大孔吸附树脂纯化皂苷成分的研究

河北农业科学，２０１０，１４（４）：１４９—１５０，１５３　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｂｅｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　编辑李布青　大孔吸附树脂纯化皂苷成分的研究　罗世炜　（襄樊职业技术学院，湖北襄樊４４１０２１）　摘要：大孔吸附树脂具有表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好等优点，近年　来广泛应用于中草药有效成分的提取和分离。大孔吸附树脂可以用于纯化皂苷成分，如人参总皂苷、桔梗总皂　苷和三七总皂苷等物质。本研究为深入研究中药的活性成分奠定了研究基础。　关键词ｉ大孔吸附树脂；皂苷；纯化　中图分类号：Ｒ２８５，５　文献标识码：Ａ　文章编号：１００８—１６３１（２Ｏ　ＬＯ）０４－０１４９－０２　Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓａｐｏｎｉｎ　Ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｂｙ　Ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　Ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　Ｒｅｓｉｎ　ＬＵＯ　Ｓｈｉ—ｗｅｉ　（Ｘｉａｎｇｆａｎ　Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｘｉａｎｇｆａｎ　４４１０２１，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ａｄｓｏｒｂｅｎｔ　ｒｅｓｉｎ　ｗｉｔｈ　ｌａｒｇｅｒ　ｓｕｒｆａｃｅ　ａｒｅａ，ｆａｓｔｅｒ　ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ，ｈｉｇｈ　ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ　ｓｔｒｅｎｇｔｈ，ｓｔｒｏｎｇ　ａｎｔｉ—　ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ　ａｂｉｌｉｔｙ，ａｎｄ　ｇｏｏｄ　ｔｈｅｒｍａｌ　ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ｉｓ　ｗｉｄｅｌｙ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｈｅｒｂａｌ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｉｎ　ｒｅｃｅｎｔ　ｙｅａｒｓ．Ｍａｅｒｏｐｏｒｏｕｓ　ａｄｓｏｒｂｅｎｔ　ｒｅｓｉｎ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｆｒｏｍ　ｇｉｎｓｅｎｇ，ｂａｌｌｏｏｎｆｌｏｗｅｒ　ａｎｄ　ｐａｎａｘ　ｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇ　ａｎｄ　ＳＯ　ｏｎ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｍａｃｒｏｐｏｒｏｕｓ　ａｄｓｏｒｂｅｎｔ　ｒｅｓｉｎ；Ｓａｐｏｎｉｎ；Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　大孑Ｌ吸附树脂属于功能高分子材料，是近年来发展　骨架结构，通过它巨大的比表面进行物理吸附而工作。　起来的一类有机高聚物吸附剂，由聚合单体与交联剂、　大孔吸附树脂按其极性大小和所选用的单体分子结　致孔剂、分散剂等添加剂经聚合反应制备而成…。大孔　构不同，可分为非极性、中极性和极性３类。　吸附树脂吸附技术最早用于废水处理、医药工业、化学工　１．