注射用多西他赛脂质体的制备及其体内外评价

Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｅｗ　Ｄｒｕｇｓ　２０１　１，２０（１）　注射用多西他赛脂质体的制备及其体内外评价　王栋海　，杨光丽　，邹伟伟　，严守升　，宫新江　，周英兰　，杨清敏　，工晶翼‘　。（　山东省注射用微粒给药新技术重点实验室，济南　；　齐鲁制药有限公司药物研究院，济南　）　［摘要］　目的：制备多西他赛脂质体，对其体内外性质进行评价。方法：采用改良薄膜分散法结合冷冻　干燥工艺制备多西他赛脂质体冻干粉；用激光粒度仪考察了脂质体的粒径分布和Ｚｅｔａ电位；超滤法测定了　包封率；以市售多西他赛注射液为对照，比较体外释放、大鼠骨髓抑制和裸鼠体内肿瘤抑制情况。结果：多西　他赛脂质体平均粒径为９２　ｎｍ，Ｚｅｔａ电位为一５２．３　ｍＶ，包封率＞９５％，２４　ｈ累积释放率为８４．１％；相同剂量　下，多西他赛脂质体比多西他赛注射液的骨髓抑制作用降低，但二者对ＨＴ．２９移植瘤的抑制作用相同。结　论：本实验所制备的多西他赛脂质体包封率较高、稳定性较好；与多西他赛注射液相比，毒性较低，同时具有　相同的抗肿瘤效力。　［关键词］　多西他赛；脂质体；包封率；体外释放；骨髓抑制；　［中图分类号］Ｒ９７１．１　［文献标志码］Ａ　［文章编号］１００３—３７３４（２０ｌ１）０１—００２４—０５　Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｖｏ－ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｏｃｅｔａｘｅｌ　ｌｉｐｏｓｏｍｅ　ｆｏｒ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ　ＷＡＮＧ　Ｄｏｎｇ～ｈａｉ　’　，ＹＡＮＧ　Ｇａａｎｇ—ｌｉ　＇　，ＺＯＵ　Ｗｅｉ—ｗｅｉ　＇　，ＹＡＮ　Ｓｈｏｕ—ｓｈｅｎｇ　，　ＧＯＮＧ　Ｘｉｎ—ｊｉａｎｇ　，ＺｔｔＯＵ　Ｙｉｎｇ—ｌａｎ　，ＹＡＮＧ　Ｑｉｎｇ—ｍｉｎ　＇　，ＷＡＮＧ　Ｊｉｎｇ—ｙｉ　＇　（１　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒ）　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｆｉｎａｎ　２５０　１　００，Ｃｈｉｎａ；　２　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，Ｑｉｌｕ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ，Ｊｉｎａｎ　２５０１００，Ｃｈｉｎａ）　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｐｒｅｐａｒｅ　ｄｏｃｅｔａｘｅｌ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅ　ｉｔｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｄｏｅｅｔａｘｅｌ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ｆｉｌｍ　ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ—ｈｉｇｈ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ｈｏｍｏｇｅｎｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｌｙｏｐｈｉ—　ｌｉｚａｔｉｏｎ，Ｖｅｓｉｃｌｅ　ｓｉｚｅ　ａｎｄ　Ｚｅｔａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ　Ｎａｎｏ　ＺＳ．Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ　ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｗａｓ　ｅ—ｆ　ｖａｌｕａｔｅｄ　ｂｙ　ｕｈｒａｆｉｈｒａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｒｅｌｅａｓｅ，ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｔｕｍｏｒ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｐｏｓｏｍａｌ　ｄｏ—　ｅｅｔａｘｅｌ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｉｎ　ｅｏｍｐａｒａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｄｏｃｅｔａｘｅｌ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｎｌｅａｎ　ｐａｒｔｉｃｌｅ　ｓｉｚｅ，Ｚｅｔａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ａｎｄ　ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ　ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｙｏｐｈｉｌｉｆｚｅｄ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　ｗｅｒｅ　９２　ｎｍ，一５２．３　ｍＶ，ａｎｄ＞９５％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｄｏ—　ｃｅｔａｘｅｌ　ｗａｓ　ｒｅｌｅａｓｅｄ　ｂｙ　８４．１％ｆｒｏｍ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｗｉｔｈｉｎ　２４　ｈ．Ｔｈｅ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｂｏｎｅ　ｎｌａｒｒｏｗ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｏ－　ｃｅｔａｘｅｌ　ｌｉｐｏｓｏｍｅ　ｗａｓ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｄｏｃｅｔａｘｅｌ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ　ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｉｐｏｓｏｍａｌ　ｄｏｃｅｔａｘ—　ｅｌ　ｗａｓ　ａｓ　ｇｏｏｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｄｏｃｅｔａｘｅｌ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｄｏｃｅｔａｘｅｌ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　ｈａｖｅ　ａ　ｈｉｇｈ　ｅｎｃａｐｕｓｕｌａｔｉｏｎ　ｅｆｆｉ—　ｃｉｅｎｃｙ　ａｎｄ　ｌｏｎｇ　ｔｉｍｅ　ｓｈｅｌｆ—ｌｉｆｅ．