）。在该质粒的２／３部分中发现共有２２个结合基因，３个　复制基因，２２个致病基因，３７个寄主植物遗传克隆基因，这些基因形成７个功能基因群。在质粒的另外　１／３部分发现有一些新基因，其中包括ｒｏｕｔ　Ｔ．Ｒｈｉｚｏ￣ｕｍ　ｎｏｄ　Ｑ和Ｓｐｈｉｎｇｏｍｏｎａｓ　ｌｉｇ　Ｅ基因，这些基因　可能与寄主植物的更广范围有关。　ＰＣＲ已被用于纯组织、土壤及被感染植物中农杆菌的鉴定和检测，但关于用ＰＣＲ及其它技术检测　多种寄主植物瘤组织中农杆菌相对有效性的文献还较少。Ｃｕｂｅｒｏ等Ｅ３２３建立了一种检测植物瘤组织中农　杆菌的简单而有效的方法．他们在实验中共使用了来自不同材料的３８个农杆菌株系。在反应中共使用　了三对引物：来源于Ｔ—ＤＮＡ区的ＦＧＰ　ｔｍｒ　５３０和ＦＧＰ　ｔｍｒ　７０１，来源于ｐＴｉ　ｖｉｒ区位于ｖｉｒＢ和ｖｉｒＧ之　间的ＦＧＰ　ｖｉｒ　Ｂ１１＋２１和ＦＧＰ　ｖｉｒ　Ｇ１５　，另外一个引物为ＶＣＲ／ＶＣＦ（由Ｖａｗａｄａ根据ｐＴｉ　ｖｉｒＣ设计而　成）。用ｔｍｒ引物对３８个农杆菌株系进行扩增，有３４个株系中获得１７２　ｂｐ的目的片段。用ｖｉｒ　Ｂ—Ｇ引物　进行扩增，在３２个株系中获得２４６　ｂｐ和７３０　ｂｐ的目的片段，而用ｖｉｒ　Ｃ引物在３３个株系中获得适宜大　小的条带。对于农杆菌株系Ｂ６和５５０—２ＰＡ８，用ｖｉｒＢ—Ｇ引物进行扩增没得到任何产物。对于３６０—１株系　和阴性对照，用３对引物都没有得到扩增产物　可见．对于一定的农杆菌株系，只有选择适宜的引物才能　得到ＰＣＲ产物。　４　小结　在冠瘿的研究方面主要着重于其组织内部成分和与冠瘿发生有关的基因研究．而对冠瘿生长影响　维普资讯 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塑　张丽华等：植物冠瘿生长调控及相关基因研究进展　１２８７　因素的研究还比较少。在冠瘿的利用方面，利用冠瘿生产某种有用物质的报道也很少。今后，应从下面３　个方面着重研究：①研究基本培养基中主要成分对冠瘿生长的影响；②研究适合于检测冠瘿的通用引　物，以便于对冠瘿进行检测；③应加强利用冠瘿生产具有重要价值的有用物质的研究。　参考文献：　［１］王关林．方宏筠．植物基因工程原理与技术［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９８．　［２］王连铮．尹光初，罗教芬，等．大豆致瘤及基因转移研究［Ｊ］．中国科学Ｂ辑，１９８４，２：１３７—１４１．　［３］李洪泉，李洪卫，王（２）：１１２—１１５．　茜，等．根癌农杆菌Ｃｈｒｙ５对我国栽培大豆子叶致瘤作用的研究［Ｊ］．大豆科学，１９９４，１３　［４］余沛涛．杨跃平．根癌农杆菌在丝石竹上进行基因转化［Ｊ］．上海农业学报，１９９７，１３（４）：１７—２Ｏ．　［５］盛长忠，王淑芳，张心平，等．土壤农杆菌Ｃ５８遗传转化东北红豆杉的初步研究［Ｊ］．南开大学学报（自然科学），　ｌ９９９，３２（４）：２７—３Ｏ．　［６］ＰＨＩＬＬＩＰＳ　Ｒ，ＤＡＲＲＥＬＬ　Ｎ　Ｊ．Ａ　ｓｉｍｐｌｅ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｆｏｒ　ｓｉｎｇｌｅ—ｃｅｌｌ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｔｕｍｏｕｒ　ｔｉｓｓｕｅ：Ｐｅｔｕｎｉａ　ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ　ｈｏｒｍｏｎｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，１９８８，１３３（４）：４４７—４５１．　［７］ＳＡＫＵＲＡＩ　Ａ，ＮＡＫＡＧＡＷＡ　Ｓ，ＳＹＯＮＯ　Ｋ，ｅｆａ１．Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｏｂａｃｃｏ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ［Ｊ］．　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｐｌａｎｔ　Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ　Ｓｏｃｉｅｔｙ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ，１　９８７・４１．　［８］ＹＵＳＩＢＯＶ　Ｖ　Ｍ，ＣＨＵＮＩＬ　Ｐ，ＡＮＤＲＩＡＮＯＶ　Ｖ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃａ１１ｙ　ｎｏｒｍａｌ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　Ｔ—ｃｙｔ　ｔｏｂａｃｃｏ　ｐｌａｎｔｓ　ａｓ　ａ　ｍｏｄｅｌ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｉｎ　ｏｆ　ｐｌａｎｔ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎａｌ　ｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌｅｃｕ—　ｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９１，１７（４）：８２５—８３６．　