１非极性大孔吸附树脂　业、分析化学、临床检定和治疗等领域，近年来在我国已　非极性大孔吸附树脂是由偶极矩很小的单体聚合制　广泛应用于中草药有效成分的提取、分离和纯化工作。　得的不带任何功能基，孔表的疏水性较强，可通过与小　皂苷又称碱皂体、皂素、皂甙等，为苷类物质的　分子内的疏水部分作用吸附溶液中的有机物，最适于极　１种，是能形成水溶液或胶体溶液并能形成肥皂状泡沫　性溶剂中吸附非极性物质，也称为芳香族吸附剂，例如　的植物糖苷的统称，其由皂苷元和糖、糖醛酸或其他有　苯乙烯、二乙烯苯聚合物。　机酸组成。皂苷在植物界分布很广，许多中药如人参、　１．２　中等极性大孔吸附树脂　三七、知母、远志、甘草、桔梗、柴胡等都含有皂苷。　中等极性大孔吸附树脂是含酯基的吸附树脂，一般　皂苷具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗炎、免疫调节、　用多功能团的甲基丙烯酸酯作为交联剂，其表面兼有疏　抗病毒、抗真菌等作用　。　水和亲水２部分。既可极性溶剂中吸附非极性物质，又　大孔吸附树脂具有表面积较大、交换速度快、机械　可由非极性溶剂中吸附极性物质，也称为脂肪族吸附　强度高、抗污染能力强、热稳定性好等优点，近年来广　剂，例如聚丙烯酸酯型聚合物。　泛应用于中草药有效成分的提取、分离。为此，综述了　１．３极性大孔吸附树脂　大孔吸附树脂在皂苷类成分分离、纯化中的应用。　极性大孔吸附树脂是指含酰胺基、氰基、酚羟基等　１大孑ｌ吸附树脂介绍　含氮、氧、硫极性功能基的吸附树脂，它们通过静电相　互作用吸附极性物质，如丙烯酰胺　。　大孔吸附树脂是１种不含离子交换基团，具有大孔　按照类似物吸附类似物的原则，根据被吸附物质的　结构的高分子吸附剂，其吸附性能与活性炭相似，依靠　极性大小选择不同类型的大孔吸附树脂。极性较大的化　它和被吸附的分子（吸附质）之间的范德华引力，通　合物一般适合在中极性的大孔吸附树脂上分离，极性小　过表面吸附、表面电性或形成氢键等作用达到分离、提纯　的化合物适合在非极性的大孔吸附树脂上分离　，若树　的目的。一般是以苯乙烯和丙烯酸为单体，加入乙烯苯为　脂和化合物之间产生氢键作用，吸附作用也将增强。通　交联剂，甲苯、二甲苯为致孔剂，相互交联聚合形成多孔　常用于皂苷分离纯化的是极性ＤＩＯ１，如用于人参皂苷、　三七皂苷、苦玄参皂苷等，人参皂苷也可采用极性的　收稿日期：２０１０－０３．２４　ＤＩＯ１和非极性的ＤＡＩＯ１混合树脂分离、纯化。江涛涛　基金项目：２００７年湖北省教育厅Ｂ类重点项目（Ｂ２００７７２００１）　等　对大孔树脂吸附纯化生首乌中二苯乙烯苷的工艺参　作者简介：罗世炜（１９７１一），男，湖北襄樊人，硕士，副教授，主　数进行筛选，优选出ｓ．８树脂对二苯乙烯苷的吸附性能　要从事生物技术方面的研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｓｗｌｙｙ＠１６３．ｃｏｍ。　・１５０・　河北农业科学　２０１０矩　最好。曲文华　在西洋参皂苷Ｒｂ！分离、纯化工艺的研　究中，采用Ｄ１０１、ＬＳＡ．１０、ＬＳＡ一２０型３种大孔吸附树　脂对西洋参人参皂苷进行吸附纯化，通过采用静态吸附　法测定吸附量和解吸液中人参皂苷Ｒｂｌ的含量发现，在　９５％以上。表明ＡＢ一８树脂精制柴芩两解汤工艺简单、　稳定、可控。　３大孔吸附树脂纯化皂苷的优点和缺点　３．１优点　静态吸附试验中３种树脂的吸附量无明显差别，但在静　态洗脱试验中Ｄ１０１树脂对人参皂苷的总洗脱量和总洗　脱率均高于其他２种树脂。　工艺简便，树脂再生容易，无需特殊设备，而且成　本低，利于工业化。相比较传统的溶剂法提取，如采用　正丁醇、乙醚、乙酸乙酯、丙酮等有机物质，容易残　留，而用吸附树脂提取、用乙醇和水洗脱，对皂苷的活　大孔吸附树脂纯化皂苷成分的应用　蔡雄等　以人参总皂苷的洗脱率和精制度以及总皂　性没有影响，且由于其吸附了色素、糖类等物质而提高　苷含量测定为考察指标，考察大孑Ｌ树脂富集、纯化人参　总皂苷的吸附性能和洗脱参数，并最终确定用人参提取　液４５　ｍＬ（５．８８　ｍｇ／ｍＬ）上大孔树脂柱（干重２．５２　ｇ），　用蒸馏水１００　ｍＬ、５０％乙醇１００　ｍＬ依次洗脱，人参总　皂富集于５０％乙醇洗脱液部分，且除杂质能力强。