喹烯酮对罗非鱼生长和体组成的影响及危害

饲料中镉与喹烯酮对罗非鱼生长和体组成的影响及危害

姓名：谭薇申请学位级别：硕士专业：食品安全生物学指导教师：刘永坚

20060606

中山大学硕士学位论文饲料中镉与喹烯酮对罗非鱼生长和体组成的影响及危害专业：食品安全生物学硕士生：谭薇指导教师：刘永坚教授摘要本论文包含两个试验，试验一：饲料中不同水平镉对罗非鱼生长及镉在体组织中积累的影响；试验二：喹烯酮对罗非鱼生长，体组成的影响。１．通过生长试验研究饲料中镉对罗非鱼生长及镉在组织中积累的影响。试验设计了４种等氮等能的饲料，进行为期３个月的试养试验。饲料中的镉以氯化镉的形式添加，添加量分别为０（对照组），Ｏ．５，１５，４５０ｍｇ／ｋｇ饲料。试验结果显示：高剂量的镉（４５０ｍｇ／ｋｇ）抑制了罗非鱼生长并降低了饲料效率，相反较低剂量的镉（Ｏ．５，１５ｍｇ／ｋｇ）对生长有促进作用。随着饲料中镉添加量的增加，罗非鱼肌肉和肝脏中的水分含量有上升的趋势，脂肪含量呈下降趋势，蛋白含量无显著性差异。罗非鱼肌肉、肝脏、肾脏、脾脏中镉的积累量随镉添加量的增加而增加，肝脏、’肾脏中镉的积累量最高，是镉积累的主要器官，其次为脾脏，肌肉中镉积累量最低。镉提高了锌在罗非鱼肌肉、肝脏、肾脏、脾脏中的含量。高剂量镉对罗非鱼肝脏和脾脏有一定程度的损伤。２．通过生长试验研究饲料中喹烯酮对罗非鱼生长、体组成的影响。试验设计了４种等氮等能的饲料，进行为期１２周的试养试验。饲料中喹烯酮的添加量分别为０（对照组），５０，２５０，５００ｍｇ／ｋｇ饲料。试验结果显示：在饲料中添加５０ｐｐｍ的喹烯酮对罗非鱼生长没有显著性影响，添加较高剂量喹烯酮（２５０，５００ｍｇ／ｋｇ）则会抑制生长，降低饲料效率。对照组肥满度、脏体比显著高于其他组。对照组与中山大学硕士学位论文５０ｐｐｍ饲料组的肝体比和肠脂比无显著性差异，但显著高于２５０ｐｐｍ和５００ｐｐｍ组。喹烯酮对罗非鱼全鱼的蛋白和灰分含量无显著性影响，水分含量随喹烯酮含量的增加而逐渐增加，脂肪含量则随喹烯酮添加量的增加而减少，对照组与５０ｐｐｍ组水分和脂肪含量差异不显著。随着饲料中喹烯酮水平的提高，肌肉和肝脏中的水分、蛋白含量呈增加趋势，脂肪含量呈下降趋势。高剂量喹烯酮对罗非鱼肝脏和脾脏有一定程度的损伤。关键词：罗非鱼，镉，喹烯酮，生长，积累，体组成ｌＩ’●中山大学硕士学位论文Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｃａｄｍｉｕｍａｎｄｑｕｉｎｏｃｅｔｏｎｅｏｎｇｒｏｗｔｈ，ｂｏｄｙｙｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｄｐｏｓｉｔｉｏｎＯｂ＂ａｎｄ］ｌｔｏｘｉｃｏｌ０２１ｖｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙａｌｉｔｏｆｔｉｌａＤｉａＭａｊｏｒ：ＦｏｏｄｓａｆｅｔｙｂｉｏｌｏｇｙＮａｍｅ：ＴａｎＷｒｅｉＳｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：ＬｉｕＹｏｎｇｊｉａｎｐｒｏｆｅｓｓｏｒＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅｒｅａｒｅｔｗｏｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｉｎｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅ．Ｏｎｅｉｓｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｅｔａｒｙｃａｄｍｉｕｍｇｒｏｗｔｈ，ｂｏｄｙｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄＣｄａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｔｉｓｓｕｅｓｏｆｔｉｌａｐｉａ．Ｔｈｅｏｔｈｅｒｉｓｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｑｕｉｎｏｃｅｔｏｎｅｏｎｇｒｏｗｔｈａｎｄｂｏｄｙｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｔｉｌａｐｉａ．１．Ａ３－ｍｏｎｔｈｆｅｅｄｉｎｇｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｅｔａｒｙｃａｄｍｉｕｍｌｅｖｅｌｏｎｇｒｏｗｔｈ，ｂｏｄｙｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄＣｄａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｔｉｓｓｕｅｏｆｈｙｂｒｉｄｔｉｌａｐｉａ．Ｔｈｅｔｉｌａｐｉａｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎａｃｌｏｓｅｄ，ｒｅｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｒｅａｒｉｎｇｓｙｓｔｅｍ．Ｆｏｕｒｄｉｅｔｓｗｅｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｅｄｔｏｂｅｉｓｏ－ｅｎｅｒｇｅｔｉｃａｎｄｉｓｏ－ｎｉｔｒｏｇｅｎｏｕｓ．Ｃａｄｍｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅｗｅｒｅａｄｄｅｄｔｏｔｈｅｂａｓａｌｄｉｅｔａｔ０（ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ），０．５，１５ａｎｄ４５０ｍｇＣｄ／ｋｇｄｉｅｔ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｈｉ曲ｅｓｔｄｏｓｅｏｆＣｄ（４５０ｍｇ／ｋｇ）ｉｎｈｉｂｉｔｅｄｇｒｏｗｔｈａｎｄｆｅｅｄｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｉｎｃｏｎｔｒａｓｔ，ｌｏｗｅｒｄｏｓｅｏｆｃａｄｍｉｕｍ（０．５，１５ｍｇ／ｋｇ）ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄｆｉｓｈｇｒｏｗｔｈ．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｐｒｏｔｅｉｎｏｆｍｕｓｃｌｅａｎｄｌｉｖｅｒａｍｏｎｇｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｍｏｉｓｔｕｒｅｍｕｓｃｌｅａｎｄｌｉｖｅｒｓｈｏｗｅｄｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｔｅｎｄｅｎｃｙ，ａｎｄｌｉｐｉｄｉｎｍｕｓｃｌｅａｎｄｌｉｖｅｒｓｈｏｗｅｄｉｎｖｅｒｓｅｔｅｎｄｅｎｃｙｗｉｔｈｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｌｅｖｅｌｏｆｃａｄｍｉｕｍ．Ｃａｄｍｉｕｍａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｍｕｓｃｌｅ，ｌｉｖｅｒ，ｋｉｄｎｅｙａｎｄｓｐｌｅｅｎｉｎｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｄｉｅｔａｒｙｃａｄｍｉｕｍ．Ｔｈｅｈｉｇｈｅｒｃａｄｍｉｕｍｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｆｏｕｎｄｉｎｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙ，ａｎｄｔｈｅｌｏｗｅｓｔａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｃａｄｍｉｕｍｗａｓｉｎｍｕｓｃｌｅ．Ｃａｄｍｉｕｍｃｏｕｌｄｒｉｓｅｚｉｎｃｌｅｖｅｌｓｉｎｔｉｓｓｕｅｓｏｆｔｉｌａｐｉａ．ＩＩＩｏｎｎｏｉｎｏｆ中山大学硕士学位论文２．Ａ１２．ｗｅｅｋｆｅｅｄｉｎｇｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｗａｓｃａｒｄｅｄｏｕｔｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｑｕｉｎｏｃｅｔｏｎｅｏｎｇｒｏｗｔｈａｎｄｂｏｄｙｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｔｉｌａｐｉａ．Ｔｈｅｔｉｌａｐｉａｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｆｌｏａｔｉｎｇｆｉｌｔｅｒａｑｕａｒｉａ。Ｆｏｕｒｄｏｓｅｏｆｑｕｉｎｏｃｅｔｏｎｅｗｅｒｅａｐｐｌｉｅｄｉｎｔｈｅｆｅｅｄ：０（ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ），５０，２５０ａｎｄ５００ｍｇ／ｌ【ｇｄｉｅｔ．Ｆｏｕｒｄｉｅｔｓｗｅｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｅｄｔｏｂｅｉｓｏｅｎｅｒｇｅｔｉｃａｎｄｉｓｏｎｉｔｒｏｇｅｎｏｕｓａｎｄｆｅｄｔｏｔｒｉｐｌｉｃａｔｅｇｒｏｕｐｓｏｆ３０ｆｉｓｈｅｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｗｅｒｅｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｇｒｏｗｔｈａｎｄｆｅｅｄｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｉｌａｐｉａｂｅｔｗｅｅｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄ５０ｐｐｍｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｈｉｇｈｅｒｄｏｓｅｏｆｑｕｉｎｏｃｅｔｏｎｅ（２５０，５００ｍｇ／ｋｇ）ｉｎｈｉｂｉｔｅｄｇｒｏｗｔｈ．Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓ（ＣＦ）ａｎｄｖｉｓｃｅｒｏｓｏｍａｔｉｃｉｎｄｅｘ（ＶｓＩ）ｗｅｒｅｈｉｇｈｅｒａｔｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｔｈａｎｏｔｈｅｒｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｒｅｗｅｒｅｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｈｅｐａｔｏｓｏｍａｔｉｃｉｎｄｅｘ（ＨＳＩ）ａｎｄｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃｆａｔｉｎｄｅｘ（ＭＦＩ）ｂｅｔｗｅｅｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄ５０ｐｐｍｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｖａｒｉａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｎｏｔｍａｒｋｅｄｉｎｐｒｏｔｅｉｎａｎｄａｓｈｃｏｎｔｅｎｔｏｆｗｈｏｌｅｂｏｄｙａｍｏｎｇｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｔｈｅｗｈｏｌｅｂｏｄｙｍｏｉｓｔｕｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄａｎｄｌｉｐｉｄｃｏｎｔｅｎｔｄｅｃｒｅａｓｅｄｗｉｔｈｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｉｎｃｌｕｓｉｏｎｏｆｑｕｉｎｏｃｅｔｏｎｅ．Ａｓｄｉｅｔａｒｙｑｕｉｎｏｃｅｔｏｎｅｌｅｖｅｌｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｍｏｉｓｔｕｒｅａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｉｎｍｕｓｃｌｅａｎｄｌｉｖｅｒｓｈｏｗｅｄｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｔｅｎｄｅｎｃ５ｂｕｔｌｉｐｉｄｓｈｏｗｅｄｉｎｖｅｒｓｅｔｅｎｄｅｎｃｙ．ＫｅｙＷｏｒｄｓ：Ｔｉｌａｐｉａ，Ｃａｄｍｉｕｍ，Ｑｕｉｎｏｃｅｔｏｎｅ，Ｇｒｏｗｔｈ，Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ，Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ．ＩＶ●中山大学硕士学位论文第一章综述１．１目的和意义罗非鱼（Ｔｉｌａｐｉａ）在鱼类分类上属鲈形目，丽鱼科，是一种典型的杂食性鱼类。