［９］ＳＲＩＶＡＳＴＡＶＡ　Ｖ，ＧＵＨＡ—ＭＵＫＨＥＲＪＥＥ．Ｐｏｌｙａｍｉｎｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｔｕｍｏｕｒｓ　ａｎｄ　ｔｅｒａｔｏｍａ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ—　ｉｓｔｒｙ，１９９２，３１（１Ｏ）：３　３５７—３　３５８．　［１Ｏ］ＴＥＲＲＹ　Ｒ　Ｅ，ＢＲＯｗＮ　Ｊ　Ｃ，ＪＯＬＬＥＹ　Ｖ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｌｏｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｆｅ　＋ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｕｍｏｒｏｕｓ　ａｎｄ　ｎｏｒｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｔｉｓｓｕｅ　ｏｆ　ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ　ａｎｄ　ｔｏｍａｔｏ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，１９９２，１５（１０）：１　６９１—１　６９７．　［１１］ＪＯＬＬＥＹ　Ｖ　Ｄ，ＴＥＲＲＹ　Ｒ　Ｅ．ＢＲＯＷＮ　Ｊ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｅｒｒｉｃ　ｉｒｏｎ　ｂｙ　ｔｕｍｏｒｏｕｓ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｔｉｓｕｅ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉ—　ａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｅｌｌｓ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｂｙ　Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，１　９　９５，１８（１　２）：２　６８１—　２　６８９．　［１　２］ＳＡＳＡＫＩ　Ｋ．ＳＡＫＡＩ　Ｓ，ＫＡＭＡＤＡ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ　ＩＡＡ　ｉｎ　ｃａｒｒｏｔ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｓ　ｉｎｄｏｌｅ一３一　ａｃｅｔｙｌａ￣ｐａｒｔｉｃ（ＩＡＡｓｐ）ｂｙ　Ｌｃ／Ｍｓ［Ｊ］．Ｊ．Ｐｌａｎｔ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｒｅｇｕ１．，１９９４，Ｉ３：１８３—１８６．　［１３３　ＪＯＬＬＥＹ　Ｖ　Ｄ，ＴＥＲＲＹ　Ｒ　Ｅ，ＢＲＯＷＮ　Ｊ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｔｕｍｏｒｏｕｓ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｉｒｏｎ—ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｓｔｒｅｓｓ　ｉｎ　ｓｕｎ—　ｆｌｏｗｅｒ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ．１９９１，１４（６）：５３９—５５２．　［１４］ＪＯＬＬＥＹ　Ｖ　Ｄ，ＴＥＲＲＹ　Ｒ　Ｅ，ＢＲＯＷＮ　Ｊ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｔｕｍｏｒｏｕｓ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　ｉｒｏｎ—ｄｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｓｔｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｆｅ—　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　Ｔ３２３８ｆｅｒ　ａｎｄ　Ｆｅ—ｉｎｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　Ｔ３２３８ｆｅｒ　ｔｏｍａｔｏｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，１９９３，１６（６）：１　０２５—　１　Ｏ３７．　［１５３　ＢＲＯＷＮ　Ｊ　Ｃ，ＴＥＲＲＹ　Ｒ　Ｅ，ＪＯＬＬＥＹ　Ｖ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｒｏｎ（Ｆｅ　ｔｏ　Ｆｅ。　