结　果表明，通过大孔树脂富集与纯化后人参总皂苷洗脱率　在９０％以上，５０％乙醇洗脱液干燥后总同物中人参总皂　苷纯度可达６０．１％。杨献文等　为研究桔梗总皂苷的　提取分离工艺，采用了ＺＴＣ２１大孔吸附树脂，用不同浓　度乙醇洗脱提纯桔梗总皂苷，平均产率为２．０５％，操作　简单、得率高、成本低。姜换荣等　把大孔吸附树脂用　于赤芍总苷分离，结果收率为５．４％，其中芍药苷的含　量占赤芍总苷的７５％，得率高且稳定可靠。刘可越　等　叫研究认为，利用Ｄ１０１型大孔吸附树脂富集纯化粟　米草总皂苷的工艺为：洗脱溶剂用体积分数为６０％的乙　醇，料液质量浓度为ｏ．５　ｇ／ｍＬ，洗脱速率为２．０ＢＶ／ｈ，树　脂与药材质量比为２：１。许舒雯等　研究得出以Ｄ１０１　大孔吸附树脂纯化苜蓿皂苷的优化工艺条件为：蒸馏　水、４个柱体积的２５％稀醇、４个柱体积的６０％乙醇，　以１　ＢＶ／ｈ速度１次洗脱，收集６０％乙醇洗脱液部位，　回收乙醇，浓缩，真空减压干燥后得苜蓿皂苷。宓晓　黎　报道用非极性大孔吸附树脂法从复方中药制剂　“降压胶囊”中提取分离黄酮类、皂苷类等有效成分的　研究，正确地选择大孔吸附树脂及吸附和解吸条件，得　出可获得高纯度的有效组分。安丰堂等　采用大孔树　脂富集、纯化三七总皂苷，考察了大孔树脂静态／动态　的各项吸附及洗脱性能，以及无机盐对其吸附性能的影　响，从而优选出最佳精制工艺，确定Ｄ１０１大孔树脂加　入ＮａＣ１后上样，４　ＢＶ的水洗涤除去杂质及无机盐，　４ＢＶ体积的５０％醇洗脱，提取并得到了三七皂苷。潘　林梅等　在以ＡＢ．８树脂精制柴芩两解汤的最佳工艺研　究中，采用Ｌｑ（３　）正交设计，以ＨＰＬＣ法测定其中黄　芩苷和栀子苷的吸附、解析率为指标，分别考察动态吸　附中药液浓度、树脂量、流速对吸附的影响，以及解析　液浓度、体积、流速３个因素对解析的影响。结果显　示，吸附药液浓度为生药０．１５　ｇ／ｍＬ，树脂用量为３倍　药材量，速度１０　ｍＬ／ｍｉｎ；解析液为７５％乙醇，１０倍药　材量，流速１０　ｍＬ／ｍｉｍ，黄芩苷及栀子苷的解析率可达　了皂苷的纯度。与传统的除杂方法和工艺相比，能提高中　药内在质量和制剂水平，能增强产品的稳定性，缩短生产　周期。该技术免去了静置沉淀、浓缩等耗时多的工序。　３．２缺点　大孔树脂吸附法，处理量小，操作周期长，不能连　续生产，吸附效果易受流速和样品浓度等因素影响。大　孑Ｌ吸附树脂应用于皂苷，特别是复方总皂苷的分离纯　化，还存在树脂本身的质量和使用方法的规范化问题。　主要是国产树脂质量较低，颗粒大小不均匀，杂质较多　且易破碎，型号众多但参差不齐，还没有１个统一的质　量检验标准¨　。鉴于以上问题，当务之急是先制定１个　质量检验和操作的规范化标准。相信随着此方面的逐渐　完善，大孑Ｌ树脂的应用技术会越来越成熟。　皂苷是广泛存在于植物界的一类活性化合物，近年　来随着提取分离技术的显著提高，各种分析手段的创　新，大大加快了对皂苷物质提纯的研究，为我国中药的　深人研究奠定了良好基础。　参考文献：　［１］张建，毛晓英，李宝坤．大孑Ｌ树脂吸附纯化粗提葡萄　梗单宁研究［Ｊ］．安徽农业科学，２００８，３６（３６）：　ｌ５７６７—１５７６９．　［２］王宁．天然药物化学［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，　２００８：９２．　［３］吴剑锋．天然药物化学［Ｍ］．北京：高等教育出版社，　２００８：７０．　［４］米靖字，宋纯清．大孔吸附树脂在中草药研究中的应用　进展［Ｊ］．中成药，２００１，（１２）：９１４—９１７．　［５］江涛涛，欧阳臻，缪亚东，等．大孔树脂吸附纯化何首　乌中二苯乙烯苷的研究［Ｊ］．中国中药杂志，２００６，　３ｌ（８）：６４６—６４９．　［６］曲文华．西洋参皂苷Ｒｂ１分离、纯化工艺的研究［Ｊ］．　吉林中医药，２００６，２６（７）：５ｌ一５３．　［７］蔡雄，刘中秋，王培训，等．大孔吸附树脂富集纯化人参　总皂苷工艺［Ｊ］．中成药，２００１，２３（９）：６３１—６３４．　［８］杨献文，刘墨祥，刘云刚，等．大孔吸附树脂柱色谱分　离桔梗总皂苷［Ｊ］．吉林农业大学学报，２００１，　２３（２）：５Ｏ一５２．　