Ｔｈｅ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｌｉｐｏｓｏｍａｌ　ｄｏｃｅｔａｘｅｌ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｉｓ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｄｏｃｅｔａｘ—　ｅｌ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ，ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉ—ｔｕｍｏｒ　ｅｆｆｅｃｔ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ．　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］ｄｏｅｅｔａｘｅｌ；ｌｉｐｏｓｏｍｅ；ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ　ｅｆｉｆｃｉｅｎｃｙ；ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｒｅｌｅａｓｅ；ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｎ　［基金项目］　国家“重大新药创制”科技重大专项（２０１０ＺＸ０９４０ｌ＿　３０２４—２）；山东省泰山学者建设工程专项经费资助　抗肿瘤药物脂质体制剂的研究是目前国内　外新型给药系统的研究热点之一　。目前国外　已有多个脂质体制剂上市或进入临床研究阶段，　［作者简介］　王栋海，男，工程师，主要从事新型微粒给药技术的研　究　联系电话：（０５３Ｉ）８３Ｉ２６９３４，Ｅ·ｍａｉｌ：ｄｏｎｇｈａ１．ｗａｎｇ＠ｑｉｌｕ—ｐｈａｒ—　但其中多数为水溶性较好的药物，如多柔比星、　长春瑞滨、伊立替康等　。不溶于水的药物如　［通讯作者］　王晶翼，男，教授，主要从事靶向药物研究与开发。联　系电话：（０５３１）８３１２９９６８，Ｅ—ｍａｉｌ：ｊｉｎｇｙｉ．ｗａｎｇ＠ｑｉｌｕ—ｐｈａｒｍａ．ｃｏｉｎ。　多西他赛的脂质体制剂国外研究进展较慢，报道　２４　中国新药杂志２０１１年第２０卷第１期　也相对较少。本研究制备了一种稳定性较好的　多西他赛脂质体，并对其体外特性和动物体内安　全性及有效性进行了考察。　材　料　ＲＥ一５２旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；　Ｍ一１　１０ＥＨ微射流纳米均质机（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ）；Ｗａ—　ｔｅｒｓ　５１５—７１７—２４８７高效液相色谱仪（Ｗａｔｅｒｓ公　司）；Ｎａｎｏ—ＺＳ激光粒子测定仪（英国马尔文公　司）；Ａｍｉｃｏｎ８０１０超滤器（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司）；ＹＮ一　１０Ｕｌｔｒａｃｅｌ超滤膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司）；ＨＥＭＡＶＥＴ　９５０ＦＳ动物专用血球分析仪（美国Ｄｒｅｗ公司）。　多西他赛（齐鲁制药有限公司，批号：　８１２００１　Ｇ８）；多西他赛注射液（齐鲁制药有限公司，　规格：２０　ｍｇ／Ｏ．５　ｍＬ，批号：８０７０１６ＥＷ）；注射用大豆　卵磷脂（德国Ｌｉｐｏｉｄ　ＧｍｂＨ公司，批号：７７６１２６—４）；　胆固醇（南京新百药业有限公司，批号：０８１２０２）；溶　血卵磷脂（Ｓｉｇｍａ公司，批号：１１８Ｋ５２０４）；磷酸氢二　钠、磷酸二氢钠、无水药用乙醇（天津市广成化学试　剂有限公司）；甲醇、乙腈为色谱纯；其他试剂为分　析纯　方　法　１　注射用多西他赛脂质体的制备　称取多西他赛６０　ｍｇ、注射用磷脂１．５　ｇ和胆固　醇３０　ｍｇ，置于茄形瓶中，加入适量叔丁醇，水浴加　热充分溶解后，加入３０　ｍＬ含有１２％冻干保护剂的　磷酸盐缓冲液（ｐＨ　６．