CHO-K1悬浮细胞的驯化

CHO-K1悬浮细胞的驯化

CHO-K1悬浮细胞的驯化

1 5%FBS的培养基（14326）培养正常的CHO-K1。

2 当细胞汇合度达到80%-90%时，PBS洗涤，胰酶消化，2%FBS的培养基（14326）终止。计数并离心。

3 2%FBS的培养基（14326）重悬细胞，以1×105个细胞/毫升的密度接种细胞。

4 当细胞的汇合度达到80%-90%，保留培养基中悬浮的细胞，观察悬浮细胞的活力，如果悬浮细胞无活力，丢弃。如果有活力，保留并与胰酶消化的贴壁细胞混合。

5 消化按照步骤2进行，1%FBS的培养基（14326）终止。计数并离心。

6 1%FBS的培养基（14326）重悬细胞，以2×105个细胞/毫升的密度接种细胞。

7 每天观察细胞，并用手掌轻拍细胞瓶让细胞悬浮，重放回培养箱直到细胞的汇合度达到80%-90%（约4-5天）

8 一旦细胞汇合，保留悬浮的细胞并用手掌轻拍细胞瓶，避免气泡产生。用吸管吹落瓶壁上的细胞，同时将细胞吹散。细胞计数并离心。

9 无FBS的培养基（14326）重悬细胞，以8×105个细胞/毫升的密度接种细胞培养。

直到细胞的密度达到1.5-2×106个细胞/毫升（约3-4天）。

10 吹散细胞，计数并离心。

11无FBS的培养基（14326）重悬细胞，以8×105个细胞/毫升的密度接种细胞。直到细胞的密度达到1.5-2×106个细胞/毫升。注意细胞聚团的大小（每团细胞的个数）。

12 反复重复步骤9-11

13 以6×105个细胞/毫升的密度接种细胞，60rpm转速培养。

14 培养方法建立之后，可以进行转瓶的扩大培养。

15 按照规程和密度，可以对悬浮细胞进行规模化的培养。

备注：如果细胞聚团严重，可让大团的细胞沉到细胞瓶底部。吸取单个细胞进行培养。确定总细胞数量和单个悬浮细胞的数量，以安排合理的接种密度。