（下转第１５３页）　第４期　康纪婷等：纤维素酶活力测定方法　・１５３・　的各组分的纯度不一致，导致人们对纤维素酶系各组分　的分类及性质没有完全统一的看法，对酶的理解和命名　也不完全一致　。　３．２纤维素酶活力测定方法的选择　［３］Ｂｅｒｎｄ　Ｎｉｄｅｔｚｋｙ，Ｗａｌｔｅｒ　Ｚａｃｈａｒｉａｅ，Ｇｔｉｎｔｈｅｒ　Ｇｅｒｃｋｅｎ，ｅｔ　ａ１．Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｃｅｌｌｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｂｖ　ｒｅｓｓｅｉ　ｃｅｌｌｏｂｉｏ．　ｈｙｄｒｏｌａｓｅｓ：Ｅｘｐｅｉｒｍｅｎｔａｌ　ｄａｔａ　ａｎｄ　ｋｉｎｅｔｉｃ　ｍｏｄｅｌｉｎｇ［Ｊ］．　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｍｉｃｒｏｂ．Ｔｅｃｈｎｏ１．１９９４，１６（２）：４３　纤维素酶活力测定方法的多样化，使得在选择具体　方法时，必须考虑测定的具体目的。例如，在生化研究　中，主要测定纤维素酶单一组分的酶活力，所以必须选　择特定的底物以及缓冲液。在微生物试验中，主要是筛　选产酶菌株和突变菌株，由于测定数量较大，因而可以　［４］屈二军，索向阳，赵１０３０３—１Ｏ３０４．　桢，等．高产纤维素酶的黑曲霉　菌种的选育［Ｊ］．安徽农业科学，２００８，３６（２４）：　［５］谢占玲，吴润．纤维素酶的研究进展［Ｊ］．草业科学，　２００４，２１（４）：７２—７６．　［６］刘洁等．纤维素酶活力测定方法评述［Ｊ］．工业微生物，　ｔ９９４，２４（４）：２７—３２．　采用较简单的方法，而不需要很高的准确性。在工业生　产实践中，主要是利用纤维素酶将纤维素转化为葡萄糖　用于ｌＴ业发酵生产，此时葡萄糖的产量是最重要的指　［７］李建武，萧　能，余瑞元．生物化学实验原理和方法　［Ｍ］．北京：北京大学出版社，１９９７．　［８］蒋芳，曾林子，刘成君，等．饲用细菌纤维素酶的发酵条　件优化与性质研究［Ｊ］．中国饲料，２Ｏ０６，（６）：６—９．　标，因此，可以选择高纯度的底物如滤纸、脱脂棉等。　但同时也需要考虑工业生产的巨大工作量，可采用一些　较为简便的方法。　３．３展望　［９］张瑞萍．纤维素酶活力测定方法［Ｊ］．印染，２００２，　（８）：３８—３９．　纤维素是我国年产量很大的可再生资源，能成功地　开发利用这一资源，对可持续发展有非常重要的意义。　在对环境生态问题高度重视的当今社会，如何成功利用　［１Ｏ］施特尔马赫Ｂ（著）．钱嘉渊（译）．酶的测定方法　［Ｍ］．北京：中国轻工业出版社，１９９２：８４—１１２．　［１１］湖北省微生物研究所纤维素酶组．快速测定纤维素酶中　ＣＭＣ液化活力法［Ｊ］．微生物学通报，１９７９，（５）：１１．　纤维素酶将纤维素降解，是研究者研究的主要目标。而　对纤维素酶活力的测定方法研究是整个研究的重点。能　找到１种简单、快速、准确的酶活力测定方法，将会为　［１２］杨涛，马美湖．生物质降解酶酶活的测定方法［Ｊ］．　中国酿造，２００６，（１１）：６７—６９．　［１　３］Ｗｏｏｄ　Ｔ　Ｍ．Ｔｈｅ　ｃｅｌｌｕｌａｓｅ　ｏｆ　ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓｏｌａｎｉ　ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐ一（１，４）一ｇｌｕｃａｎａｓｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｂ—Ｄ・ｇｌｕｃｏｓｉ・　整个纤维素酶的研究打开１扇大门，使纤维素酶的研究　进人１个新的空间。　参考文献：　［１］岳思君，李学斌，李爱华，等．高酶活纤维素分解菌分　离筛选的研究［Ｊ］．安徽农业科学，２００９，３７（１）：　１１—１２，１５．　ｄａｓｅ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｌ　Ｊ　１．Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｊ，１９７１，１２１：３５３．　