０，１０　ｍｍｏｌ·Ｌ　），水浴中振荡　３０　ｒａｉｎ，转移至微射流仪中，在８　０００　ｐｓｉ的压力下循　环５次，形成半透明的脂质体溶液。经０．２２　ｍ滤　膜过滤除菌后，分装至西林瓶中冷冻干燥。所得多　西他赛脂质体４ｏＩ＝保存。　２　多西他赛脂质体的理化性质表征　２．１　脂质体粒径分布和Ｚｅｔａ电位的测定　取冻干　前的脂质体溶液及冻干后的脂质体（注射用水复　溶），注射用水稀释５０倍，用激光粒度仪检测其粒　径分布和Ｚｅｔａ电位。　２．２脂质体中多西他赛的含量测定　采用高效液　相色谱（ｈｉｇｈ—ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，　ＨＰＬＣ）法测定多西他赛脂质体中多西他赛的含量，　脂质体冻干粉加注射用水重建后，用甲醇破乳并定　容。ＨＰＬＣ分析，按外标法以峰面积计算供试品中　多西他赛含量。色谱条件：色谱柱Ｓｙｍｍｅｔｒｙ　Ｃ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｆ　ｏｆ　Ｎｅｗ　Ｄｒｕｇｓ　２０１１，２０（１）　（１５０　ｍｍ　ｘ　４．６　ｍｍ，５　Ｉｘｍ）；流动相：乙腈一水　（５０：５０）；柱温为３０ｏＣ；检测波长２３０　Ｙｌｍ；进样量２０　Ｌ。系统适用性试验：理论塔板数按多西他赛峰计　算应不低于９　０００，多西他赛与脂质体中的辅料峰分　离度应＞２．５。　２．３　溶血卵磷脂的含量测定　采用ＨＰＬＣ法测定　多西他赛脂质体溶血卵磷脂的含量。取脂质体冻　干粉１支，加水复溶后，以水稀释定容至１０　ｍＬ。　取此溶液１　ｍＬ，置１０　ｍＬ量瓶中，加９５％乙醇稀释　至刻度，摇匀，作为供试品溶液，量取２０　Ｌ注入　液相色谱仪，记录色谱图。另取对照品溶液同法　测定。按外标法以峰面积计算供试品中溶血卵磷　脂含量。色谱条件与系统适用性试验：用氨基丙　基硅烷键合硅胶为填充剂；以９５％乙醇／Ｏ．０２　ｔｏｏｌ·　Ｌ　草酸溶液（９５：５）为流动相；示差折光检测器；　柱温为３０℃；溶血性磷脂的两异构体峰之间的分　离度应符合规定。　２．４　多西他赛脂质体包封率的测定　采用超滤法　测定所制备多西他赛脂质体的包封率，方法如下：将　多西他赛脂质体用注射用水复溶后移取适量体积置　于超滤杯中，密封后氮气加压（０．１２　ＭＰａ），接取流　出液，用上述含量测定方法检测其药物含量（　），测　定超滤前溶液中药物的含量（ｗｏ），包封率／％＝　（　一　）／　×１００。　２．５多西他赛脂质体体外释放曲线的测定　根　据透析袋厂家提供的方法将透析袋处理后置于释放　介质中浸泡过夜。冻干脂质体注射用水复溶后用　５％葡萄糖稀释至药物浓度为０．５　ｍｇ·ｍＬ～，取１　ｍＬ　置透析袋内，两端扎紧后，绑于溶出仪的小浆上，放　入盛有１　ｔｏｏｌ·Ｌ　水杨酸钠一磷酸盐缓冲液（ｐＨ　７．４）　的溶出小杯中，保持漏槽条件，在１００　ｒ·ｍｉｎ　和（３７　±０．５）℃介质温度下进行体外释放试验，按设定时　间间隔（０．５，１，１．５，２，３，４，６，８和２４　ｈ）取５　ｍＬ用　ＨＰＬＣ测释放介质中药物浓度，同时补充等温介质５　ｍＬ。计算药物累积释放百分率。同法考察普通多　西他赛注射液的体外释放行为。　３　多西他赛脂质体稳定性考察　未冻干的脂质体溶液于４℃和２５℃条件下放　置，分别于０，１２，２４，４８，９６和１２０　ｈ取样测定药物　含量、包封率、粒径变化情况。冻干后的脂质体于　２５　ｃＩ二条件下放置，分别于０，１，２，３，６和１２个月取样　并用注射用水复溶后测定药物含量、包封率、粒径及　溶血磷脂变化情况。　２５　中国新药杂志２０１１年第２０卷第１期　ＣｈＩｎｅｓｅ　ＪｏｕｒｎａＩ　ｏｆ　Ｎｅｗ　Ｄｒｕｇｓ　２０１１，２０（１）　４　多西他赛脂质体的药理毒理学试验　４．１大鼠骨髓抑制试验　Ｗｉｓｔａｒ大鼠［山东大学　实验动物中心提供，许可证号：ＳＣＸＫ（鲁）　结　果　１　多西他赛脂质体的理化性质　１．１　冻干前后脂质体粒径分布和Ｚｅｔａ电位　经测　２００９０００１］５０只，雌雄各半，体重２００～２５０　ｇ。