罗非鱼原产于非洲，由于具有生长快、食性广、环境适应能力强、繁殖力强、养殖成本低、肉味鲜美、群体产量高等一系列优点，已成为世界上仅次于鲤科和鲑科的第三大养殖品种，在热带和亚热带地区广泛养殖（迟淑艳等，２００４）。我国自１９７８年引进罗非鱼养殖后，迅速在全国各地推广，目前我国罗非鱼养殖产量居世界首位，约占世界产量的６４％左右。我国饲养的罗非鱼的品种主要有尼罗罗非鱼、莫桑比克罗非鱼、黄边黑罗非鱼、奥利亚罗非鱼和奥尼罗非鱼等。饲料是动物的食物，动物产品又是人类的食物和食品工业的原料，所以饲料是人类的间接食品，与人民生活水平和身体健康息息相关，饲料安全是食品安全的一个前提。近几年来，由饲料安全问题引发的食品安全及环境污染事件屡屡发生，为社会公众和新闻媒体广泛关注。欧洲接连发生的“疯牛病”、“二恶英”等严重的饲料污染事件及国内的“瘦肉精”、“已烯雌酚”等违禁药物在饲料中添加使用都影响了动物健康，并通过食物链给人类健康带来了潜在的威胁。影响饲料安全的因素多种多样，包括饲料添加剂的非法使用，饲料原料的霉变污染，环境化学污染对饲料的影响等等。研究饲料质量和安全因素，建立有效的监督管理体系，对促进我国饲料产品质量，保证饲料产业的健康持续发展，动物养殖生产的高效安全，保障人类健康等都具有非常重要的现实意义。本文选取在环境中污染严重的镉金属和新型饲料添加剂喹烯酮为研究对象，探讨其对罗非鱼生长、营养组成的影响，获得饲料安全的状况参数，为寻求确保饲料安全的措施和途径提供指导。中山大学硕士学位论文１．２影响饲料安全的因素饲料安全，通常是指饲料产品中不含有会对饲养动物的健康造成实际危害和在动物产品中残留蓄积和转移的有毒、有害物质或因素；饲料产品以及利用饲料产品生产的畜产品，不会危害人体健康或对人类的生存环境产生负面影响（宋洪远等，２００３）。影响饲料安全的因素包括人为因素和自然因素两大部分，具体有以下几个方面：１．２．１饲料中添加剂使用不当饲料中使用饲料添加剂，主要是为了补充完善饲料的营养成分，提高饲料利用率，改善饲料口味，提高适口性，改进产品品质，增强养殖动物的抗病力、促进养殖动物生长发育，满足饲料加工过程中某些工艺的特殊需要等。由于饲料添加剂使用剂量小而作用效果显著，因此近年来逐渐成为配合饲料的核心，并且取得了长足的发展（宋志刚，２００４）。但是，由于部分饲料添加剂具有毒副作用，如果过量的、无标准的使用，会造成动物中毒，生产性能下降，进而危害人类健康。１．２．１．１非法使用违禁药物农业部２００２年发布了《食品动物禁用的兽药及其他化合物清单》除了禁用１３．兴奋剂类、激素类、催眠镇静类等药品外，还规定禁用氯霉素、硝基呋喃类、硝基咪唑类、．各种汞制剂、孔雀石绿等共计２１种药品及其他化合（李风娜等，２００５），强调严禁在饲料及饲料产品中添加未经农业部批准使用的兽药品种，严禁非法使用兽药。镇静类、激素类药物可在动物产品中蓄积残留，进而危害人体健康。使用抗生素类药物，能够提高动物机体抗药性并在动物中残留，人食用这类动物产品后也会提高人体抗药性，降低人和动物对疾病的抵抗力，甚至可能导致人体ＤＮＡ结构发生突变，从而造成致残、致畸、致癌的严重后果（万文根，２００４）。例如盐酸克伦特罗俗称“瘦肉精”，是一种激素类药物。其作为饲料添加剂可提高动物瘦肉率，降低脂肪沉积，改善饲料利用率。但盐酸克伦特罗化学结构稳定，耐受１００＂Ｃ的高温，容易在动物体内蓄积，人类食用含有盐酸克伦特罗的动物组织后易发生中毒，表现出心跳加速，四肢颤抖、腹痛头晕，同时有呼吸困难、恶心呕吐等症状。长期食用，可致染色体畸变，诱发恶性肿瘤（成亚宁等，２００５）。２中山大学硕士学位论文２００３年顺德市发生了１００余人集体食物中毒事件，经医院检查是饲料厂家在猪饲料中超量添加瘦肉精，猪摄食这样的饲料后，蓄积在体内，人食用后导致食物中毒。美国食品与药品管理局（ＦＤＡ）规定盐酸克伦特罗在动物体内的最高残留为：肉０．２∥ｇ／ｋｇ、肝０．６／Ｍｇ／ｋｇ、肾Ｏ．６／Ｍｇ／ｋｇ、脂肪０．２／Ｍｇ／ｋｇ、奶Ｏ．０５口ｇ，ｌ【ｇ。我国农业部也于１９９７年发文（农业部第１９３号公告）中将盐酸克伦特罗列为违禁药品，禁止用作饲料添加剂（王黔，２００４）。在实际生产中，一些企业和养殖户为了追求经济利润，不按国家规定执行，在饲料中非法使用违禁药品，影响了动物产品的安全和人类健康，对养殖业的可持续发展构成威胁。１．２．１．２过量添加饲料添加剂随着动物营养研究的不断深入，一些稀有元素和重金属元素已被确定为动物的必需元素，在促进动物生长、代谢、调节生理机能等方面起到了重要的作用，Ｆｑ粮供给不足或缺乏会导致缺乏症和生化变化。但这类物质的“安全剂量”和“中毒剂量”十分接近，必须严格掌握好饲料中的添加量。例如硒（ｓｅｌｅｎｉｕｍ）是一种有毒元素但又是生命活动所必需的元素，Ｈｉｌｔｏｎ等（１９８０）研究发现当水中含有０．４±０．２／ｔｇＳｅ／Ｌ时，红鳟食用１．２５／ｘｇＳｅ／ｇ的饲料时对鱼体组织没有明显的影响，如果长期食用添Ｄｎ３／ｚｇｓｅ／ｇ饲料，则会引起中毒，生长减退，死亡率高。刘发义等（１９９０）认为，对虾饲料中铜含量以５３ｍｇ／ｋｇ为宜，大于５３而致毒。ｍｇ／ｋｇ铜会在虾的肝胰脏中积累近几年的科学研究发现，如果饲料中过量添加某种或某几种元素，将会促进动物的生长，预防某些疾病的发生，最常见的是在饲料中添加过量的铜和锌。然而添加高铜的饲料可使动物肝胰脏中铜的残留显著增加，当猪饲粮中添加铜１００—１２５ｍｇ／ｋｇ时，肝铜含量升高２．３倍，添加铜２５０ｍｇ／ｋｇ时，肝铜含量升高约１０倍，添力Ｎ５００ｍｇ／ｋｇ时，肝铜含量升高可达７０倍（李凤娜等，２００５）：高铜会降低铁和锌的吸收，引起某些营养素的缺乏。动物对锌的耐受性较强，但饲料中添加过高水平的锌仍然会引起中毒，锌在动物体内代谢后随粪便排出，造成环境污染，水质恶化。由此可见，高铜高锌在饲料中的应用必然会对人类健康和生态环境产生不良的影响。中山大学硕士学位论文１．２．２环境中化学物质对饲料的污染化学物质的广泛应用，对现代工农业生产和社会生活起到了巨大的作用，但同时也污染了环境和食物链（于炎湖，２００３）。有毒有害化学物质随工业、采矿、交通、城市排污等排放到空气、土壤、湖泊海洋中并在环境中富集，导致饲料原料中也积累了一些对生物有害的过量的无机污染物如铅、镉、汞等重金属元素及氟、砷和硒等非金属元素，有时也含有一些有机污染物如Ｎ．亚硝基化合物（Ｎ．亚硝胺及Ｎ．亚硝酸胺）、多环芳烃类化合物、二恶英、多氯联苯等化合物，农药残留也是一方面。这些污染物都具有在环境、饲料和食物链中富集、难分解、毒性强等特点，对饲料安全性和食品安全性威胁极大（罗智等，２００３）。因此控制饲料和食品化学性污染已成为人们面临的一项重大课题。如二恶英（ｄｉｏｘｉｎ）是由２１０种氯代芳香烃组成的混合物，是多氯代二苯并二恶英（ＰＣＤＤｓ）和多氯代二苯并呋喃（ＰＣＤＤＦｓ）的总称。其中对人和动物有害的近２０种。二恶英的毒性与氯原子取代的位置有关，以２、３、７、８四氯代二苯并二恶英（ＴＣＤＤ）毒性最强，是氰化钟的５０～１００倍。二恶英具有亲脂性和极强的化学稳定性，难以化学分解和生物降解。当其进入环境或生物体内时，可长期蓄积并危及动物与人类健康（于炎湖，２００３）。二恶英进入机体后的主要靶器官是肝脏，可引起肝肿大、胆管过度增生及酶系统的功能变化，还能够干扰内分泌和破坏免疫系统，和强致畸、致癌作用。Ｋｏｃｉｂａ等（１９９８）在ＴＣＤＤ的毒性试验中发现，食用０．０１和０．１肛ｇ，ｋ簖Ｕ量组的雌性小鼠中观察到肝细胞癌。Ｔｏｔｈ等（１９７９）人在用小鼠进行的灌胃试验研究中也发现０．１，，ｇ／ｋｇ的剂量使肝细胞中的肿瘤增加。Ｌｕｎｄｅｂｙｅ等（２００４）人研究发现食用饲料中含有二恶英的大西洋鲑肌肉中二恶英的积累量随饲料中二恶英含量的增加而增加。农药是一类有毒化学物质，农药残留是指农药使用后，其母体、衍生物、代谢物、降解物等在农作物、土壤、水体中的残留（边连全，２００５）。在联合国环境规划署公布的１２种持久性有机污染物中有１０种都是有机农药，包括六六六、ＤＤＴ等，这些物质化学性质稳定、残留期长、易于富集、具有极大的危害。动物产品中的农药残留主要来自饲料，饲料原料中积累了有毒物质，通过食物链传递给动物，因此必须从源头上控制饲料安全，保障动物健康。４中山大学硕士学位论文１．２．３饲料中天然的有毒有害物质有些饲料成分中含有一定量的有毒有害物质和抗营养因子，例如棉籽饼粕里的棉酚，菜籽饼粕里的芥子苷，亚麻籽饼粕里的氰苷等有毒物质：麸皮里的植酸，大豆及其饼粕里的胰蛋白酶抑制因子等抗营养因子。在配合饲料时，如果某些含有毒物和抗营养因子的原料比例过大，或饲喂时间过长，就会引起相应得有毒物质中毒或降低饲料的消化吸收率和营养价值，破坏动物体内的正常代谢，因此在养殖过程中决不能忽视饲料中固有毒物和抗营养因子的危害（贺普霄，２００３）。如棉籽饼粕中的棉酚是一种奢细胞性，血管和神经性毒物，进入消化道后，对粘膜发生刺激，引起胃肠炎。棉酚能增强血管壁通透性，促进血浆和血细胞渗到外周组织，使受害组织发生血浆性浸润和出血性炎症。其在体内可影响铁和蛋白质的代谢，使之不能被吸收利用。棉酚溶于磷脂，能在神经细胞中积累，使神经系统机能紊乱。用棉籽粕作为蛋白源，棉籽粕含量低于２６．５％时，对虾的生长率、摄食率、存活率没有显著差异，当饲料中棉籽粕含量超过２６．５％时，对虾生长出现负面反应，而棉籽粕含量达３９．８％时，会抑制虾体生长，摄食量减少，死亡率增高（Ｌｉｍ，１９９６）。Ｍａｋｋａｒ等（１９９３）把抗营养因子定义为：生物中固有的或其代谢产生的对饲料中营养物质的消化、吸收和利用以及对动物的健康和生产能力具有不良影响的物质。大多数植物饲料中抗营养因子是在进化过程中逐渐形成的，用于保护自身，抵御自然灾害，如昆虫、鸟类、细菌或者真菌的危害等。但是由于养殖动物和微生物以及昆虫的消化过程具有某种程度的相似性，故而我们用含有抗营养因子的植物饲喂养殖动物时，抗营养因子可能以相似的方式干扰和影响养殖动物的消化过程，这就是抗营养因子影响饲料营养价值的基本原理。在配合饲料时，一定要掌握不同饲料原料中有毒有害物质的性质含量，计算适宜的添加量，并可对其进行脱毒处理（加热，化学处理法、发酵法等），充分利用我国资源丰富的饲料原料（棉籽饼粕、菜籽饼粕等），降低毒副作用，提高营养价值。中山大学硕士学位论文１．２．４微生物污染饲料饲料中的病源微生物是指饲料原料、半成品、成品中存在的或污染的，可引起饲料变质并直接影响动物健康、间接影响人类健康的生物，包括致病性细菌（如沙门氏菌、大肠杆菌）、各种霉菌（如曲霉属、青霉属、镰刀菌属等）及其毒素、病毒、寄生虫等（罗智等，２００３）。饲料中营养成分齐全，是滋生微生物的良好培养基，如果饲料在运输、储存、加工过程中保管不善或储存时间过长，就很容易受微生物污染，降低了饲料的营养价值，破坏适口性，影响饲料安全。１．２．４．１饲料霉变饲料最容易受霉菌污染，造成饲料变质、变色、变味。有试验表明，污染霉菌的饲料脂肪含量减少，蛋白质也受到一定程度的破坏，尤其是赖氨酸和精氨酸含量显著下降，维生素含量降低（余伯良，１９９８）。有些霉菌在代谢过程中还能产生霉菌毒素，危及动物健康和生存，较常见有黄曲霉素、玉米赤毒素、玉米赤霉烯酮和单端孢霉菌毒素，其中黄曲霉毒素毒性最强。黄曲霉毒素能够减缓鱼体生长，破坏免疫系统，具有致癌性，其毒性主要是在肝脏中。黄曲霉素主要有Ｂ１、Ｂ２、Ｇ１、Ｇ１四种，其中Ｂ１含量多，毒性大。Ｎｇｕｙｅｎ等人（２００２）研究表明食用８周含有黄曲霉素Ｂ１０．２５ｍｇＣｋｇ饲料的尼罗罗非鱼的增重率、血球数与对照组没有明显差异，但食用含较高水平黄曲霉素饲料组的罗非鱼的增重率和血球数有明显的减少。食用１０ｍｇ／ｋｇ组罗非鱼的肝脏中含有许多的脂褐质，并且肝细胞核大小不规则。食用１００ｍｇ／ｋｇ组出现负增长，肝组织损坏严重，试验结束时，存活率仅为４０％。不同种鱼对黄曲霉素的易感性有很大的差别，虹鳟对黄曲霉素极度敏感（Ｈｅｎｄｒｉｃｋｓ，１９９４），而鲶鱼则对较高剂量的黄曲霉素才有反应（Ｊａｎｔｒａｒｏｔａｉ１９９０）。ｅｔａｌ，一１．２．４．２饲料细菌性污染与危害饲料的致病性细菌污染主要是沙门氏菌污染和肉毒梭菌污染。特别是沙门氏菌污染，最为常见。其次是腐败菌污染，主要包括大肠杆菌和枯草杆菌。畜禽饲用含有沙门氏菌的饲料，如果菌量达到一定的数目就可能引发猪霍乱、牛肠炎、中山大学硕士学位论文鸡白痢等疾病。沙门氏菌又是细菌中危害最大的人畜共患病原微生物，人类食用含有沙门氏菌的食物后会引起食物中毒。预防微生物污染饲料必须把握好饲料原料、生产加工、储藏运输、饲养使用几个环节，保障饲料安全。１．２．５转基因饲料安全随着基因工程与分子生物学的发展，人们已经能够按照某种需要来改进生物的性状，产生了转基因作物。转基因饲料也应运而生。转基因饲料是指含有转基因生物或由转基因生物制成的饲料。目前，在我国的饲料中已发现含有转基因成分。转基因饲料的安全性问题还存在广泛的争议，其安全忧患主要表现为：一转基因饲料可能直接存在的毒性或抗营养作用，或由转基因片段编码的蛋白质可能产生的过敏反应。Ｈａｍｍｏｎｄ等人（１９９６）报道转基因大豆饲料对鲶鱼，小鼠、鸡、牛的生长、增重、饲料转化率等都没有显著的影响；Ｈａｒｒｉｓｏｎ等人（１９９６）报道抗草甘膦大豆外源基因编码的蛋白在小鼠的肠胃中能够很快被蛋白酶降解，不会产生毒性。虽然到目前为止没有关于食用转基因大豆饲料导致动物中毒或过敏等症状的报道。但转基因饲料应用于生产及消费的时间尚短，其毒性、致敏性等问题问题还需要长时间的验证与研究。二对肠道微生物的生态学和新陈代谢的间接或意料之外的作用，以及可能发生的转基因对肠道固有微生物区系的进一步基因转移。