使用EDC&NHS两步法的羧基磁珠与抗体交联流程
1. 抗体缓冲液置换并调整浓度
1) 将抗体缓冲液置换为15mM MES 6.0； 2) 将抗体浓度调整至2 mg/mL。 2. 磁珠活化
1) 取10mg磁珠，使用15mM MES 6.0清洗3次，将磁珠复悬于0.1mL的15mM MES 6.0至
磁珠浓度为~100mg/mL；
2) 称取EDC& Sulfo-NHS并溶解于15mM MES 6.0中：EDC浓度为20mg/mL；Sulfo-NHS浓
度为24mg/ml；取50μL EDC， 50 μL Sulfo-NHS加入到清洗后的磁珠中；立即混匀，磁珠浓度~50 mg/mL；
3) 25℃混匀状态下活化30min。 3. 磁珠与抗体交联
1) 活化好的磁珠去上清液，加入冷的15mM MES 6.0 1mL进行清洗，共清洗2次； 2) 取调整浓度后的抗体200 μL(浓度为2mg/mL)加入到活化好的磁珠中，立即混匀； 3) 25℃混匀条件下，反应12-18小时。 4. 交联后封闭及保存
1) 反应结束后，磁珠去上清，加入缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20至磁珠浓度为10mg/mL
进行清洗，重复清洗2次；加入缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20+0.1%BSA+0.01%Casein至磁珠浓度为10mg/mL，室温条件下混匀反应30min；
2) 将磁珠去上清，并复悬于缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20+0.1%BSA中，终浓度为10
mg/mL。交联完成。
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