动物　饲养７　ｄ后用于试验。眼眶后静脉丛采血，ＥＤＴＡ一　定，冻干前多西他赛脂质体的平均粒径为７５　ｎｍ，多　分散指数（ＰＤＩ）为０．２１４，冻于后脂质体注射用水复　溶后平均粒径为９２　ｎｍ，ＰＤＩ为０．１４５。冻干前后粒　２Ｋ抗凝，血球分析仪测定大鼠基础血液学指标，包　括白细胞（ＷＢＣ）、红细胞（ＲＢＣ）、血红蛋白　（ＨＧＢ）、血小板（ＰＬＴ）、中性粒细胞（ＮＥ）和淋巴细　胞（ＬＹ）计数。剔除ＷＢＣ计数异常者，按ＷＢＣ平均　值相近随机分为５组：氯化钠注射液对照组（Ｖｅｈ　径变化不大，但冻干后粒径分布更加均匀。冻干前　Ｚｅｔａ电位为一４８．２　ｍＶ，冻干后为一５２．３　ｍＶ。　１．２　冻干前后脂质体包封率及载药量　经测定多　西他赛脂质体冻干前包封率为９８．９６％，载药量　１．８４　ｍｇ·ｍＬ～。冻干后脂质体包封率为９９．２３％，　载药量为１．８８　ｍｇ·ｍＬ　，说明冻干过程对多西他赛　脂质体的包封率无影响。　组）、多西他赛注射液低剂量组（Ｆ１组，４．５　ｍｇ·　ｋｇ　）、多西他赛注射液高剂量组（Ｆ２组，９　ｍｇ·　ｋｇ　）、多西他赛脂质体低剂越组（Ｌ１组，４．５　ｍｇ·　ｋｇ　）、多西他赛脂质体高剂量组（Ｌ２组，９　ｍｇ·　ｋｇ　），每组ｌ０只，雌雄各半。Ｆ１，Ｆ２。Ｉ　１和Ｌ２组分　别尾静脉注射给予相应的药液，Ｖｅｈ组给予生理盐　１．３多西他赛脂质体的体外释放情况　以药物累　积释放率对考察时间作图，得释放曲线（见图１）。　从图中可见，０～８　ｈ内药物释放量随时问的延长而　增加，８　ｈ后药物释放达到平台。同时也可以看出，　水注射液，给药体积均为１０　ｍＬ·ｋｇ～，给药速度为　０．１～０．２　ｍＬ·Ｓ～。给药后每天进行动物一般症状观　察，记录动物症状和存活情况。分别于给药后２，４，６，　８和１０　ｄ测定各组动物的体重并进行血液学检查。　４．２多西他赛脂质体对人结肠癌ＨＴ·２９移植瘤的　生长抑制试验　取生长良好的人结肠癌ＨＴ一２９实　多西他赛脂质体的体外释放行为与普通多西他赛注　射液基本相似，脂质体的释放速率略低于注射液组。　ｌ　Ｏ０　体瘤组织，切割成２～３　１３１Ｉｎ　大小的均匀小块，在　ＳＰＦ级Ｂａｌｂ／ｅ—ｎｉｌ小鼠［中国科学院上海药物所提　供，许可证号：ＳＣＸＫ（沪）２００８００１７］腋窝适宜处接　种瘤块。待肿瘤长至１００　ＩｎＩｌｌ　左右时分组，每组４　只。试验设置５个组：生理盐水组、多西他赛脂质体　签８０　茎６０　羹　ｏ　磷２　０　０　２　４　６　８　１　０　ｌ　２　ｌ４　１６　Ｉ　８　２０　２２　２４　２６　ｔ／ｈ　１０和２０　ｍｇ·ｋｇ　组、多西他赛注射液１０和２０　ｍｇ·　ｋｇ　组，ｉｖ，ｑ４ｄ，连续给药３次。每２　ｄ测量肿瘤大　小并计算体积。实验结束后，剖取瘤块，称瘤重并计　算相对肿瘤重量抑制率。各组相对肿瘤体积和肿瘤　重量以　±ｓ表示，采用ｔ检验分析组问差异。Ｐ＜　０．０５被认为差异有统计学显著性。　对数据进行拟合，由表１叮见多西他赛脂质体　图１　多西他赛脂质体与多西他　赛注射液的体外释放曲线　与其注射液的体外释放行为均符合Ｗｅｉｂｕｌｌ方程。　表１体外释放拟合方程　２　多西他赛脂质体的稳定性　多西他赛脂质体冻干前于２５℃和４￣Ｃ条件放置　２６　１２０　ｈ后稳定性均良好，外观呈半透明溶液状态，略　有蓝色乳光。检测粒径分布、包封率及药物含量均　中国新药杂志２０１１年第２０卷第１期　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｅｗ　Ｄｒｕｇｓ　２０１１，２０（１）　无明显变化。冻干后的多西他赛脂质体在２５ｏＣ条　件下放置ｌ２个月后稳定性较好，粒径、包封率、药物　含量及溶血磷脂均无明显变化（见表２）。　表２　冻干后多西他赛脂质体２５￣Ｃ放置稳定性结果　３　多西他赛脂质体药理毒理学结果　３．