肠胃中含有大量的ＤＮＡａｓｅｓ及胃酸，人们一直认为ＤＮＡ片段进入肠胃后很快就能被降解掉，而且转基因作物中的外源片段非常小，人或动物对转基因片段的摄入量与每天摄入的总物质的ＤＮＡ相比是微乎其微的，理论上转基因片段可以被全部降解掉，不会对人体健康造成任何危害。但是在Ｓｃｈｕｂｂｅｒｔ等人（１９９７）在对小鼠的研究中却发现的一部分食入的ＤＮＡ能够在消化道中被降解掉，还有一部分ＤＮＡ能够穿过胃肠道壁进而进入到白细胞，肝脏等其他的组织器官中。ｍｏｎｉｃａ等人（２００４）报道在食用６周含有转基因大豆饲料的鲑鱼的肠胃中检测到外源ＤＮＡ片段，肝脏、肌肉及脑中没有发现转基因片段。转基因片段可能对不同种鱼的影响作用不同；也可能由于转基因成分在不同的饲料中的含量不同造成不同的结果，转基因片段在肠胃中的影响还需进一步的研究。中山大学硕士学位论文三食物链中有益物质的富集或有害物质的聚集对上一级生物的健康极为关键，转基因饲料对食物链可能产生的安全性问题也不容忽视。包括用转基因饲料喂养动物，如果转基因片段在动物体内富集会产生什么样的影响，对后代会有什么影响，由动物生产出的产品会对人有什么样的影响等问题。Ｈａｍｍｏｎｄ等人（１９９６）报道转基因大豆饲料对鲶鱼的鱼肉成分没有任何影响，可以安全食用。Ｐｈｉｐｐｓ等人（２００２）报道用转基因大豆饲料喂养的牛的牛奶中没有发现转基因片段。虽然转基因大豆饲料在短期内对食物链尚未造成任何影响，但其安全性还需时间验证。转基因饲料对于我们来讲仍然是新事物，其某些危害还难以预料，在尚未完全了解其安全性之前，我们应该保持谨慎的态度。１．２．６饲料加工工艺在饲料加工和管理过程中也存在一些影响饲料安全的因素。例如饲料加工过程中所用的金属机械、管道、容器等可能含有某些重金属元素，在一定的条件下通过各种形式进入饲料（李凤娜等，２００５）。在饲料提升和管道中积存的物料，如果未定期清理，以及原料仓长期不清理或受到污染，易引起霉变（于炎湖，２００３）。因此对饲料生产的各个环节都要严格把关，生产高效安全的饲料。１．３镉的毒性及其研究进展１．３．１镉概述镉（Ｃａｄｍｉｕｍ）是一种高毒性的重金属元素（Ｒｏｅｓｉｊａｄｉｅｔａｌ，１９９４）。镉位于元素周期表第五周期，原子序数为４８，原子量为１１２．４。它是一种具有银白色光泽、延展性好、耐腐蚀的稀有金属，密度为８．６５ｇ／ｅｍ３（２５。Ｃ），难溶于水。相对其他重金属，镉的熔点和沸点都较低（熔点３２０．９。Ｃ，沸点７６５。Ｃ）。镉的半衰期较长，约１６。３８年。在自然状态下镉通常是以＋２价的形式与其他元素结合在一起存在，如镉氧化物、镉氯化物、镉硫化物等，以氧化物、硫化物形式混合在锌、铜和铝矿石内最为常见。由于镉具有较特殊的理化性质，在工农业和人们日常生活中应用广泛。如利Ｒ中山大学硕士学位论文用其低熔点的特性，镉常被掺于铜、铁、铝等金属中构成低熔点合金用于电焊中；利用镉的耐腐蚀性，镉常被镀于其他金属表面增加金属的强度和抗腐蚀性；此外，镉在颜料工业、半导体、荧光体、杀虫杀菌剂等方面也有广泛的使用。正是由于镉的广泛使用，大大加剧了镉对环境的污染，也使得镉对农业、养殖业和人类健康潜在的危害性日益严重。１．３．２重金属镉污染概述自然界中原有的镉的化学循环处于生态平衡中，不会造成公害，但在人类活动参与下，将地下岩石圈中含镉的矿物开发利用，又将大量废弃物以渣、烟和废水的形式向环境中排放，从而引起环境有害的变化，甚至威胁到人类健康，这种状况就称之为镉污染（段玉梅，２００３）。大气中的镉污染主要来自于石油、燃煤的焚烧和冶炼、化工废气的排放等，镉以颗粒物散射形式分布于空气中，进入大气中的镉大部分在排除后不久就沉降到地表。因此大气镉污染对环境人类的直接影响是不严重的，除污染源周围的大气中有较高水平的镉外，一般非排放地区空气中的镉浓度都很低。水体中的镉污染主要是来自采矿、工农业和生活排放的废水。水环境中的镉经食物链富集可达相当高的浓度，如藻类富集１１＂～２０倍，鱼类富集１０３＂～１０５倍，贝类富集１０５－－－１０６倍，非污染区螺贝类镉含量为０．１０５ｍｇ／ｋｇ，污染区螺贝类含量可高达４２０ｍｇ／ｋｇ（于炎湖，１９９２）。土壤中的镉污染主要是污染废水灌溉、含镉磷肥、矿物复合肥等废料。土壤污染在我国相当严重，我国土壤的自然含镉量平均为０．１６３ｍｇ／ｋｇ，某些矿区和工业污染区土壤中的镉含量可达很高水平，如我国沈阳张土灌溉区土壤的可溶性镉含量达６．５５ｍｇ／ｋｇ（廖自基，１９９２）。镉通过污染地域生长的青饲料、含镉矿物添加剂等的使用进入动物体内，降低动物质量，进而影响人类健康。１．３．３镉对鱼类生长发育的影响鲫鱼在食用３０天含有不同水平镉的饲料后，中间剂量组（１８ｍｇ／ｋｇ）的鱼表现出了最高增重率，显著高于对照组（Ｏ）和低剂量组（０．５ｍｇ／ｋｇ），高镉剂量组（６４８ｍｇ／ｋｇ）增重率最低，并出现鱼体肝脏发黑，肾脏肿胀的现象（丁磊等，２００２）。Ｓｚｃｚｅｒｂｉｋ等人（２００６）报道镉含量较低的试验组与对照组相比能够促进金鱼的生９中山大学硕士学位论文长，而高含量组则抑制生长并且试验金鱼有厌食，游动缓慢的现象。Ｍａｒｃ等人（２００１）报道，在４个月的试验中，不同水平的镉对大西洋鲑的生长没有显著的影响，但鱼体肝脏的蛋白和脂肪含量随镉含量的增加而减少。不同种的鱼对镉反映敏感程度可能不同。在上述前两个试验中，金属镉离子表现出了低剂量促进，高剂量抑制生长的现象，这种现象在毒理学上被称为毒物兴奋效应（ｈｏｒｍｅｓｉｓ）（张铣等，１９９７）。Ｚｇｌｉｎｉｃｋｉ等（１９９２）人认为这种现象产生的原因是低剂量的镉能够促进ＤＮＡ的合成和细胞增殖。Ｒｏｂｏｈｍ（１９８６）则认为低剂量的镉能够刺激生物体产生更多数量的抗体，从而增强免疫能力，促进生长。目前对于ｈｏｒｍｅｓｉｓ现象机理尚无定论。高剂量的镉会影响食物的消化、吸收及代谢，最终抑制了生长（丁磊等，２００２）。同样的结果在虹鳟中也观察到（ＭｃＧｅｅｒ２００２）。ｅｔａｌ，２０００；Ｈａｎｓｅｎｅｔａｌ，１．３．４镉对鱼类免疫系统的影响镉能够造成水生动物免疫障碍，使水生动物机体免疫力下降，增加感染率（刘洪伟等，２００５）。将鲤鱼暴露于含有浓度为５矛１３５ｍｇ／Ｌ的镉离子水中，５ｍｇ／Ｌ的镉使得鲤鱼对兔红细胞的免疫滴定显著降低，第二抗体的凝聚反映基本不存在，两种浓度下鱼鳃的第二片层出现水肿并伴随大量的粘液细胞的降低，镉对鲤鱼的免疫功能影响较大并能增加对疾病的敏感性（Ｓｏｖｅｎｙｉｅｔａｌ，１９９３）。暴露在低、中、高三种剂量下的鲫鱼的血白细胞数随镉浓度的增加而有下降的趋势，血清溶菌酶随浓度的升高而升高，镉对鲫鱼的免疫功能有一定的影响（董书芸等，２００１）。Ｚｅｌｉｋｏｆ降（１９９５）曾对暴露于同一镉浓度（２ｐｐｂ）但时间不同（８、１７、３０天）的鳟鱼进行了研究，发现在各时间的鳟鱼血清溶菌酶含量并无显著性差异。镉对免疫系统的影响复杂，不少问题尚未明确，有待于今后深入研究。１．３．５镉对鱼类生理、生化的影响贾秀英等（１９９７）对鲫鱼的研究发现，水中一定浓度的镉离子能引起鲫鱼肝胰脏、肾脏、鳃的过氧化氢酶活性的显著增强。但体外条件下酶反应液中直接加入不同浓度的镉却不能明显提高该酶的活性，从而推出镉中毒引起了鱼的异常生理变化，使过氧化酶活性升高，以增强自身的防御。Ａｌｍｅｉｄｅ等（２００１）研究发现，１０中山大学硕士学位论文罗非鱼暴露于含镉３２０．２５６０声，ｇ／Ｌ的水环境中，７天后白肌肉中磷酸果糖激酶（ＰＦＫ）、乳酸脱氢酶（ｕ）Ｈ）、肌酸激酶（ＣＫ）活性下降，白肌肉组织糖酵解能力明显受到影响。Ｔｏｒｒｅ等（２０００）将幼鲤暴露于１．６ｍｇ／Ｌ镉ｑｕｌ４天，然后转移至清水１９天，结果发现鱼鳃ＡＴＰａｓｅ活性变化不尽相同，Ｎａ切ｏ．ＡＴＰａｓｅ酶活性下降３０％，而Ｍ９２＋．疋曙ａｓｅ显著上升７０％，肝谷草转氨酶（ＧＯＴ），谷丙转氨酶（ＧＰＴ）活性分别上升６３％和９８％，１９天恢复期后，Ｍ９２＋＿ＡＴＰａｓｅＮＧＰＴ恢复正常，ＧＯＴ出现不可逆性改变，因此认为镉对鲤鱼易产生不良影响，酶的变化破坏了鱼体内的渗透压和离子平衡，影响了鱼类正常的生理、生化及其代谢过程。惠天朝等（２００４）将尼罗罗非鱼分别在含镉Ｏ．５ｍｇ／ＬＮ５．０ｍｇ／Ｌ的水环境中染毒２８天，高镉组的乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）、丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）、和天门冬氨酸氨基转移酶（ＡＳＴ）的活性显著降低，而低镉组的ｕ）Ｈ则有升高的趋势，说明高浓度镉可引起鱼体代谢障碍，使鱼的组织细胞受到不同程度的损害。１．３．６镉与金属硫蛋白金属硫蛋白（Ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）首次在马肾中被分离出来，它是一种低分子蛋白，具有高度的保守性，分子量一般在６０００．７０００道尔顿。目前已发现这种蛋白广泛存在于原生动物、植物和无脊椎、脊椎动物中。金属硫蛋白分布于动物的各种组织中，以肝、肾中含量最高（Ｒｏｅｓｉｊａｄｉ，１９９６）。ＭＴ对二价金属离子具有极高的亲和力，它在机体内的主要功能是结合锌、铜等必需金属调节这些金属在细胞内的浓度；结合镉、汞等离子解除这些重金属的毒性，保护细胞器免受毒性影响；抗应激反应，增强机体对各种不良状态的适应能力等（Ｂｒｚｏｓｋａｅｔａｌ，２００１）。金属硫蛋白在机体正常水平有一定量的表达，但它具有很强的诱导性，当有毒金属如镉进入机体后，金属硫蛋白在镉酌刺激下可大量的表达，与镉结合形成十分稳定的结合物（Ｃｄ．ＭＴ），在动物体内降解缓慢，只要细胞能正常工作就可以不断的被诱导表达出ＭＴ，这也是镉在体内存在积累的主要形式和原因。Ｈａｎｓ等（２００１）报道将鲤鱼暴露于含有不同镉浓度的环境中２９天后，组织中金属硫蛋白的含量与镉浓度成正相关，且肾脏中金属硫蛋白增长最快。Ｄｅｃｏｎｔｏ等（１９９８）也研究发现暴露于Ｏ．４４ｍｇ／ＬＮｌｌ５天后的鲤鱼，肝脏和肾脏中的ＭＴ含量显著增加。中山大学硕士学位论文１．３．７镉与其他金属离子间的相互作用生物体内复杂的元素之间普遍存在相互作用或相互影响，主要表现为协同作用和颉抗作用（李爱杰，１９９６）。以＋２价离子态存在的镉可以通过与钙、锌等元素在许多物质间发生竞争和置换作用并体现出其毒性。镉离子与钙离子携带相同的电荷数，且离子半径十分接近，因而推测镉通过与钙竞争直接抑制细胞对钙的主动运转（张亚利等，２００４）。钙是体内的第二信使，与细胞内的ＣａＭ结合共同参与完成肌肉收缩、细胞增殖、糖代谢等生化调节过程，如果镉与ＣａＭ结合，就会阻碍钙的生物学功能，导致机体发生一些列生理功能紊乱。镉和锌在元素周期表中属于同一族元素，许多性质相近，容易同型置换，抑制锌的生物学功能的发挥。但有些研究发现，镉暴露动物的肝、肾等组织中锌的含量不是下降而是增多，这可能与体内ＭＴ的合成及分布有关。１．３．８镉在鱼体内的生物富集镉进入鱼体后，可广泛的在各个组织和器官中分配，但不同部位对镉的富集能力不同，一般为内脏＞鳃＞肌肉，且鱼体对金属元素的富集作用随时间的增加而增加，在一定时间后趋于平衡（孟晓红等，２０００）。不同的鱼类对镉的富集能力也不相同，刘钧等（１９９６）调查发现在同一水库中鱼体中镉含量的基本顺序是：鳙鱼＞鳊鱼＞鲫鱼＞鲤鱼＞黄颡鱼＞鲂鱼＞乌鳢。镉在鱼体内的富集作用还与镉的形态、水温、暴露时间等因素有关，例如鲤鱼在镉呈离子状态环境中，当温度升高时，其生命活动加快，体内物质与外界环境的交换能力增强，镉在鱼体内的富集明显增加。Ｃｏｎｔｏ等人（１９９９）将鲤鱼暴露于含Ｃｄ２＋的水体１２７天后，Ｃｄ在肾脏、肝脏中积累明显，肌肉中Ｃｄ的积累在１０６天后才能够被检测出，Ｃｄ２＋积累后的排除在肌肉中较快，而未发现Ｃｄ２＋在肝脏、肾脏中被排除。Ｍｅｌｇａｒ等（１９９７）报道Ｃｄ２＋在虹鳟体内短期积累的器官主要是肾脏，肝脏、鱼鳃和肌肉组织中的积累不显著，鱼体内镉的积累量和暴露浓度呈线性关系。比目鱼在含有Ｃｄ２＋环境中生活２０天后，镉在组织中积累量为鳃＞肠道＞肝脏＞肾脏＞肌肉，３０天后镉积累量肠道＞鳃＞肝脏＞肾脏＞肌肉，经过２０天恢复期后，组织中镉的排出率为肠道＞肝脏＞鳃，而肾脏和肌肉中的镉含量没有明显变化（Ｓｅｏｎｇｅｔａｌ，２００４）。镉在鱼体１２中山大学硕士学位论文中的积累和排出受到时间、温度、鱼的年龄、鱼体代谢活性及鱼的种类等多种因素的影响（Ｎｉｅｌｓｅｎ，１９９６）。１．３．９镉对动物和人类的危害镉是生物机体生长发育的非必需元素，是一种多器官、多系统的毒物，也是一种重要的环境和工业毒物。上世纪六十年代日本发生的“骨痛病”就是由于人体中的含镉量过高引起的。镉对动物和人体的损伤是多方面的，具有致癌、致畸、致突变作用。１９７２年，ＦＡＯ／ＷＨＯ就把镉列为第三位优先研究的食品污染物，１９７４年联合国环境规划局将其定为重点污染物，后美国毒物管理委员会（ＡＴＳＤＲ）将其列为第六位危及人类健康的有毒物质（谢黎虹等，２００３）。镉主要通过食物链进入人体内，威胁人类健康。镉可造成动物骨矿物质代谢障碍，影响成骨细胞的形成而导致骨质疏松。镉可以降低动物角膜内皮完整性（Ｗｅｉｄｎｅｒｅｔａｌ，１９９７）；镉能引起肺水肿、肺气肿等肺部的损伤，引起心血管的损伤（曾昭华，１９９７）；镉还ｚ月‘匕ｌ－．引起前列腺、睾丸的肿瘤，此外镉对肾脏、肝脏和脑均有一定程度的损伤（刘杰，１９９８）。１．４喹烯酮在饲料中的应用研究喹乙醇（Ｏｌａｑｕｉｎｄｏｘ）是一种化学合成的抗菌促生长剂，近年来已在我国养殖业中广泛的应用，但如果实际生产中使用不合理，就会造成动物中毒和残留积蓄，给养殖业和人类健康带来隐患（耿毅等，２０００）。喹烯酮（Ｑｕｉｎｏｃｅｔｏｎｅ）是我国自主研制开发的一种新型饲料添加剂，具有高效、安全、添加量少等特点，可使猪、鸡增重１５％．