）ｂｙ　ｔｕｍｏｒｏｕｓ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｃｅｌｌｓ　ｏｆ　ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，１９９０・１３（１２）：１　５１３—１　５２１．　［１６］ＢＲＯＷＮ　Ｊ　Ｃ，ＪＯＬＬＥＴ　Ｖ　Ｄ．Ｐｌａｎｔ　ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｔｏ　ｉｒｏｎ—ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｓｔｒｅｓｓ［Ｊ］．Ｂｉｏ．Ｓｃｉ．，１９８９，３８：５４６－－　５５１．　［１７］ＰＨＩＬＬＩＰＳ　Ｒ，ＤＡＲＲＥＬＬ　Ｎ　Ｊ．Ｐｉｇｍｅｎｔ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｈｏｒｍｏｎｅ—ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ　ｃｅｌｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ　ｓｏｍａｔｉｃ　ｆｕｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐｅｔａ１　ａｎｄ　ｔｕｍｏｕｒ　ｐｒｏｔｏｐｌａｓｔ　ｏｆ　Ｐｅｔｕｎｉａ　ｈｙｂｒｉｄａ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｌｉｍｅｒｉｃｋ，１９９２，８３（１）：８５—１０２・　［１８］　ＭＥＴＴＲＩＥ　Ｒ，ＧＲＥＥＦ　Ｊ　Ｄ，ＮＡＫＡＧＡｗＡ　ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｅｎｔ—ｋａｕｒｅｎｅ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎｓ　ｉｎ　ａ　ｓｈｏｏｔ　ｆｏｒｍｉｎｇ　ｔｏｂａｃｃｏ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｔｉｓｓｕｅ［Ｊ＇］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ＇１９８８＇２９（５）：７７７－－７８４・　［１　９］ＬＯＰＥＺ—ＬＯＰＥＺ　Ｍ　Ｊ，ＶＩＣＥＤＯ　Ｂ，ＯＲＥＬＬＡＮＡ　Ｎ．ｅｔ　ａ１．Ｂｅｈａｖｉｏｒ　ｏｆ　ａ　ｖｉｒｕｌｅｎｔ　ｓｔｒａｉｎ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍ　Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉ一　“ｍ　ｒⅡｄｉｏｂａｆｔＰｒ　ｓｔｒａｉｎ　Ｋ８４　ａｆｔｅｒ　ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ　Ｔｉ　ｐｌａｓｍｉｄ　ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９９９，８９（４）：２８６－－２９２・　维普资讯 http://www.cqvip.com １２８８　西北植物学报　２２卷　［２０３　ＭＣＣＬＵＲＥ　Ｎ　Ｃ，ＡＨＭＡＤＩ　Ａ　Ｒ，ＣＬＡＲＥ　Ｂ　Ｇ．Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａ１　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｓｔｒａｉｎ　Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ　Ｋ８４：ａ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃａｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．　Ａｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄ　Ｅｎｖｌｒｅｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ．１９９８，６４（１０）：３　９７７—３　９８２．　［２１３　ＮＡＭ　Ｊ．ＭＹＳＯＲＥ　Ｋ　ｓ，ＺＨＥＮＧ　Ｃ．ｅｔ　ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｏｆ　Ｔ—ＤＮＡ　ｔａｇｇｅｄ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｍｕｔａｎｔ　ｔｈａｔ　ａｒｅ　ｒｅｓｉｓｔｅｎｔ　ｔｏ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｂｙ　Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ［Ｊ］．Ｍｏ１．Ｇｅｎ．Ｇｅｎｅｔ．，１９９９，２６１（３）；４２９～４３８．　