［１４］Ｃｈｒｉｓｔａｌｏｐｏｕｓ　Ｐ（１９９４）Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎ　ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ　ｗｉｔｈ　ｔｒａｎｓｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｏ—　ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９９４，２２４：３７８—３８５．　［１５］孑Ｌ新刚，李华，吴国莲．秸秆纤维素酶水解率测定方法　［２］傅力，丁友防，张　篪．纤维素酶测定方法的研究　的研究［Ｊ］．新疆农业科学，２Ｏ０７，４４（５）：６６３－６６６．　［Ｊ］．新疆农业大学学报，２０００，２３（２）：４５—４８．　（上接第１５０页）　［９］姜换荣，裴旭红．大孑Ｌ吸附树脂用于赤芍总苷分离方法　的探［Ｊ］．中草药，１９９９，２１（１２）：６４４—６４５．　［１Ｏ］刘可越，刘海军．大孑Ｌ吸附树脂富集・纯化粟米草总皂　苷工艺研究［Ｊ］．安徽农业科学，２００９，３７（１７）：　７９８１—７９８２．　［１５］潘五九，肖小河，袁海龙，等．中药生产关键共性新技　术研究进展［Ｊ］．中草药，２００４，３５（４）：３６１．　［１６］Ｐｐｅ　Ｔ，Ｒｅｎ　ＤＭ，Ｓｈｉ　Ｊ．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ　ｆｒｏｍ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ　Ｐ７２　ａ—　ｇａｉｎｓｔ　ｗｈｅａｔ　ｓｃａｂ［Ｊ］．Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　２００８，９（６）：１２４—１２６．　［１１］许舒雯，龚祝南，丛晓东，等．大孑Ｌ树脂分离纯化苜蓿　皂苷工艺研究［Ｊ］．安徽农业科学，２００６，３４（１３）：　３１７６—３１７７．　［１７］Ｚｈａｎｇ　ＹＦ，Ｈａｎ　ＣＨ，Ｌｉｎ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｅ—　ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ　ｖｉｒｕｓ　ＯＲＦ－Ｉ　ｇｅｎｅ　ａｎｄ　［１２］宓晓黎，杨炎，成恒蒿，等．大孔吸附树脂技术应用　ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒｅｃｏｍ—　与复方中成药制备工艺的研究［Ｊ］．离子交换与吸收，　１９９７，１３（６）：５９．　ｂｉｎａｎｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，　２００９，１０（２）：６２—６７，７２．　［１３］安丰堂，徐［１４］潘林梅，傅缓，秦晶．脑得生中ｉ七皂苷精制工艺　［１８］Ｃｈｅｎ　Ｙ，Ｔｉａｎ　Ｈ，Ｙｉｎ　ＳＨ，ｅｔ　ａ１．Ｐｕｒｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｏ－　ｃｏｍｐｅｔｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＧＰ５　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　研究［Ｊ］．中医药学报，２００４，３２（６）：２５—２８．　佳，丁立远，等．ＡＢ一８树脂精制柴芩两解　汤的工艺研究［Ｊ］．南京中医药大学学报，２００６，　２２（５）：３０９—３１１．　ａｎｄ　ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ［Ｊ］．Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ＆　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，１０（３）：９７—１００．