２０％左右，其抗菌谱广，对多种致病菌有抑制作用，被称为喹乙醇的替代品。我国农业部已于２００３年８月２６日发布公告，正式批准喹烯酮为国家一类新兽药（邹仕康，２００５）。１．４．１喹乙醇在饲料中的应用研究喹乙醇又名喹酰胺醇，化学名称为２．甲基．３．羟乙酰胺基．喹恶啉．１，４．二氧化物，分子式为Ｃ１２Ｈ１３Ｎ３０４，属喹恶啉类药物。喹乙醇为浅黄色结晶性粉末，常温下性质１３中山大学硕士学位论文稳定，微溶于冷水，在热水中能够溶解，熔点为２０７．２１３℃。喹乙醇能够提高饲料转化率、促进动物生长，这在畜禽和水产动物中已经有了较多的研究报道。王盛伦等（１９９４）研究表明喹乙醇对草鱼和罗非鱼幼鱼有明显的促生长作用，且草鱼以１００ｍｇ／ｋｇ，罗非鱼１２５ｍｇ／ｋｇ为最宜添加量。沈维华等（１９９５）、张梁等（１９９８）分别在团头鲂和斑点叉尾鲴试验中添加喹乙醇１００ｍｇ／ｋｇ的剂量，获得了良好的促生长效果，也显著改善了饲料利用率。蔡春芳等（２００２）在银鲫的饲料中加入１００ｍｇ／ｋｇ的喹乙醇进行了１６周的饲养，发现６周后银鲫的增重率和饲料效率显著高于对照组，但１６周后增重率与对照组无显著差异。在家禽中也同样观察到喹乙醇促生长的效果（孟宪平等，１９９９；刘利林等，２００３）。喹乙醇在适宜的添加剂量范围内，对不同养殖动物的生长性能均有不同程度的改善。Ｃｏｒｐｅｔ（２０００）认为喹乙醇促生长的作用在于其改善了动物肠道中菌群的数量与组成。叶继丹等（２００３）在鲤鱼的试验中也发现添加不同剂量的喹乙醇可导致鲤鱼肠道菌群数量比对照组有不同程度的下降，菌群种类组成也随喹乙醇的添加水平提高而发生不同程度的变化，喹乙醇的促生长作用可能与其影响肠道菌群数量组成有关。林仕梅等（１９９８）在草鱼的试验结果中显示，腹腔内注射喹乙醇后，草鱼的鳃、心脏、肝胰脏和肌肉中的谷草转氨酶和谷丙转氨酶活力随时间延长先下降再回升至接近正常水平，因此认为转氨酶活性降低，氨基酸分解代谢减弱，使更多的氮储存于体内，合成更多的蛋白，从而促进了生长。郭小权等（２０００）也认为喹乙醇能够提高氮的生物学价值，促进氮的沉积，使得蛋白质增多。抗菌素的促长机制十分复杂，关于喹乙醇促生长的机制目前已提出了若干种理论，但尚无定论，还有待于进一步深入研究。喹乙醇在促进生长的同时，也能够降低粗脂肪含量，增加动物的瘦肉率（郭庆等，１９９７）。叶金云等（１９９２）在对一龄草鱼的研究中发现，喹乙醇对草鱼的肥满度无显著影响，对提高肌肉蛋白和灰分含量，降低脂肪含量有一定的作用。沈维华（１９９５）对试验的团头鲂鱼体组成进行分析，也发现喹乙醇可提高鱼体蛋白含量，降低脂肪含量。在建鲤的生长试验中也得到了相似的结果（文良印等，１９９５）。喹乙醇对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有很强的抑菌作用，尤其对革兰氏阴性菌作用效果更显著，与很多抗生素（如四环素、氯霉素等）不产生交叉耐药１４中山大学硕士学位论文性（张乔，１９９５）。夏式阶等（１９８５）进行了喹乙醇对１９种病原菌的敏感性试验，结果发现喹乙醇对大肠杆菌、巴氏杆菌、雏沙门氏菌、志贺氏菌等１８种菌（除绿脓杆菌）敏感，并有明显的抑菌作用。喹乙醇具有中等或以上的蓄积毒性，也就是说在动物体内有一定的残留，当体内蓄积达到一定程度时，会引起动物中毒，甚至死亡（袁显峰等，２００５）。饲料中较大剂量或长时间的使用喹乙醇，容易在动物体内产生残留。杨先乐等（２００５）在饲料中添３ｎ３５０ｍｇ／ｋｇ和４００ｍｇ／ｋｇ喹乙醇连续９９天投喂鲤鱼和银鲫，发现无论是鲤鱼还是银鲫，肝脏中喹乙醇积累量最高，其次是肾脏，肌肉中积累量较少，并且积蓄随投喂时间的延长而增加，鱼体的抗应激反应也明显下降。汪开毓等（２００３）在喹乙醇对鲤鱼组织中残留影响的试验中也得到相似的结果。研究表明肝脏、肾脏是喹乙醇积累的主要器官。喹乙醇在鲤鱼体内消化、吸收很快，但消除却较慢，应用较小剂量就能维持较长时间（曾子健，１９９３）。鲤鱼的喹乙醇蓄积毒性试验表明，喹乙醇在鲤鱼体内的蓄积系数为１．４５．１．９０，根据蓄积作用的评价标准，喹乙醇在鲤鱼体内有明显的蓄积作用，病鱼出现鳍条、嘴角、腹部充血，肝脂肪变性或水泡变性，肾小管上皮细胞和心肌细胞空泡变性等症状（汪开毓等，２００４）。动物喹乙醇中毒主要表现为：体重下降、精神不振、食欲减退等临床症状，病理变化以肝、。肾比较严重，对心、肺的作用较轻或无病变。目前普遍认为喹乙醇的毒性作用机理与其对’肾上腺的选择性损伤有关，中毒动物因肾上腺受损，引起皮质激素（醛固酮类激素）分泌紊乱，导致体内电解质平衡失调，表现出低血钠和高血钾症，同时也由于中毒动物肝、肾等内脏器官出血、变性、坏死而导致动物死亡（Ｗａｌｄｍａｎｎ，１９８９；Ｒｅｅｔｅ，１９９１）。喹乙醇能促进动物生长、预防疾病，但它又具有蓄积毒性和诱变性，长期、过量的使用容易造成残留，可能会危害人类健康。因此在养殖业中一定要严格控制喹乙醇的使用量和使用期，确保安全。１．４．２喹烯酮在饲料中的应用研究喹烯酮的化学名称为３．甲基．２．苯乙烯酮基．喹恶啉．１，４．二氧化物，分子式为Ｃ１８Ｈ１４Ｎ２０３，分子量为３０６．３，熔点为１８６．５．１８７．５。Ｃ。喹烯酮为黄色粉末，不溶于水，可溶于有机溶剂，属喹恶啉类药物。喹烯酮与喹乙醇结构上的差异在于母核２１５中山大学硕士学位论文位上的侧链与喹乙醇不同，因此生物活性有所不同，既保留了抗菌促生长的作用，又降低了毒性（邹仕庚，２００５）。喹烯酮在促进猪、鸡生长方面已有一些研究报道。徐忠赞等（１９９５）对１０批仔猪进行了喹烯酮增重效果试验，结果发现在３０．６０天的饲喂期内，与对照组相比，５０ｐｐｍ喹烯酮组多增重３．４４．３１．２５％，１０批平均增重比对照组高１２．２５％，且提高了饲料转化率，降低了仔猪的腹泻率。李娟等（２００４）用含有５０ｐｐｍ喹烯酮的饲料饲喂仔猪３０天，发现对照组和试验组的增重没有显著性差异，但试验组略高于对照组。孙鎏国等（２００５）在对仔猪的试验中也得到了相似的结果。王玉春等（１９９５）在饲料中分别添加２５、５０、７５ｐｐｍｌ拘喹烯酮对肉鸡进行生长试验，发现２５ｐｐｍ剂量组与对照组的差异不显著，５０ｐｐｍ和７５ｐｐｍ组均能显著促进肉鸡生长，以７５ｐｐｍ组最佳。目前关于喹烯酮促生长的机制报道甚少。喹烯酮对鱼类生长的影响尚无正式报道。王玉春等（１９９８）对１０只肉鸡按体重２．０ｇ／ｌ【ｇ一次灌服喹烯酮后，分别于０、１５、３０ｍｉｎ和１、２、４、８、１２、２４ｈ采血，最后一次采血后取其心、肝、肺、肾和肌肉等组织用薄层扫描法研究喹烯酮在鸡体内的吸收与分布，样品测定结果显示在血液及组织中均未测得喹烯酮的斑点面积积分值，初步说明喹烯酮不易被机体吸收，在消化道起作用后排出体外。李建勇等（２００５）以体重３０ｍｇ／ｋｇＥｌ服给猪用药，使用ＨＰＬＣ方法对血液中药物含量进行测定，结果表明喹烯酮在体内吸收较慢，消除较快，生物利用度较低，大部分以原形从消化道排出。王玉春等（１９９３）报道喹烯酮在小白鼠体内无明显的蓄积作用。王玉春（１９９４）、严相林（１９９７）等报道通过对小鼠的急性、亚急性毒性试验研究发现喹烯酮均未出现毒性，并且无致畸、致癌的作用。喹烯酮对畜禽的促生长作用较明显，且容易排除不易残留，经济安全。但喹烯酮能否安全应用于水产养殖业，目前喹烯酮对水产动物生长，抗病能力及蓄积毒性的影响报道甚少，因此喹烯酮的作用和安全性在理论和生产实践上都还存在许多值得研究的问题。１６中山大学硕士学位论文第二章饲料中不同水平镉对罗非鱼生长及镉在体组织中积累量的影响前言镉是一种重要的工业毒物和环境污染物，早在１９７２年，联合国粮食与农业组织（ＦＡＯ）和世界卫生组织（ＷＨ０）就将镉列为仅次于黄曲霉素和砷的食品污染物。近些年，各种工业废水和固体废弃物的排出，使得水体，土壤重金属污染严重。重金属镉对水产品的污染主要来自于两个方面：一方面是对养殖水体的污染；另一方面是对饲料原料的污染。水生生物容易从食物和水环境中富集镉。罗非鱼是世界范围内广泛养殖，具有较高营养价值与商品价值的鱼种之一，具有环境适应能力强，易于繁殖，食性广，养殖成本低且肉味鲜美等特点，也是我国主要的养殖鱼类之一（陈素芝等，１９９４）。奥尼罗非鱼是奥利亚罗非鱼与尼罗罗非鱼的杂交鱼，雄性率达９０％以上，生长快于传统的莫尼杂交罗非鱼，近年来己成为我国主要的养殖罗非鱼品种。本试验以奥尼罗非鱼为研究对象，探讨镉对罗非鱼生长、体组成及其在鱼体各组织中积累的影响。２．１材料与方法２．１．１试验鱼与试验饲料奥尼罗非鱼购于广州番禺罗非鱼良种场，首先在实验室水组箱中暂养２周，使其适应试验环境，暂养期间投喂不含镉的对照组饲料。试验初始鱼重为１．１５±Ｏ．０２９。试验使用４组等氮、等能的饲料，镉的添加量分别为对照组ＣｄＯ（不含Ｃｄ）、Ｃｄｌ（０．５ｍｇ／ｋｇ）、Ｃｄ２（１５ｍｇ／ｋｇ）和Ｃｄ３（４５０ｍｇ／ｋｇ），镉的测定值为ＣｄＯ（０）、１７中山大学硕士学位论文Ｃｄｌ（Ｏ．８１ｍｇ／ｋｇ）、Ｃｄ２（１７．２８ｍｇ／ｋｇ）和Ｃｄ３（４６５．８４ｍｇ／Ｋｇ）。饲料原料全部经粉碎，过６０目筛，按饲料配方称重，微量成分采取逐级扩大法添加，饲料中的Ｃｄ以ＣｄＣｌ２·２．５Ｈ２０的形式添加，所有原料混合均匀后，加工成直径为１．Ｓｍｍ的颗粒，烘干后置一２０℃冰箱储存备用。试验饲料配方及营养成分分析见表２－１。表２－１试验饲料配方和成分分析（ｇ／ｋｇ）Ｔａｂ２－１Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓａｎｄｐｒｏｘｉｍａｔｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｉｅｔｓ（ｇ／ｋｇ）成分Ｃｄ０ＣｄｌＣｄ２Ｃｄ３酪蛋白３２０．００３２０．ｏｏ３２０．００３２０．００明胶８０．００８０．００８０．００８０．００玉米淀粉４００．００４００．００４００．００４００．００鱼油３０．００３０．ＯＯ３０．ＯＯ３０．００玉米油３０．００３０．００３０．００３０．００大豆磷脂２０．００２０．００２０．００２０．００纤维素３９．００３９．００３９．００３９．００复合维生素８２０．００２０．００２０．ｏｏ２０．００复合矿物盐６５０．００５０．００５０．ＯＯ５０．００氯化胆碱６．００６．００６．００６．００维Ｃ磷酸酯５．ＯＯ５．００５．００５．００ＣｄＣｌ２。２．５ＨｚＯ（ｍｇ）１．０１６３０．５３６９１６．０７１Ｃｄ（ｍｇ）０．５０１５．００４５０．００成分分析（ｇ｜ｋｇ于物质）水分９２．３０９３．４０１１６．４０１２６．８０粗蛋白３８０．１０３７３．８０３７３．４０３７９．３０粗脂肪６７．０３６６．４０６５．９０６６．２０灰分３８．７３９．４４３９．２９３９．９８Ｃｄ（ｍ曲０．８１１７．２８４６５．８４注：ａ每１０吧复合维生素中含有如下维生素：ＶＢｌ’２５０ｍｇ；ＶＢ２，２５０ｒａｇ；Ｖａ６，２００ｍｇ；ＶＢｌ２，０．５０ｍｇ；ＶＫ，２００ｍｇ；ＶＥ，２０００ｒａｇ；ＶＡ，１２５０００ＩＵ：Ｖｏ，１２００００ＩＵ；烟酸，１０００ｍｇ；泛酸钙，５００ｍｇ；生物素，３０ｍｇ；叶酸，７５ｍｇ；肌醇，１００００ｍｇ，以微晶纤维作为载体。ｂ每１００９复合无机盐中含有如下成分：磷酸二氢钙，１２．２８７ｇ；乳酸钙，４７．２４２ｇ：磷酸二氢钠，４．２０３ｇ；硫酸钾，１６．３８３ｇ；硫酸亚铁，１．０７８ｇ；柠檬酸铁，３．８２６ｇ；硫酸镁，４．４１９ｇ；硫酸锰，０．０３３ｇ；硫酸铜，０．０２２ｇ；氯化钻，０．０４３ｇ；碘酸钾，０．００２ｇ；氯化钠，３．２３３ｇ；氯化钾，６．５７５ｇ。１８中山大学硕士学位论文２．１．２饲养管理试验期为３个月，试验前４周投喂鱼体重的８％，４周后投喂量减少到５％，这个投喂量接近罗非鱼的最大摄食量（Ｑｉｎｇｅｔａｌ，２００３）。每两周称重一次，根据体重调整每阶段的投喂量。每天投喂２次，分别为９：００和１６：００。试验在室内流水过滤水族箱中进行，每箱３０尾鱼，每组饲料设３个平行。试验期间记录水温和天气情况，保持水族箱中氧气充足，每天放水排污。试验水温为２８．１±１．６。Ｃ，水中溶氧量为７．１６＿＋０．４６ｍｇ／Ｌ，ｐＨ值为７．２—７．５，氨氮为０．５９＿＋０．１１ｍｇ／Ｌ。试验期间水中没有监测到镉离子（最小检出线为０．００３ｍｇ／Ｌ）。２．１．３样品采集和分析试验结束时分别称取各水族箱鱼重，计算各试验组鱼的增重率和饲料系数。空腹２４小时取样，每箱随机取２尾用于全鱼体组成分析。每箱再随机取８尾鱼，每组共２４尾，测定肥满度、脏体比、肝体比与肠脂比；取肝脏、肾脏、脾脏和肌肉，一部分肝脏和肌肉用于组成分析，剩余的组织用于测定镉、锌、铜的积累量。每箱取两条鱼，取其肝脏和脾脏用１０％福尔马林缓冲液固定（甲醛，１００ｍｌ；磷酸二氢钠，２９；磷酸氢二钠，６．５９，定容到１Ｌ），用于制各组织切片。试验分别采用１０５℃常压干燥法、微量凯氏定氮法、索氏抽提法和马福炉５５０℃灼烧法测定全鱼、肌肉和肝脏的水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分。组织中的矿物元素含量使用等离子体原子发射光谱仪（ＩＣＰ－－ＡＥＳ）测定，测定方法如下：称取０．２一Ｏ．６９样品置于５０ｍｌ凯氏烧瓶中，加入１５ｍｌ浓硝酸，置于有石棉网的电炉上加热，其间煮沸后拔掉电源，停沸后继续加热，直至瓶内剩留１－２ｍｌ液体为止，冷却，加入２ｍｌ高氯酸，重新加热至溶液冒白烟，且溶液变成无色或淡黄色为止。冷却至室温，定容并过滤到５０ｍｌ容量瓶中，分别在２２８、２２４和２０６ｎｍ波长处测定镉、铜、锌溶液含量，最后计算出组织中的含量。肝脏、脾脏组织固定后用石蜡包埋，切片并进行Ｈ．Ｅ染色，在Ｏｌｙｍｐｕｓ光学显微镜下观察、拍照。