１　骨髓抑制作用　实验结果表明脂质体与注射　液两种剂型的两个剂量均导致大鼠腹泻，体重下降，　ＷＢＣ，ＮＥ，ＬＹ和ＰＬＴ计数减少，且具有剂量依赖性　增强作用，对ＲＢＣ和ＨＧＢ影响不明显。９　ｍｇ·ｋｇ　多西他赛注射液剂量下，动物出现死亡，死亡率为　１０％，相同剂量下多西他赛脂质体组动物未出现死　亡，但其ＷＢＣ，ＮＥ和ＬＹ计数降低较多西他赛注射　液组减轻（见表３～６）。　表３多西他赛脂质体组与多西他赛注射液组ＷＢＣ计数　Ｋ·　Ｌ一，互±ｓ　表４多西他赛脂质体组与多西他赛注射液组ＮＥ计数　Ｋ·Ｉ．ＬＬ　，　－４－　表５多西他赛脂质体组与多西他赛注射液组ＬＹ计数　Ｋ·　Ｌ～，　±　表６多西他赛脂质体组与多西他赛注射液组ＰＬＴ计数　Ｋ·ＩｘＬ～，互±ｓ　２７　中国新药杂志２０１１年第２０卷第１期　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｅｗ　Ｄｒｕｇｓ　２０１１，２０（１）　３．２　多西他赛脂质体对人结肠癌ＨＴ一２９移植瘤的　生长抑制作用　实验结果见图２。在设定的方案下　多西他赛注射液和多西他赛脂质体均能显著抑制肿　瘤生长（与相同时间点阴性对照比较，Ｐ＜０．００１），　至试验４５　ｄ时多两他赛脂质体１０和２０　ｍｇ·ｋｇ’。剂　量下的相对肿瘤体积抑制率分别为８７．７５％和　９６．３９％；多西他赛注射液ｌＯ和２０　ｍｇ·ｋｇ　剂虽下　相对肿瘤体积抑制率分别为８９．４４％和９７．８４％。　相同剂量下，２种剂型在相同时间点对相对肿瘤体　积的影响无显著性差异。　１６　２０　２４　２６　２９　３２　３６　４ｌ　４５　Ｓｌ　５４　６３　接瘤后时问／ｄ　图２　多西他赛脂质体人结肠癌ＨＴ一２９　裸鼠移植模型的生长抑制作用　从动物体重变化情况来看，２种剂型、２个剂量　下ｄ　１６，ｄ　２．０和ｄ　２４　３次给药后动物体重均明显下　降，ｄ　３２后４组动物体重均开始恢复。试输终点时，　相同剂量多西他赛脂质体与注射液比较，动物体重　无统计学显著性差异。　长　１６　２０　２４　２６　２９　３２　３６　４１　４５　５１　５４　６３　接瘤后时间／ｄ　图３　多西他赛脂质体对荷瘤小鼠体重的影响　讨　论　多西他赛不溶于水，难以包入脂质体内部，目前　国内外研究者均采用包入脂质体双分子层内的方式　制备多西他赛脂质体。笔者在实验过程中发现，脂　质体膜材的选择非常蕈要，本实验空筛选了多种磷　脂，结果发现采用相变温度低、流动性好的天然磷脂　２８　中国新药杂志２０ｌ１年第２０卷第１期　容易做出稳定的脂质体制剂。本文制备的多西他赛　脂质体外观性状较好，包封率较高，粒径较小且分布　均匀，体外释药缓慢，无突释效应，且稳定性良好。　从大鼠毒性试验结果来看，与普通的多西他赛　注射液相比，今文所制备的脂质体降低了多西他赛　对大鼠的骨髓抑制作用。分析原因，很可能是脂质　体制剂改变了药物的体内分布，这需要开展进一步　的药动学试验进行验证。另外，本实验室还以昆明　小鼠和食蟹猴作为实验动物，分别对多西他赛脂质　体的急性毒性和血液学毒性进行了评价。结果表明　多西他赛脂质体在小鼠体内的最大耐受量得到提　高，对食蟹猴的血液学毒性及胃肠道毒性均降低　（相关数据待发表）。　从抑瘤效果来看，本文制备的多西他赛脂质体　对ＨＴ一２９移植瘤的抑制作用与普通多西他赛注射　液相同。同时，本实验室还采用人卵巢癌ＳＫＯＶ一３　裸鼠移植瘤对多西他赛脂质体的抑瘤效果进行了评　价，结果也同样表明多西他赛脂质体的抑瘤率与普　通注射液相同。这说明多两他赛做成脂质体制剂　后，抑瘤效果没有发生改变。　虽然本文制备的多西他赛脂质体体外稳定性较　好，但由于天然磷脂相变温度低，进入体内后药物可　能较快释放入血，从而导致肿瘤部位的被动靶向性　降低，这也是无法提高疗效的原因之　。目前，本实　验室正任通过进一步的体内外试验筛选相变温度　～一ｍ　～一加ｃ芑　高、释放慢、靶向性高的多西他赛脂质体制剂，以期　在降低药物毒副作用的基础上进一步提高脂质体制　剂对肿瘤的抑制作用。　［　参　考　文　献　］　编辑：罗娟／接受日期：２０１０—０６—２３　～一