［２２］ＯＴＴＥＮ　Ｌ，ＳＡＬＯＭＯＮＥ　Ｊ　Ｙ，ＨＥＬＦＥＲ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｅｆｔ—ｈａｎｄ　ｐａｒｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｔ—ｒｅｇｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｎｏｐｌｉｎｅ—ｔｙｐｅ　Ｔｉ　ｐａｓｍｉｄ，ｐＴｉＣＳ８ＥＪ］．Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９９，４１（６）：７６５—７７６．　［２３１　ＰＥＮＹＡＬＶＥＲ　Ｒ，ＬＯＰＥＺ　Ｍ　Ｍ．Ｃｏｃｏｌｏｎｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｈｉｚｏｓｐｈｅｒｅ　ｂｙ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｓｔｒａｉｎｓ　ａｎｄ　ｎｏｎｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｓｔｒａｉｎｓ　Ｋ８４　ａｎｄ　Ｋ１０２６，ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｅｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｉｃｒｏｂ！一　ｏｌｏｇｙ，１９９９，６５（５）：Ｉ　９３６—１　９４０．　［２４１　ＰＥＳＥＮＴＩ—ＢＡＲＩＬＩ　Ｂ，ＦＥＲＤＡＮＩ　Ｅ，ＭＯＳＴＩ　Ｍ．ｅｔ　ａ１．Ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ　Ｋ８４　ｏｎ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｃａｒ．　ｒｉｅｒｓ　ｆｏｒ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｃｏｎｔｒｏｌ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｅｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９１，５７（７）：２　Ｏ４７—２　０５１．　［２５］ＰＲＩＮＳＥＮ　Ｅ，ＢＹＴＥＢＩＥＲ　Ｂ，ＨＥＲＮＡＬＳＴＥＥＮＳ　Ｊ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｔｓ　Ｔ—ＤＮＡ　ｏｎｃ—ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ａｓｐａｒａｇｕｓ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｔｉｓｓｕｅｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ．１９９０・３１（１）：６９—７５．　［２６３　ＳＵＺＵＫＩ　Ｋ，ＨＡＴＴＯＲＩ　Ｙ，ＵＲＡＪＩ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｍｐｌｅｔｅ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ａ　ｐｌａｎｔ　ｔｕｍｏｒ—ｉｎｄｕｃｉｎｇ　Ｔｉ　ｐｌａｓｍｉｄ　［Ｊ］．Ｇｅｎｅ．，２０００。２４２（１—２）；３３１—３３６．　［２７１　ＷＩＬＬＭＩＴＺＥＲ　Ｌ．ＤＨＡＥＳＥ　Ｐ，ＳＣＨＲＥＩＥＲ　Ｐ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｓｉｚｅ，ｌｏｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｏｌａｒｉｔｙ　ｏｆ　Ｔ—ＤＮＡ—ｅｎｃｏｄｅｄ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ　ｉｎ　ｎｏｐａｌｉｎｅ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｔｕｍｏｒｓ；ｃｏｍｍｏｎ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ　ｉｎ　ｏｃｔｏｐｉｎｅ　ａｎｄ　ｎｏｐａｌｉｎｅ　ｔｕｍｏｒｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，１　９８３，３２　ｉ　１　０４５—　１　０５６．　［２８１　ＪＯＯＳ　Ｈ。ＩＮＺＥ　Ｄ，ＣＡＰＬＡＮ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｔ—ＤＮＡ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ　ｉｎ　ｎｏｐａｌｉｎｅ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，　１９８３．３２：１　０５７—１　０６７．　