１９中山大学硕士学位论文２．１．４试验结果统计分析试验结果用平均值±标准差表示，各试验组间数据统计分析采用ＳＰＳＳｌ２．０。首先进行单因子方差分析（ＡＮＯＶＡ），然后采用Ｄｕｎｃａｎ多重比较分析试验结果的差异性，显著水平采用０．０５（Ｐ＜Ｏ．０５）。２．２结果２．２．１各组罗非鱼的存活率、增重率、饲料转化率和蛋白质效率整个试验过程中各组鱼摄食正常，健康状态良好，鱼的存活率在８５－－９２％之间，组间没有显著性差异（见表２．２）。表２．２显示饲料中不同水平的镉对罗非鱼生长有显著性的影响（Ｐ＜０．０５），添加镉Ｏ．５ｍｇ／ｋｇ和１５ｍｇ／ｋｇ饲料组的增重率显著高于对照组，以１５ｍｇ／ｋｇ添加量组的增重率最高，达到了８２５４．６，镉剂量最高的饲料组（４５０ｍｇ／ｋｇ）增重率最低为４９６１．４。饲料系数和蛋白质效率也显著性地受到了饲料中镉的影响（Ｐ＜Ｏ．０５），蛋白质效率变化趋势与增重率相同，以Ｃｄ２组最高，接下来依次是Ｃｄｌ，Ｃｄ０和Ｃｄ３，饲料系数则相反Ｃｄ２组最低，Ｃｄ３组最高。表２—２镉对罗非鱼生长和饲料利用的影响Ｔａｂ２－２Ｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃａｄｍｉｕｍｏｎｇｒｏｗｔｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｆｅｅｄｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｉｌａｐｉａ注：表中同一行内，上标含有不同英文字母代表数据间的差异具有显著性（Ｐ＜０．０５）１．增重率（ＷＧ，％）＝（终末体重一初始体重）×１００／初始体重２．存活率（ＳＵＲ，％）＝终末尾数／初始尾数×１００３．饲料系数（ＦＣＲ，％）＝摄食量／（终末体重一初始体重）４．蛋白质效率（ＰＥＲ，％）＝（终末体重一初始体重）／（饲料摄取量×蛋白质含量）中山大学硕士学位论文２．２．２试验各组罗非鱼肥满度、内脏比、肝脏比和肠脂比试验各组罗非鱼肥满度、内脏比、肝脏比和肠脂比见表２．３。试验各组罗非鱼的肥满度没有显著性差异，添加镉的三组略高于对照组。添加剂量较少的Ｃｄｌ和Ｃｄ２组脏体比较低，对照组居中，高剂量组最高，组间有较显著差异。最高剂量组罗非鱼的肝体比显著低于其它三组，其余三组间差异不显著。肠脂比随镉添加量的增加而略有上升，但变化不大。表２—３试验各组罗非鱼肥满度、脏体比、肝体比和肠脂比Ｔａｂ２—３Ｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ（ＣＦ），ｖｉｓｃｅｒａｓｏｍａｔｉｃｉｎｄｅｘ（ＶＳＩ），ｈｅｐａｔｏｓｏｍａｔｉｃｉｎｄｅｘ（ＨＳＩ）ａｎｄｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃｆａｔｉｎｄｅｘ（ＭＦＩ）ｏｆｔｉｌａｐｉａ注：表中同一行内，上标含有不同英文字母代表数据间的差异具有显著性（Ｐ＜０．０５）１．肥满度（ＣＦ，％）＝ｌＯＯＸ体重（ｇ）／体长（ｃｍ）３２．脏体比（ＶＳＩ，％）＝１００）＜内脏重（ｇ）／体重（ｇ）３．肝体比（ＨＩＳ，％）＝１００Ｘ肝脏重（ｇ）／体重（ｇ）４．肠脂比（ＭＨ，％）＝１００×肠脂重（ｇ）／体重（ｇ）２．２．３试验各组罗非鱼鱼体组成表２．４试验各组罗非鱼全鱼组成（％）Ｔａｂ２－４Ｗｈｏｌｅｂｏｄｙｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｔｉｌａｐｉａ（％ｗｗ）注：表中同一行内，上标含有不同英文字母代表数据问的差异具有显著性（Ｐ＜０．０５）２１中山大学硕士学位论文表２．４的结果表明饲料中添加镉对罗非鱼全鱼的水分、脂肪、灰分都没有显著性影响（Ｐ＞０．０５）。但高剂量组罗非鱼的水分略高于其他三组。对照组罗非鱼的灰分略低于Ｃｄｌ、Ｃｄ２和Ｃｄ３三组。脂肪含量随镉添加量的增加而有减少的趋势。罗非鱼蛋白的含量以对照组最低，其余组间无显著性差异，随镉添加量的增加略有下降。试验各组罗非鱼背肌组成见表２．５。试验各组罗非鱼肌肉的水分随镉添加量的增加略有上升，但没有显著性差异（Ｐ＞Ｏ．０５）。对照组与Ｃｄｌ、Ｃｄ２、Ｃｄ３组相比，蛋白含量较低。脂肪含量以对照组最高，随饲料中镉含量的增大而减少，高镉剂量组脂肪含量最低。表２．５试验各组罗非鱼肌肉组成Ｔａｂ２－５Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｍｕｓｃｌｅｉｎｔｉｌａｐｉａ注：表中同一行内，上标含有不同英文字母代表数据间的差异具有显著性（Ｐ＜０．０５）表２－６试验各组罗非鱼肝脏组成Ｔａｂ．２·６Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｌｉｖｅｒｉｎｔｉｌａｐｉａ注：表中同一行内，上标含有不同英文字母代表数据间的差异具有显著性（Ｐ＜０．０５）试验各组罗非鱼肝脏组成见表２－６。添加镉４５０ｐｐｍ饲料组罗非鱼的水分含量显著高于对照组和０．５ｐｐｍ组，对照组和０．５ｐｐｍ，１５ｐｐｍ三组之间水分含量没有显著性差异。对照组肝脏的蛋白含量与其它三组相比较低，但试验各组之间没有显著性差异。肝脏脂肪含量的变化与肌肉脂肪含量变化趋势（表２．５）相同，随镉添加量的增加而减少，４５０ｐｐｍ组显著低于其它三组（Ｐ＜０．０５）。中山大学硕士学位论文２．２．４罗非鱼各组织内镉的积累量试验初始罗非鱼鱼体中的镉含量为０．０５２ｐｐｍ。由图２．１可以看出对照组和Ｃｄｌ组罗非鱼的肌肉中镉含量为零（最小检出线为０．００３ｍｇ／Ｌ），Ｃｄ２组镉的平均含量为０．０９５ｐｐｍ，Ｃｄ３组镉含量最高达到了０．７７８ｐｐｍ，显著高于前三组。图２—２显示了罗非鱼脾脏中镉积累量，镉含量随镉添加量的增加而增加，Ｃｄ３组镉积累量为１３．２１５ｐｐｍ，显著高于Ｃｄ０、Ｃｄｌ、Ｃｄ２组，ＣｄＯ、Ｃｄｌ和Ｃｄ２三组之间差异不显著。从图中还可看出四组罗非鱼脾脏中镉的含量明显高于四组肌肉中的含量。ａ１ＵＣｄＯ０．８口Ｃｄｌ／’、基０．６｜｜｜｜｜｜Ｃ｜｜｜｜｜｜｜｜△吕圈Ｃｄ２△、—／△暑０．４弋３■Ｃｄ３ｏＯ．２０．下卜Ｔ赢ｂｂｂ罗非鱼肌肉图２－１肌肉中镉积累量Ｆｉｇ２－１ＣａｄｍｉｕｍａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｍｕｓｃｌｅＣｄＯＣｄｌＣｄ２Ｃｄ３鲫∞如加∞鲫∞∞加Ｏ罗非鱼肝脏罗非鱼肾脏图２．３罗非鱼肝脏和肾脏中镉的积累量Ｆｉｇ２－３Ｃａｄｍｉｕｍａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｉｎｌｉｖｅｒａｎｄｋｉｄｎｅｙｏｆｔｉｌａｐｉａ肝脏和肾脏中的镉积累量见图２．３。罗非鱼肝脏和肾脏中镉含量的变化趋势相同，都随镉添加量的增大而增加。饲料中镉的添加量显著影响了罗非鱼肝脏中的中山大学硕士学位论文镉含量，对照组和０．５ｐｐｍ饲料组镉含量较低，４５０ｐｐｍ饲料组最高达到了１６８．６８ｐｐｍ，分别是ＣｄＯ、Ｃｄｌ、Ｃｄ２组的５６．１、４３．２和２２．４倍，１５ｐｐｍ饲料组肝脏镉含量居中为７．３４６ｐｐｍ。４５０ｐｐｍ饲料组罗非鱼肾脏中镉积累量为１２３．８７ｐｐｍ，与其它三组相比显著高，其它三组间差异不显著。肝脏与肾脏中镉的积累量相比，ＣｄＯ、Ｃｄｌ、Ｃｄ２三组肾脏中镉含量高于肝脏中镉含量，Ｃｄ３组则相反，肝脏高于肾脏中镉含量。２．２．５罗非鱼组织内锌、铜的含量由图２．４可以明显的看出罗非鱼肌肉、肝脏、肾脏、脾脏中的锌含量都随饲料中镉添加量的增加而有不同程度的增加。肌肉中Ｃｄ２和Ｃｄ３组锌含量显著高于ＣｄＯ和Ｃｄｌ组。肝脏和脾脏中锌含量变化相同，都是对照、０．５ｐｐｍ、１５ｐｐｍ饲料组之间无显著性差异，而这三组锌含量显著低于４５０ｐｐｍ饲料组。肾脏中的锌含量以ＣｄＯ组最低，Ｃｄ３组最高，Ｃｄｌ与Ｃｄ２两组之间无显著性差异，锌含量居中。∞踟口ＣｄＯ印口Ｃｄｌ团Ｃｄ２—ｍｄｄ）盎Ｎ∞■Ｃｄ３加Ｏ罗非鱼肌肉罗非鱼肝脏罗非鱼肾脏罗非鱼脾脏图２－４罗非鱼组织中锌的含量Ｆｉｇ２－４Ｚｉｎｃｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｔｉｓｓｕｅｓｏｆｔｉｌａｐｉａ图２．５显示了罗非鱼肌肉、肝脏、肾脏、脾脏四种组织中铜的含量。试验各组肌肉中铜含量随镉添加量的增加略有下降，但无显著性差异。Ｃｄ３组肝脏中铜含量显著低于其他三组，其他三组无显著性差异。肾脏铜含量变化与肝脏中铜含量变化趋势相反，Ｃｄ３组显著高于ＣｄＯ、Ｃｄｌ、Ｃｄ２组，ＣｄＯ、Ｃｄｌ和Ｃｄ２三组间差异不显著。罗非鱼脾脏的铜含量随镉添加量的增加而增加，１５ｐｐｍ和４５０ｐｐｍ组显著高于对照组和０．５ｐｐｍ组。２４中山大学硕士学位论文６０５０畲４０血ｅ８３０２０１０Ｏ罗非鱼肌肉罗非鱼肝脏震Ｉ．■罗非鱼肾脏口ＣｄＯ口Ｃｄｌ圄Ｃｄ２■Ｃｄ３ａｂｂａ壬ｊ三矗白●罗非鱼脾脏图２－５罗非鱼组织中铜的含量Ｆｉｇ２－５Ｃｏｐｐｅｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎｔｉｓｓｕｅｓｏｆｔｉｌａｐｉａ２．２．６罗非鱼肝脏、脾脏组织切片对照组肝细胞（图２－６ａ）清晰可见，排列较整齐，细胞核形状、大小均一，存在一些空泡。０．５ｐｐｍ和１５ｐｐｍ组肝细胞结构与对照组没有明显差异。４５０ｐｐｍ组肝细胞（图２－６ｂ）与对照组相比，细胞结构发生改变，细胞核变大。ａｂ图２－６罗非鱼肝脏组织切片Ｘ２００（ａ对照组，ｂ４５０ｐｐｍ组）Ｆｉ９２－６ＨｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｌｉｖｅｒｆｒｏｍｔｉｌａｐｉａＸ２００（ａｃｏｎｔｒｏｌ，ｂ４５０ｐｐｍ）脾脏分为红髓和白髓两个主要部分。对照组罗非鱼脾脏（图２－７ａ）中的红髓（ＲＰ）和白髓（ＷＰ）区域分界较明显，红髓主要由密集的红血细胞构成，白髓主要由基质细胞和少量淋巴细胞构成。０．５ｐｐｍ和１５ｐｐｍ组脾脏结构与对照组没有显著性差异。４５０ｐｐｍ组脾脏（图２－７ｂ）与对照组相比，红髓和白髓界限模糊，白髓区域内细胞出现空化，存在大量空泡。中山大学硕士学位论文ａｂ图２－７罗非鱼脾脏组织切片×２００（ａ对照组，ｂ４５０ｐｐｍ组）Ｆｉｇ２－７ＨｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｓｐｌｅｅｎｆｒｏｍｔｉｌａｐｉａＸ２００（ａｃｏｎｔｒｏｌ，ｂ４５０ｐｐｍ）２．３讨论２．３．１镉对罗非鱼生长和饲料利用的影响众所周知镉是一种有毒的重金属，对鱼类和其它水生生物的生长有负面影响（Ｈａｎｓｅｎｅｔａｌ，２００２）。在本试验中，饲料中添加较低剂量的镉与对照组相比不但没有抑制生长反而有一定的促进作用，提高了饲料利用率，高剂量镉对生长有明显的抑制作用。试验结果以添｝Ｊｉｌｌ５ｐｐｍ饲料组罗非鱼的增重率、蛋白质效率最高，其次为０．５ｐｐｍ饲料组，这两组的增重率均显著高于对照组，４５０ｐｐｍ饲料组增重率显著低于对照组。在对鲫鱼、金鱼的试验研究中，也同样得到了低剂量镉促进生长，高剂量镉抑制生长的结果（丁磊等，２００２；Ｓｚｃｚｅｒｂｉｋｅｔａｌ，２００６）。这种现象在毒理学上被称为毒物兴奋效应（ｈｏｒｍｅｓｉｓ）。Ｚｇｌｉｎｉｃｋｉ等（１９９２）认为这种现象产生的原因是低剂量的镉能够促进ＤＮＡ的合成和细胞增殖。Ｒｏｂｏｈｍ（１９８６）则认为低剂量的镉能够刺激生物体产生更多数量的抗体，从而增强免疫能力，促进生长。高剂量镉抑制生长是由于镉影响了鱼类对饲料的消化和吸收（Ｂｏｒｇｍａｎｎｅｔａｌ，１９８６），抑制了肠道中消化酶的活性。镉还可能影响鱼类的代谢功能，在应急状态下机体会释放较多的儿茶酚胺和皮质醇，皮质醇对机体新陈代谢、体内离子和水平衡、免疫功能等都有较大的影响（Ｖａｎ１９９７；ＳｚｃｚｅｒｂｉｋｅｔＤｅｒＢｏｏｎｅｔａｌ，１９９１：Ｗｅｎｄｅｌａａｒ，ａｌ，２００６）。Ｍｉｌｉｏｕ等（１９９８）认为镉影响生长是由于镉影响了ＲＮＡ、ＤＮＡ的合成。中山大学硕士学位论文２．３．２镉对罗非鱼鱼体组成的影响本试验中罗非鱼全鱼、肌肉、肝脏中对照组的蛋白含量均低于添加镉的饲料组，但无显著性差异。镉浓度对古比鱼蛋白含量无显著性影响（Ｍｉｌｉｏｕｅｔａｌ，１９９８）。Ｍａｒｃ等（２００１）报道大西洋鲑全鱼中蛋白含量与镉浓度反相关，肝脏中蛋白含量与镉浓度呈正相关。镉进入机体后，金属硫蛋白在镉的刺激下可大量的表达，金属硫蛋白含量与镉浓度成正相关（Ｄｅｃｏｎｔｏ，１９９８；Ｈａｎｓｅｔａｌ，２００１）。Ｍｉｌｉｏｕ等（１９９８）认为镉会影响ＲＮＡ、ＤＮＡ及蛋白的合成。蛋白含量受到多种因素的影响。罗非鱼全鱼、肌肉、肝脏中脂肪含量随镉添加量的增加而降低。镉影响了鱼类对饲料的消化吸收，增加了代谢的负荷，消耗了更多的脂肪和能量（Ｗｅｅｒｄ】９９８）。ｅｔａｌ，２．３．３镉在罗非鱼组织中的积累量水体中的镉在鱼体内的富集作用已有不少报道，研究表明饲料中的镉也能够在鱼体被快速富集（Ｋｒａａｌｅｔａｌ，１９９５；Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙｅｔａｌ，２００４）。在本试验中，镉能够在肌肉、肝脏、肾脏和脾脏器官中积累，且积累量与镉浓度正相关。肝脏和肾脏是镉积累的主要器官，肌肉积累较少，在对比目鱼、鲤鱼、虹鳟、鳗鲡等鱼进行的试验中也得到了相同的结果（Ｍｅｌｇａｒｅｔａｌ，１９９９；Ｓｅｏｎｇｅｔａｌ，１９９７；Ｃｏｎｔｏｅｔａｌ，１９９９；Ｙａｎｇｅｔａｌ，２００４）。这是由于具有解毒作用的金属硫蛋白在镉的诱导下大量表达，与镉形成稳定的结合物存在于体内，这种结合物降解缓慢，而金属硫蛋白主要存在于肝脏和肾脏中。肝脏与肾脏中镉积累量相比，０．５ｐｐｍ和１５ｐｐｍ饲料组罗非鱼肾脏中的镉含量高于肝脏镉含量，４５０ｐｐｍ组肾脏中镉含量低于肝脏．中镉含量。比目鱼、鲈鱼、棘鱼肝脏中镉积累量高于肾脏（Ｓｅｏｎｇ而鲤鱼、鳗鲡肾脏中的镉含量高于肝脏（Ｙａｎｇｅｔｅｔａｌ，２００４），ａｌ，１９９９；Ｃｉｎｉｅｒｅｔａｌ，１９９９）。ｅｔ淡水鱼类镉在肾脏中积累量较高，海水鱼类镉在肝脏中积累较高（Ｓｅｏｎｇａｌ，２００４）。镉在不同鱼类组织内的分布情况不同。镉积累量在一定时间后趋于平衡（孟晓红等，２０００）肾脏中镉的积累量可能趋于平衡，肝脏中还能容纳更多镉离子，因此高镉剂量组肝脏中镉积累量高于肾脏。２７中山大学硕士学位论文２．３。４镉对罗非鱼体内锌、铜元素的影响镉和锌在元素周期表中属于同一族元素，许多性质相近，容易同型置换，相互竞争、抑制。Ｒｅｎａｔａ等（１９９８）报道镉能够提高锌在肝脏和肾脏中的含量。在本试验中罗非鱼肌肉、肝脏、肾脏、脾脏中的锌含量都随饲料中镉添加量的增加而有不同程度的增加。锌能够与金属硫蛋白结合，机体在镉的诱导下产生大量金属硫蛋白，增加了锌与金属硫蛋白结合的几率（Ｒｅｎａｔａｅｔａｌ，１９９８）。铜在罗非鱼各组织内的变化趋势不同，肝脏中的铜随镉添加量的增加有下降的趋势，肾脏和脾脏有上升的趋势，肌肉无明显变化。这种上升的趋势可能也是与金属硫蛋白的增加有关。２．３．５镉对罗非鱼肝脏、脾脏组织结构的影响本试验结果表明高剂量镉对罗非鱼肝脏、脾脏均有一定程度的损伤，能引起细胞组织结构的变化。镉对肝脏组织结构影响的报道较多，鲈鱼在含Ｏ．８ｍｇ／Ｌ的Ｃｄ２＋水环境中生活９０天后，组织结构变化表现为肝细胞肿胀，出现脂肪或水泡变性，有充血现象（Ｔｈｏｐｈｏｎｅｔａｌ，２００３）。Ｈａｌｌａｒｅ等（２００５）将斑马鱼暴露于含镉１０ｍｌ／Ｌ的环境中，４８小时后，肝细胞核变大，空泡增多，有充血现象。Ｍｏｅｓｅｙ（１９９０）在对鲤鱼的试验研究中发现镉能引起肝细胞萎缩甚至坏死，细胞膜无法辨认。镉对鱼类肝细胞结构的损伤程度受到暴露浓度和暴露时间的影响。本试验中，高镉剂量组肝细胞病理结构变化为细胞核增大，细胞膜不易辨认。Ｈａｌｌａｒｅ等（２００５）认为细胞核是镉毒性作用的主要对象。脾脏是红细胞代谢和免疫的主要器官，对脾脏结构损伤会影响鱼的免疫能力。２．４结论２．４．１饲料中不同镉水平对奥尼罗非鱼生长和饲料利用率有显著性的影响，高剂量镉抑制罗非鱼的生长，降低了饲料效率。２．４．２镉对罗非鱼全鱼、肌肉、肝脏的水分和蛋白含量没有显著性影响，脂肪含量随镉添加量的增加而显著降低。中山大学硕士学位论文２．４．３罗非鱼肌肉、肝脏、肾脏、脾脏中镉的积累量与镉添加量呈正相关，肝脏、肾脏是镉积累的主要器官，其次为脾脏，肌肉中镉积累量最低。镉提高了锌在罗非鱼肌肉、肝脏、肾脏、脾脏中的含量。２．４．４高剂量镉对罗非鱼肝脏和脾脏组织结构均有一定程度的影响，较低剂量镉（０．５ｐｐｍ和１５ｐｐｍ）对罗非鱼肝、脾脏结构影响不显著。中山大学硕士学位论文第三章饲料中喹烯酮对罗非鱼生长及体组成的影响喹烯酮是我国自行开发研制的新型饲料添加剂，具有高效、安全、添加剂量小等特点。研究表明喹烯酮在５０．７５ｐｐｍ的添加剂量下，可使猪、鸡多增重１０．２０％，并能提高饲料转化率（王玉春等，１９９５；孙鎏国等，２００５）。喹烯酮抗菌广谱，对多种致病菌有抑杀作用，尤其对肠道致病菌有较强的抑制作用。对小鼠的急性、亚急性及慢性毒性试验结果显示，喹烯酮无毒，体内代谢快，无致癌、无致突变作用（王玉春等，１９９４；严相林等，１９９７）。但目前喹烯酮对鱼类生长和生化组成的影响未见正式报道。罗非鱼是世界范围内广泛养殖，具有较高营养价值与商品价值的鱼种之一，具有环境适应能力强、易于繁殖、食性广、养殖成本低且肉味鲜美等特点，也是我国主要的养殖鱼类之一。奥尼罗非鱼是奥利亚罗非鱼与尼罗罗非鱼的杂交鱼，雄性率达９０％以上，生长快于传统的莫尼杂交罗非鱼，近年来已成为我国主要的养殖罗非鱼品种。本试验以奥尼罗非鱼为研究对象，探讨喹烯酮对罗非鱼生长及组成的影响。３．１材料与方法３．１．１试验鱼与试验饲料奥尼罗非鱼来自于广东番禺罗非鱼良种场，首先在实验室水组箱中暂养２周，使其适应试验环境，暂养期间投喂不含喹烯酮的对照组饲料。暂养结束后选择体重相近的鱼，随机放入１２个水族箱中，每箱３０尾，每组饲料随机设３个平行，试验初始鱼重为１．６６＿＋０．０２９。试验饲料中使用酪蛋白、明胶提供蛋白源，鱼油、玉米油和大豆磷脂提供脂肪源，玉米淀粉提供糖源。试验为四组等氮、等能的饲料，中山大学硕士学位论文１、２、３、４组喹烯酮的添加量分别为０、５０、２５０和５００ｍｇ／ｋｇ。饲料原料全部经粉碎，过６０目筛，按饲料配方称重，微量成分和喹烯酮采取逐级扩大法添加，所有原料混合均匀后，加工成直径为１．５ｍｍ的颗粒，烘干后置一２０℃冰箱储存备用。试验饲料配方及营养成分分析见表３．１。表３－１试验饲料配方和成分分析（ｇ／ｋｇ）Ｔａｂ３－１Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓａｎｄｐｒｏｘｉｍａｔｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｄｉｅｔｓ（ｇ／ｋｇ）成分酪蛋白明胶玉米淀粉鱼油玉米油大豆磷脂纤维素复合维生素８复合矿物盐ｂ氯化胆碱维Ｃ磷酸酯喹烯酮１３２０．００８０．００４００．００３０．００３０．００２０．００３９．００２０．００５０．００６．００５．００２３２０．００８０．００４００．００３０．００３０．００２０．００３９．００２０．００５０．００６．ＯＯ５．０００．０５３３２０．００８０．００４００．００３０．００３０．００２０．００３９．００２０．００５０．００６．００５．０００．２５４３２０．００８０．００４００．００３０．００３０．００２０．００３９．００２０．００５０．００６．００５．０００．５０成分分析毡｜ｋｇ干物质）粗蛋白粗脂肪水分灰分３８２．１５６４．４６１１４．６８３９．１８３７９．０８６２．０３１０６．３５３９．５２３８９．２４６１．７２１０９．８４３９．１２３８１．８３５７．６２１１１．２７３９．２４注：ａ每１００９复合维生素中含有如下维生素：ＶＢｌ’２５０ｍｇ；ＶＢ２，２５０ｍｇ；ＶＢ６，２００ｍｇ；ＶＢｌ２，０．５０ｍｇ；ＶＫ，２００ｍｇ；ＶＥ，２０００ｍｇ；ＶＡ，１２５０００ＩＵ；ＶＤ，１２００００ＩＵ；烟酸，１０００ｍｇ；泛酸钙，５００ｍｇ；生物素，３０ｍｇ；叶酸，７５ｍｇ；肌醇，１００００ｍｇ，以微晶纤维作为载体。ｂ每ｌＯＯｇ复合无机盐中含有如下成分：磷酸二氢钙，１２．２８７ｇ；乳酸钙，４７．２４２ｇ；磷酸二氢钠，４．２０３ｇ；硫酸钾，１６．３８３ｇ；硫酸亚铁，１．０７８ｇ；柠檬酸铁，３．８２６ｇ；硫酸镁，４．４１９ｇ；硫酸锰，０．０３３ｇ；硫酸铜，０．０２２ｇ；氯化钴，０．０４３ｇ；碘酸钾，０．００２ｇ；氯化钠，３．２３３氯化钾，６．５７５ｇ。ｇ；３１中山大学硕士学位论文３．１。２饲养管理试验期为１２周，试验前４周投喂鱼体重的８％，４周后投喂量减少到５％，这个投喂量接近罗非鱼的最大摄食量（Ｑｉｎｇｅｔａｌ，２００３）。每两周称重一次，根据体重调整每阶段的投喂量。每天投喂２次，分别为９：００和１６：００。试验在室内流水过滤水族箱中进行。试验期间记录水温和天气情况，定期测定水质，保持水族箱中氧气充足，每天放水排污。试验水温为２７．８±１．７。Ｃ，水中溶氧量为６．８７＋０．５２ｍｇ／Ｌ，ｐＨ值为７．３—７．７，氨氮值为０．７３４－０．０８ｍｇ／Ｌ。３．１．３样品采集和分析试验结束时分别称取各水族箱鱼重，计算各试验组鱼的增重率和饲料系数。空腹２４小时取样，每箱随机取２尾用于全鱼体组成分析。每箱再随机取８尾鱼，取出内脏，剥离肝胰脏及肠脂样品，去鳞取出两侧背肌，计算肥满度、脏体比、肝体比与肠脂比。每箱再取两条鱼，取其肝脏和脾脏用１０％福尔马林缓冲液固定（甲醛，１００ｍｌ；磷酸二氢钠，２９；磷酸氢二钠，６．５９，定容到１Ｌ），用于制备组织切片。各组饲料、全鱼、肌肉和肝脏中的水分含量用１０５℃常压干燥法，粗蛋白含量用微量凯氏定氮法测定，粗脂肪含量用索氏抽提法，灰分含量用马福炉５５０℃灼烧法测定。肝脏、脾脏组织固定后用石蜡包埋，切片并进行Ｈ．Ｅ染色，在Ｏｌｙｍｐｕｓ显微镜下观察、拍照。３．１．４试验结果统计分析试验结果用平均值±标准差表示，各试验组间数据统计分析采用ＳＰＳＳｌ２．０。首先进行单因子方差分析（ＡＮＯＶＡ），然后采用Ｄｕｎｃａｎ多重比较分析试验结果的差异性，显著水平采用０．０５（Ｐ＜Ｏ．０５）。３．２结果３．２．１各组罗非鱼的存活率、增重率、饲料转化率和蛋白质效率试验期间对照组和添加喹烯酮５０ｐｐｍ饲料组的罗非鱼摄食正常，健康状况良３２中山大学硕士学位论文好；２５０ｐｐｍ组在试验后期尾鳍出现充血现象；５００ｐｐｍ组罗非鱼在试验最后两周开始出现厌食，游动缓慢的症状，试验结束时，大部分鱼尾鳍充血，胸鳍、尾鳍腐烂较严重（图３－１）。试验各组罗非鱼存活率没有显著性差异（表３．２）。图３－１５００ｐｐｍ组罗非鱼Ｆｉｇ３－１Ｔｉｌａｐｉａｏｆ５０ｐｐｍｇｒｏｕｐ表３－２结果显示罗非鱼增重率随喹烯酮添加量的增加而降低，对照组与５０ｐｐｍ组之间没有显著性差异，这两组显著高于２５０ｐｐｍ和５００ｐｐｍ组，５００ｐｐｍ组增重率最低仅为１６７２．９。饲料系数变化与增重率变化趋势相反，对照组最低，５００ｐｐｍ组最高。对照组和５０ｐｐｍ组蛋白质效率显著高于其他两组，５００ｐｐｍ组最低。表３．２喹烯酮对罗非鱼生长和饲料利用的影响Ｔａｂ３－２ＥｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔＯｕｉｎｏｃｅｔｏｎｅＯｎｇｒｏｗｌｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｆｅｅｄｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｆｉｌａｐｉａ注：表中同一行内，上标含有不同英文字母代表数据问的差异具有显著性（Ｐ＜０．０５）１．增重率（ＷＧ，％）＝（终末体重一初始体重）×ｌｏｏ／初始体重２．存活率（ＳＵＲ，％）＝终末尾数／初始尾数Ｘ１００３．饲料系数（ＦＣＲ，％）＝摄食量，（终末体重一初始体重）４．蛋白质效率（ＰＥＲ，％）＝（终末体重一初始体重）／（饲料摄取量×蛋白质含量）中山大学硕士学位论文３．２．２试验各组罗非鱼肥满度、内脏比、肝脏比和肠脂比试验各组罗非鱼肥满度、内脏比、肝脏比和肠脂比见表３—３。从表中可以看出，对照组罗非鱼的肥满度与脏体比显著高于其他三组，其他三组间无显著性差异。对照组肝体比和肠脂比显著高于２５０ｐｐｍ和５００００ｍ饲料组，与５０ｐｐｍ饲料组差异不显著。表３－３试验各组罗非鱼肥满度、脏体比、肝体比和肠脂比Ｔａｂ３－３Ｔｈｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ（ＣＦ），ｖｉｓｃｅｒａｓｏｍａｔｉｃｉｎｄｅｘ（ＶＳＩ），ｈｅｐａｔｏｓｏｍａｔｉｃｉｎｄｅｘ（ＨＳＩ）ａｎｄｍｅｓｅｎｔｅｒｉｃｆａｔｉｎｄｅｘ（ＭＦＩ）ｏｆｔｉｌａｐｉａ１（Ｏ）ＣＨ％）１３．８２±０．０６８１０．４０４－０．３７ａ２．８７４－０．０７ａ２（５０ｐｐｍ）３．６８±０．０８６９．３９４－０．３２６２．４６４－０．１７”３（２５０ｐｐｍ）４（５００ｐｐｍ）３．６２４－０．０７０３．６９４－０．０５。９．４３４－０．２３６２．３０４－０．２９６ＶＳＩ（％）ａＨＳＩ（％）３ＦＭＩ（％）４９．２０４－０．２１６２．１８４－０．２７ｂ１．４６４－０．１１８１．５１４－０．１８８１．１１４－０．０５００．６０４－０．０６ｃ——————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————————一注：表中同一行内，上标含有不同英文字母代表数据间的差异具有显著性（Ｐ＜０．０５）１．肥满度（ＣＦ，％）＝１００×体重（ｇ）／体长（ｃｍ）。２．脏体比（ＶＳＩ，％）＝ｌＯＯＸ内脏重（ｇ）／体重（ｇ）３．肝体比（ＨＩＳ，％）＝ＩＯＯＸ肝脏重（ｇ）／体重（ｇ）４．肠脂比（ＭＦＩ，％）＝１００×肠脂重（ｇ）／体重（ｇ）３．２．３试验各组罗非鱼鱼体组成表３—４试验各组罗非鱼全鱼组成（％）Ｔａｂ３－４Ｗｈｏｌｅｂｏｄｙｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｔｉｌａｐｉａ（％ｗｗ）组别水分（％）蛋白（％）脂肪（％）灰分（％）１（０）６７．８０４－０．５５６１７．３９４－０．０７１１．９６４－０．１３ａ３．１０４－０．０９２（５０ｐｐｍ）６７．７２４－１．３６６１７．１０４－０．５７１１．９８４－０．６４ａ３（２５０ｐｐｍ）４（５００ｐｐｍ）６９：８５４－０．４７８１７．０８４－０．４０１０．４３４－０．６０６３．１３４－０．１８７０．８１－１．４６ａ１６．９１４－０．１７１０．３９＋＿０．１２ｂ３．０１４－０．０９３．０８４－０．１３注：表中同一行内，上标含有不同英文字母代表数据间的差异具有显著性（Ｐ＜０．０５）表３．４显示了试验各组罗非鱼鱼体的组成。喹烯酮对罗非鱼的蛋白和灰分含量没有显著性影响。随着饲料中喹烯酮添加量的增加，水分含量逐渐升高，脂肪则中山大学硕士学位论文有减少的趋势，对照组与５０ｐｐｍ组的水分和脂肪含量之间没有显著性差异，这两组的水分和脂肪含量显著高于２５０ｐｐｍ和５００ｐｐｍ组。３．２．４试验各组罗非鱼肌肉和肝脏的组成试验各组罗非鱼肌肉和肝脏组成见表３．