［２９３　ＢＲＯＥＲ　Ｉ，ＤＲＯＧＥ・ＬＡＳＥＲ　Ｗ，ＢＡＲＫＥＲ　Ｒ　Ｆ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｔｓ　Ｃ５８　Ｔ—ＤＮＡ　ｇｅｎｅｓ　ｅ　ａｎｄ　ｆ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｉｍｐａｃｔ　Ｏｎ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｔｕｍｏｕｒ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９５，２７（１）：４１—　５７．　［３ｏ３　ＬＩＣＨＴＥＲ　Ａ．ＢＡＲＡＳＨ　Ｉ，ＶＡＬＩＮＳＫＹ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｃｙｔｏｋｉｎｉｎ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　Ｅｒ￣ｉｎｉａ　ｈｅｒ—　ｂｉｃｏｌａ　ｐｖ．ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａｅ：ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｇａｌｌ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１９９５，１７７（１５）：　４　４５７—４　４６５．　［３１］ＳＵＲＩＣＯ　Ｇ，ＩＡＣＯＢＥＬＬＩＳ　Ｎ　Ｓ，ＳＩＳＴＯ　Ａ．Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｉｎｄｏ一３一ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｃｙｔｏｋｉｎｉｎｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｆｏｒｍａ・　ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｋｎｏｔｓ　ｏｎ　ｏｉｌｙｅ　ａｎｄ　ｏｌｅａｎｄｅｒ，ｐｌａｎｔｓ　ｂｙ　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｙｒｉｎｇａｅ　ｐｖ．ｓａｖａｓｔａｎｏｉ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏ１．Ｐｌａｎｔ　Ｐａｔｈｏ１．，　１９８５，２６：３０９—３２０．　［３２３　ＣＵＢＥＲＯ　Ｊ．ＭＡＲＴＩＮＥＺ　Ｍ　Ｃ，ＬＬＯＰ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ａ　ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ＰＣＲ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆＡｇｒｏｂａｃ—　ｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｔｓ　ｉｎ　ｐｌａｎｔ　ｔｕｍｏｕｒｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９９，８６（４）；５９１—６０２・　［３３］ＣＡＭＰＥＬＬ　Ｂ　Ｒ，ＴＯＷＮ　Ｃ　Ｄ．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ａｕｔｏｎｏｍｏｕｓ　ｔｉｓｓｕｅ　ｌｉｎｅｓ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍ　ｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｔｕｍｏｒｓ　ｏｆ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，１９９１，９７（３）；Ｉ　Ｉ６６一Ｉ　Ｉ７３．　［３４］ＨＯＬＬＡＮＤ　Ｌ．Ｆｏｒｅｉｇｎ　ｇｅｎｅ　ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｉｎｔｏ　Ｐｉｎｕｓ　ｒａｄｉａｔａ　ｃｏｔｙｌｅｄｏｎｓ　ｂｙ　Ａｇｒｏｂａｃｔｒｅｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ［Ｊ］．Ｎｅｗ　Ｚｅａｌａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８，２７（３）：２８９—３０４．　［３５３　ＷＥＩＬ　Ｍ，ＲＡＵＳＣＨ　Ｔ．Ｃｅｌｌ　ｗａｌｌ　ｉｎｖｅｒｔａｓｅ　ｉｎ　ｔｏｂａｃｃｏ　ｃｒｏｗｎ　ｇａｌｌ　ｃｅｌｌｓ．Ｅｎｚｙｍｅ　ｐｒｏｐｅｅｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｂｙ　ａｕｘ—　ｉｎ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｇｏｙ，１９９０，９４（４）：１　５７５—１　５８１・　［３６］ＷＥＩＬ　Ｍ，ＲＡＵＳＣＨ　Ｔ　Ｌ．Ａｃｉｄ　ｉｎｖｅｒｔａｓｅ　ｉｎ　Ｎｉｃｏｔｉａｎａ　ｔｕｂａｃｕｍ　ｃｒｏｗｎ—ｇａｌｌ　ｃｅｌｌｓ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｃｅｌｌ—　ｗａｌｌ　ｉｓｏｆｏｒｍＥＪ］．Ｐｌａｎｔａ。１９９４，１９３（３）：４３Ｏ一４３７．