５和表３－６。肌肉中水分和蛋白含量随喹烯酮添加量的增加而增加。脂肪变化与水分含量变化趋势刚好相反，５００ｐｐｍ组罗非鱼肌肉脂肪含量显著低于其他组，对照组最高，５０ｐｐｍ组与对照组间无显著性差异，２５０ｐｐｍ组脂肪含量居中。试验各组罗非鱼肝脏的水分差异不显著。随喹烯酮添加量的增加，肝脏中脂肪含量逐渐降低。对照组蛋白含量显著低于５０ｐｐｍ、２５０ｐｐｍ、５００ｐｐｍ饲料组，这三组间没有显著性差异。表３．５试验各细．罗非鱼肌肉组成Ｔａｂ．３—５Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｍｕｓｃｌｅｉｎｔｉｌａｐｉａ注：表中同一行内，上标含有不同英文字母代表数据间的差异具有显著性（Ｐ＜０．０５）表３－６试验各组罗非鱼肝脏组成Ｔａｂ３－６Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｌｉｖｅｒｉｎｔｉｌａｐｉａ注：表中同一行内，上标含有不同英文字母代表数据间的差异具有显著性（Ｐ＜Ｏ．０５）３．２．５罗非鱼肝脏、脾脏组织切片对照组肝脏细胞（图３－２ａ）清晰可见，排列较整齐，细胞核形状、大小均一，３５中山大学硕士学位论文存在一些空泡。５０ｐｐｍ组肝脏细胞与对照组没有明显差异。２５０ｐｐｍ组肝脏细胞出现小脂肪滴，其它病理特征不明显。５００ｐｐｍ组肝细胞结构（图３－２ｂ）受到喹烯酮严重影响，甚至坏死，细胞间质充血较严重，可见脂肪变性。ａｂ图３—２罗非鱼肝脏组织切片Ｘ２００（ａ对照组，ｂ５００ｐｐｍ组）Ｆｉ９３－２ＨｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｌｉｖｅｒｆｒｏｍｆｉｌａｐｉａＸ２００（ａｃｏｎｔｒｏｌ，ｂ５００ｐｐｍ）脾脏是重要的免疫器官，分为红髓和白髓两个主要部分。对照组罗非鱼脾脏（图３．３ａ）中的红髓（ＲＰ）和白髓（ｗＰ）区域分界较明显，红髓主要由密集的红血细胞构成，白髓主要由基质细胞和少量淋巴细胞构成。５０ｐｐｍ和２５０ｐｐｍ组脾脏结构与对照组没有显著性差异。５００ｐｐｍ组脾脏（图３－３ｂ）与对照组相比，红髓和白髓界限模糊，较难辨认。ａｂ图３－３罗非鱼脾脏组织切片Ｘ２００（ａ对照组，ｂ５００ｐｐｍ组）Ｆｉｇ３－３ＨｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｓｐｌｅｅｎｆｒｏｍｔｉｌａｐｉａＸ２００（ａｃｏｎｔｒｏｌ，ｂ５００ｐｐｍ）中山大学硕士学位论文３．３讨论３．３．１喹烯酮对罗非鱼生长和饲料利用的影响本试验结果表明，饲料中添加５０ｐｐｍ喹烯酮与对照组相比，增重率、饲料效率无显著性差异，较高剂量的喹烯酮（２５０，５００ｍｇ／ｋｇ）则会抑制罗非鱼生长、降低饲料效率。喹烯酮对鱼类生长的影响未见正式报道。徐忠赞等（１９９５）报道，饲料中添加５０ｐｐｍ喹烯酮与对照组相比能够使猪仔多增重１２．２５％，且提高了饲料效率。王玉春等（１９９５）报道在饲料中添加５０ｐｐｍ的喹烯酮与对照组相比能够使肉鸡多增重１７．８％。喹烯酮可能对不同动物作用效果不同。喹乙醇与喹烯酮同属喹恶啉类药物，喹乙醇具有蓄积毒性，添加较高剂量容易在鱼体内积累，应激能力下降，鱼体腹部，鳃盖，鳍条显著充血，不耐运输，容易死亡（王玉春等，１９９５）。在本试验结果中观察到５００ｐｐｍ饲料组罗非鱼生长显著下降，并出现了鳍条充血，尾鳍腐烂的病态现象，说明高剂量的喹烯酮可能也会在鱼体内积累，引起中毒。３．３．２喹烯酮对罗非鱼组成的影响喹烯酮增加了罗非鱼全鱼、肌肉和肝脏中的水分。肌肉和肝脏中蛋白含量也随喹烯酮含量的增加而逐渐上升。喹烯酮能够提高蛋白含量，其作用机制可能与喹乙醇相同，即降低了转氨酶活性，使氨基酸分解代谢减弱，在体内沉积更多的氮，合成更多的蛋白（林仕梅等，１９９８；郭小权等，２０００）。而全鱼、肌肉和肝脏中的脂肪逐渐降低，可能由于罗非鱼在摄入较高剂量喹烯酮后，对机体的代谢有一定的影响，需要消耗更多的脂肪和能量完成各项生理活动。３．３．３喹烯酮对罗非鱼肝脏、脾脏组织结构的影响喹烯酮对罗非鱼肝脏和脾脏结构均有不同程度的损伤。肝脏是动物体内物质代谢和解毒的主要器官，高剂量喹烯酮引起肝细胞变性、坏死，造成肝细胞损伤，从而可能导致鱼体内物质代谢障碍，蓄积有害物质，影响鱼体生长健康。脾脏是红细胞代谢和免疫的主要器官，对脾脏结构损伤会影响鱼的免疫能力。３７中山大学硕士学位论文３．４结论３．４．１在饲料中添加５０ｐｐｍ的喹烯酮对罗非鱼生长没有显著性影响，添加较高剂量喹烯酮则会抑制生长，降低饲料效率。３．４．２喹烯酮对罗非鱼全鱼的蛋白和灰分含量无显著性影响，水分含量随喹烯酮含量的增加而逐渐增加，脂肪含量则随喹烯酮添加量的增加而减少，对照组与５０ｐｐｍ组水分和脂肪含量差异不显著。３．４．３随着饲料中喹烯酮水平的提高，肌肉和肝脏中的水分、蛋白含量呈增加趋势，脂肪含量呈下降趋势。３．４．４最高剂量喹烯酮组（５００ｐｐｍ）对罗非鱼肝脏组织结构影响较大，对脾脏也有一定程度的影响。５０ｐｐｍ与２５０ｐｐｍ组肝脏、脾脏组织结构与对照组没有明显差异。中山大学硕士学位论文参考文献边连全．农药残留对饲料的污染及其对畜产品安全的危害．饲料工业，２００５，２６（９）：１－５．蔡春芳，宋学宏，潘兴法等．几种抗病促生长剂对银鲫生长和免疫的影响．水利渔业，２００２，２２（２）：２０—２２．陈素芝，叶卫．我国引进的罗非鱼类的初步研究．动物学杂志，１９９４，２９（３）：１８—２３．成亚宁，王玉芬，王俊霞．盐酸克伦特罗的残留危害及检测方法．中国畜牧杂志，２００５，４１（１０）：４６．４８．迟淑艳，周歧存，杨奇慧．罗非鱼营养研究进展．饲料研究，２００４，９：９—１４．丁磊，蔡春芳，吴萍等．镉对鲫鱼生长的影响．淡水渔业，２００２，３２（１）：５６—５７．董书芸，胡前胜，余贵英等．水环境镉对鲫鱼免疫毒性的研究．中国公共卫生，２００１，１７（３）：２２６．２２８．段玉梅，傅式洲．镉的污染及防治方法．陕西环境，２００３，１０（６）：５４—５５．耿毅，汪开毓．动物喹乙醇中毒研究进展．畜牧业，２０００，１２１：３０—３２．郭庆，任泽林，曾虹．喹乙醇在水产养殖中的应用．中国饲料，１９９７，５：２７．２８．郭小权，胡国良，刘明生．喹乙醇在养殖业中的应用极其注意的问题．湖南畜牧兽医，２０００，４：２１．２２．贺普霄．饲料固有毒物一抗营养因子研究的现状．饲料广角，２００３，２４：１４—１７．惠天朝，王家刚，朱荫湄等．镉对罗非鱼脑ＡＣｈＥ及组织中代谢酶的影响．浙江大学学报ｆ农业与生命科学版），２００４，３０（６）：６７３—６７８．贾秀英，陈志伟．镉对鲫鱼组织转氨酶和过氧化氢酶活性的影响．环境污染与防治，１９９７，１９（６）：４．７．李爱杰．水产动物营养与饲料学．北京：中国农业出版社，１９９６：８２．８４．李凤娜，王继成．影响饲料安全的因素．中国饲料，２００５，２：３７．３９．李建勇，周绪正，李金善等．喹烯酮在猪体内的代谢动力学研究．中国兽药杂志，２００５，３９（９）：１—３．李娟，刘东升等．喹烯酮对仔猪生产性能影响的研究．中国饲料，２００４，２３：２７．廖自基．微量元素的环境化学及生物效应．北京：中国环境科学出版社，１９９２：２９４—３２３林仕梅，罗莉，叶元土等。喹乙醇对草鱼几项生理指标的影响．西南农业学报，１９９８，１１（２）：１１９—１２３．刘发义，梁德海，孙凤等．饵料中的铜对东方对虾生长的影响．海洋与湖泊，１９９０，２１（５）：５—１０．３９中山大学硕士学位论文刘洪伟，印明吴，张峰．重金属污染对水生动物免疫毒性的研究进展．科技与推广，２００５，１：７６．７９．刘杰．镉的毒性和毒理学进展．中华劳动卫生职业病杂志，１９９８，１６（１）：２４．刘钧，张淑伟，史克江等．山东南四湖水产品中铅、镉、砷、汞污染状况调查与分析．现代预防医学，１９９６，２３（３）：１６４－１６６．刘利林，陈荣，王选东等．三黄鸡饲料中添加喹乙醇对其生长的影响．塔里木农垦大学学报，２００３，１５０）：４—６．罗智，刘永坚，田丽霞．影响饲料安全的因素及其解决方法．饲料广角，２００３，１４：１８—２１．孟宪平，杨庆彬．喹乙醇对雉鸡生长及抗病性试验．兽药与饲料添加剂，１９９９，４：７－８．孟晓红，贾瑛，付超然．重金属稀土元素污染在水生生物内的生物富集．农业环境保护，２０００，１９（１）：５０—５２．彭济昌，尹海富等．鲤鱼喹乙醇亚急性中毒的组织病理学研究．东北农业大学学报，２００６，３７（１）：５２—５７．沈维华，张志强，蔡洪东．喹乙醇对团头鲂鱼种生长影响的初步研究．粮食与饲料工业，１９９５，４：２３—２４．宋洪远，赵长保．我国的饲料安全问题：现状、成因及对策．中国农村经济，２００３，１１：２８—３５．宋志刚．饲料的卫生与安全对动物健康的影响．饲料安全，２００４，１０：７－９．孙鎏国，朱柳燕，蔡祥生等．喹烯酮对断奶仔猪生产性能的影响．畜牧与饲料科学，２００５，３：８－９．万文根．饲料安全的影响因素及其对策．饲料广角，２００４，１７：１５—１７．汪开毓，耿毅，刘开永．喹乙醇对鲤鱼蓄积毒性的研究．四Ｊｌ｜农业大学学报，２００４，２２（２）：１８３．１８６．汪开疏耿毅，叶仕根等．鲤慢性喹乙醇中毒的病理学和组织残自．水产学报，２００３，２７（１）：７５．８１．王黔．盐酸克伦特罗简介．畜禽业，２００４，３：５３．王盛伦，黄永春，魏友海等．喹乙醇在草鱼、罗非鱼配合饲料中的应用．福建水产，１９９４，２：１－４．王玉春，薛飞群，赵荣材等．喹烯酮在鸡体内的吸收与分布．中国兽医科技，１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，１２８：３１１－３２３．ＭｃＧｅｅｒＪＣ，ＳｚｅｂｅｄｉｎｓｚｋｙＣ，ＭｃＤｏｎａｌｄＤＧ，ＷｏｏｄＣＭ．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆｃｈｒｏｎｉｃｓｕｂｌｅｔｈａｌｅｘｐｏｓｕｒｅｔｏｗａｔｅｒｂｏｒｎｅＣｕ，ＣｄｏｒＺｎｉｎｒａｉｎｂｏｗｔｒｏｕｔ．ＡｑｕａｔＴｏｘｉｃｏｌ，２０００，５０：２３１－２４３．ＭｅｌｇａｒＭＪ，ＰｅｒｅｚＭ，ＧａｒｃｉａＭＡ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｔｏｘｉｃａｎｄａｃｃｕｍｕｌａｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｈｏｒｔ－ｔｅｒｍｅｘｐｏｓｕｒｅｔｏｃａｄｍｉｕｍｉｎｒａｉｎｂｏｗｔｒｏｕｔ（Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓｍｙｋｉｓｓ）．ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙａｎｄＨｕｍａｎＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，１９９７，３９：７９—８３．ＭｉｌｉｏｕＨ，ＺａｂｏｕｋａｓＮ，ＭｏｒａｉｔｏｕＡＭ．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ，Ｇｒｏｗｔｈ，ａｎｄＳｕｒｖｉｖａｌｏｆｔｈｅＧｕｐｐｙ，Ｐｏｅｃｉｌｉａｒｅｔｉｃｕｌａｔａ，ＤｕｒｉｎｇＣｈｒｏｎｉｃＳｕｂｌｅｔｈａｌＥｘｐｏｓｕｒｅｔｏＣａｄｍｉｕｍ．ＡｒｃｈＥｎｖｉｒｏｎＣｏｎｔａｉｎＴｏｘｉｃｏｌ，１９９８，３５：５８—６３．ＭｏｎｉｅａＳ，ＢｍｅｅＩＪ，ＲａｈｍａｎＭＡ．，ＨｅｍｒｅＧＩ．Ｔｈｅｆａｔｅｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｓｅｑｕｅｎｃｅｓｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙｍｏｄｉｆｉｅｄｐｌａｎｔｐｒｏｄｕｃｔｓｉｎｆｉｓｈｆｅｅｄ，ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｏｆＧＭｓｏｙｂｅａｎＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｓｄｕｒｉｎｇｆｅｅｄｉｎｇｔｒｉａｌｓｉｎＡｔｌａｎｔｉｃｓａｌｍｏｎ，ＳａｌｍｏｓａｌａｒＬＡｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，２００４，２３７：３９１－４０５．中山大学硕士学位论文ＭｏｒｓｅｙＭＧ，ＰｒｏｔａｓｏｗｉｃｋｉＭ．Ｃａｄｍｉｕｍｂｉｏａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎａｎｄｉｔｓｅｆｆｅｃｔｓｏｉｌｓｏｍｅｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌａｓｐｅｃｔｓｉｎｃａｒｐ，Ｃｙｐｒ／ｎｕｓｃａｒｐｉｏ（Ｌ）ａｔｓｅｌｅｃｔｅｄｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ．ＡｃｔａＩｃｈｔｈｙｏｌＰｉｓｃａｔＦａｓｃ，１９９０．ＮｇｕｙｅｎＡＴ，ＪｏｈｎＭＧ，ＲｉｃｈａｒｄＴＬｅｔａ１．ＧｒｏｗｔｈａｎｄｈｅｐａｔｉｃｌｅｓｉｏｎｓｏｆＮｉｌｅｔｉｌａｐｉａ（Ｏｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓｎｉｌｏｔｉｃｕｓ）ｆｅｄｄｉｅｔｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇａｆｌａｔｏｘｉｎＢ１．Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，２００２，２１２：３１１—３１９．ＮｉｅｌｓｅｎＪＢ，Ａｎｄｅｒｓｏｎ０，Ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｒｅｃｅｎｔｌｙａｂｓｏｒｂｅｄｍｅｔｈｙｌｍｅｒｃｕｒｙｄｅｐｅｎｄｓｏｎａｇｅａｎｄｇｅｎｄｅｒ．ＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ，１９９６，７９：６０』０４．ＰｂｉｐｐｓＲＨ，ＢｅｃｖｅｒＤＥ，ＨｕｍｐｈｒｉｅｓＤＪ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｒａｎｓｇｅｎｉｃＤＮＡｉｎｍｉｌｋｆｒｏｍＣＯＷＳｒｅｃｅｉｖｉｎｇｈｅｒｂｉｃｉｄｅｔｏｌｅｒａｎｔ（ＣＰ４ＥＰＳＰＳ）ｓｏｙａｂｅａｎｍｅａｌ．ＬｉｖｅｓｔｏｃｋＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎＳｃｉｅｎｃｅ，２００２，７４：２６９－２７３．ＱｉｎｇＰ，ＳｈｅｎｇＬＹｏｎｇＧＴ．ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｃｈｒｏｍｉｕｍｐｉｃｏｌｉｎａｔｅｏｎｇｒｏｗｔｈａｎｄｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｉｎｆｉｌａｐｉａｔＯｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓｎｉｌｏｔｉｃｕｓｘＯｒｅｏｃｈｒｏｍｉｓａｕｒｅｕｓ．Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，２００３，２２５：４２１＿４２９．ＲｅｅｔｅＪ．Ａｄｒｅｎａｌｌｅｓｉｏｎｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｔｈｅｏｌａｑｕｉｎｄｏｘｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｂｉｓｅｒｇｏｎｉｎｐｏｕｌｔｓａｎｄｃｈｉｃｋｓ．Ｍｏｎａｔｓｈｅｆｔｅｆｕｒｖｅｔｅｒｉｎａｒｍｄｉｚｉｎ，１９９１，４６：２２０－２２５．ＲｅｎａｔａＳ，Ｍａｒｔａｚ，ＫａｔａｒｚｙｎａＳＩｒｋ，ｅｔａ１．Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎｏｆｃａｄｍｉｕｍｉｎａｎｄｉｔｓｅｆｆｅｃｔｏｎｂａｎｋｖｏｌｅｔｉｓｓｕｅｓａｆｔｅｒｃｈｒｏｎｉｃｅｘｐｏｓｕｒｅ．ＥｃｏｔｏｘｉｃｏｌＥｎｖｉｒｏｎＳａｆ，１９９８，４１：１３０－１３６．ＲｏｂｏｈｍＲＡ．Ｐａｒａｄｏｘｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｏｆｃａｄｍｉｕｍｅｘｐｏｓｕｒｅｏｎａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓｉｎｔｗｏｆｉｓｈｓｐｅｃｉｅｓ：ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｉｎｃｕｎｎｅｒＳ（Ｔａｕｔｏｇｌａｂｒｕｓａｄｗｅｒｓｕｓ）ａｎｄｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔｉｎｓｔｒｉｐｅｄｂａｓｓ（Ｍｏｒｏｎｅｓａｘａｔｉｌｉｓ）．ＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｐ，１９８６，１２：２５１－２６２．ＲｏｅｓｉｊａｄｉＧ．Ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎａｎｄｉｔｓｒｏｌｅｉｎｔｏｘｉｃｍｅｔａｌｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ．ＣｏｍｐＢｉｏｃｈｅｍＰｈｙｓｉｏｌ，１９９６，１１３：１１７—１２３＂．ＲｏｅｓｉｊａｄｉＧ，ＵｎｇｅｒＭＥ．ＣａｄｍｉｕｍｕｐｔａｋｅｉｎｇｉｌｌｓｏｆｔｈｅｍｏｌｌｕｓｋＣｒａｓｓｏｓｔｒｅａｖｉｒｇｉｎｉｃａａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｂｙｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌｂｌｏｋｅｒｓ．ＡｑｕａｔＴｏｘｉｃｏｌ，１９９４，２４：１９５－２０６．ＳｃｈｕｂｂｅｒｆＲ，ＲｅｎｚＤ，ＤｏｅｒｆｌｅｒＷ．Ｆｏｒｅｉｇｎ（Ｍ１３）ＤＮＡｉｎｇｅｓｔｅｄｂｙｍｉｃｅｒｅａｃｈｅｓｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｌｅｕｃｏｃｙｔｅｓ，ｓｐｌｅｅｎａｎｄｌｉｖｅｒｖｉａｔｈｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｗａｌｌｍｕｃｏｓａａｎｄｃａｎｂｅｃｏｖａｌｅｎｔｌｙｌｉｎｋｅｄｔｏｍｏｕｓｅＤＮＡ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉ，１９９７，９４：９６１－９６６．ＳｅｏｎｇＧＩ（，ＪｕｎｇＨＪ，ＪｕＣＫＣａｄｍｉｕｍａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎａｎｄｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎｉｎｔｉｓｓｕｅｓｏｆｊｕｖｅｎｉｌｅｏｌｉｖｅｆｌｏｕｎｄｅｒ，Ｐａｒａｌｉｃｈｔｈｙｓｏｌｉｖａｃｅｕｓａｆｔｅｒｓｕｂ－ｃｈｒｏｎｉｃｃａｄｍｉｕｍｅｘｐｏｓｕｒｅ．ＥｎｖｉｒｏｎＰｏｌｌｕｔ，２００４，１２７：１１７—１２３．ＳｏｖｅｎｙｉＪ．ＳｚａｋｏｉｃｚａｉＪ．Ｓｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅｔｏｘｉｃａｎｄｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃａｄｍｉｕｍｏｉｌｔｈｅｃｏｍｍｏｎｃａｒｐ．ＡｃｔａＶｅｔｅｒｉｎａｆｉａＨｕｎｇａｒｉｃａ，１９９３，４１：４１５－４２６．中山大学硕士学位论文ＳｚｃｚｅｒｂｉｋＰ，ＭｉｋｏｌａｊｃｚｙｋＴ，ＳｏｋｏｌｏｗｓｋａＭＴ，ｅｔａ１．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｌｏｎｇ－ｔｅｒｍｅｘｐｏｓｕｒｅｔｏｄｉｅｔａｒｙｃａｄｍｉｕｍｏｎｇｒｏｗｔｈ，ｍａｔｕｒａｔｉｏｎａｎｄｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｇｏｌｄｆｉｓｈ（ｓｕｂｓｐｅｃｉｅｓ：ＰｒｕｓｓｉａｎｃａｒｐＣａｒａｓｓｉｕｓａｕｒａｔｕｓｇｉｂｅｌｉｏＢ．）．ＡｑｕａｔＴｏｘｉｃｏｌ，２００６．ＴｈｏｐｈｏｎａＳ，ＫｒｕａｔｒａｃｈｕｅＭ，ｅｔａ１．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｏｆｗｈｉｔｅｓｅａｂａｓｓ，Ｌａｔｅｓｃａｌｃａｒｉｆｅｒ，ｉｎａｃｕｔｅａｎｄｓｕｂｃｈｒｏｎｉｃｃａｄｍｉｕｍｅｘｐｏｓｕｒｅ．ＥｎｖｉｒｏｎＰｏｌｌｕｔ，２００３，１２１：３０７－３２０．Ｔｏ盯ｅＦＲ，ＳａｌｉｂｉａＡＡ，ＦｅｒｒａｆｉｃＬＢｉｏｍａｒｋｅｒｓａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｉｎｊｕｖｅｎｉｌｅＣｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏｔｏｗａｔｅｒｂｏｒｎｅｃａｄｍｉｕｍ．ＥｎｖｉｒｏｎＰｏｌｌｕｔ，２０００，１０９：２７７－２８２．Ｔｏｔｈ，Ｋ，ｅｔａ１．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙｔｅｓｔｉｎｇｏｆｈｅｒｂｉｃｉｄｅ２，４＇５＿ＴｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｄｉｏｘｉｎａｎｄｐｕｒｅｄｉｏｘｉｎｉｎＳｗｉｓｓｍｉｃｅ．Ｎａｔｕｒｅ１９７９，２７：５４８．ＶａｎＤｅｒＢｏｏｎＪ，ＧｕｉｄｏＥＪＭ，ＶａｎＤｅｎＴｈｉｎａｒｔＥＪＭ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｏｒｔｉｓｏｌａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｎｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｉｎｔｅｌｅｏｓｔｆｉｓｈ．ＣｏｍｐＢｉｏｃｈｅｍＰｈｙｓｉｏｌ，１９９１，１００：４７－５３．ＷａｌｄｍａｎｎＫＨ．Ｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇｉｎｔｏｘｉｃａｔｉｏｎｗｉｔｈｏｌａｑｕｉｎｄｏｘ．ＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，１９８９，３６：６７６－６８６．ＷｅｅｒｄＪ｝Ｉ，ＫｏｍｅｎＪ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｈｒｏｎｉｃｓｔｒｅｓｓｏｎｇｒｏｗｔｈｉｎｆｉｓｈ：ａｃｒｉｔｉｃａｌａｐｐｒａｉｓａｌ．ＣｏｍｐＢｉｏｃｈｅｍＰｈｙｓｉｏｌ，１９９８，１２０：１０７－１１２．ＷｅｉｄｎｅｒＷＪ，ＳｉｌｌｍｅｎＡＪ．ＬｏｗｌｅｖｅｌｓｏｆｃａｄｍｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅｄａｍａｇｅｔｈｅＣＯｍｅａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ．ＡｒｃｈｉｖｅｓｏｆＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，１９９７，７１：４５５－４６０．ＷｅｎｄｅｌａａｒＢｏｎｇａＳＥ．Ｔｈｅｓｔｒｅｓｓｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎｆｉｓｈ．ＰｈｙｓｉｏｌＲｅｖ，１９９７，７７：５９１－６２５．ＹａｎｇＨＮ’ＣｈｅｎＨＣ．ＵｐｔａｋｅａｎｄｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃａｄｍｉｕｍｂｙＪａｐａｎｅｓｅｅｅｌａｔｖａｒｉｏｕｓｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ．ＢｕｌｌＥｎｖｉｒｏｎＣｏｎｔａｍＴｏｘｉｃｏｌ，１９９９，５６：６７０—６７６．ＺｅｌｉｋｏｆｆＪＴ，ｅｔａ１．１ｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｌｏｗｌｅｖｅｌｃａｄｍｉｕｍｅｘｐｏｓｕｒｅｉｎｆｉｓｈ：ａｎａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅａｎｉｍｌｍｏｄｅｌｆｏｒｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｕｄｉｅｓ．ＴｏｘｉｃｏｌＥｎｖｉｒｏｎＨｅａｌｔｈ，１９９５，４５：２３５．ＺｇｌｉｎｉｃｋｉＴ，ＥｄｗａｌｌＥ，ＯｓｔｌｕｎｄＥ，ＬｉｎｄＢ，ＮｏｒｄｂｅｒｇＭ，ｅｔａ１．ＶｅｒｙｌｏｗｃａｄｍｉｕｍｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｓｔｉｍｕｌａｔｅＤＮＡｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈ．ＣｅｌｌＳｃｉ，１９９２，１０３：１０７３－１０８１．中山大学硕士学位论文致谢本论文是在导师刘永坚教授和田丽霞副教授的悉心指导下完成的。两位老师学识渊博、为人谦逊、和蔼可亲给我留下了深刻的印象，是我人生学习的楷模。两年来，两位老师在学习和生活上给予了我很大的关怀和帮助，使我拓展了我的视野，提高了实践技能，增添了我克服困难的信心和勇气。在此，向刘老师和田老师表示最衷心的感谢。同时，还要感谢梁桂英老师在整个试验过程中给予了我无私的帮助。感谢实验室的师兄师姐、师弟师妹和同学朋友，在生活和试验中给予的帮助和建议，让我在实验室度过了愉快的两年。感谢刘自庄师傅在我试验过程中给予的帮助！感谢我的父母、亲人和我男朋友，在精神上、物质上的鼓励与支持。祝我的老师、同学、亲人和朋友们永远健康、幸福、快乐！中山大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：ｊ聋东乙日期：弦红易月‘够日饲料中镉与喹烯酮对罗非鱼生长和体组成的影响及危害

作者：

学位授予单位：

谭薇中山大学

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