金线莲组织培养快速繁殖方法探究

泉州师范学院学年论文

题目： 金线莲组织培养快速繁殖方法探究

学生姓名

学 号 专业班级

指导教师

院 （系） 化学与生命科学学院

时间：2012.06.03

摘要：

以福建和台湾2种金线莲的无菌幼苗带腋芽的幼嫩茎段为外植体，建立完整，有效，廉价的植物组织培养体系。

不同的激素浓度配比的培养基对金线莲的分化、生根有显著影响。基于金线莲离体外殖段在不同激素不同浓度下的分化和生根，进行多梯度的分类培养，以此探究其最适的激素浓度，通过对组培过程的详细记录，分析组培过程中可能遇到的难题和意外。

通过对金线莲（台湾和福建品种）植物组培快速繁殖方法的探究，尝试筛选出适宜的

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培养基，并寻求一条完整、有效、廉价、环保的规模化生产途径。

关键词： 金线莲 培养基 快速繁殖 植物组织培养

目录

中文摘要及关键词................................................2

目录............................................................3

引言............................................................4

1、金线莲概况...................................................4

2、金线莲组培研究现状...........................................5

① 植物激素的影响...........................................5

② 光强、温度的影响.........................................6

3、组培方法探究.................................................6

① 实验材料.................................................7

② 无菌苗的获得.............................................7

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③ 培养基选择和制备.........................................7

④ 实验观察和记录...........................................7

4、参考文献......................................................8

引言

20世纪后半叶，植物组培技术快速发展和日渐成熟，利用植物组培快速繁殖技术，不仅可以获得人类需要的多种植物代谢物，还可以对资源稀少的植物进行快速繁殖。金线莲是福建省和台湾等地极其珍贵的稀少中草药，具有显著的清热解毒、祛风湿、凉血平肝等功效，由于金线莲生产地的森林植被、水土资源的不同程度的破坏，其野生资源锐减，濒临灭绝。由于金线莲本身具有的广泛应用，人们对金线莲的研究报道也很多，基于前人研究的基础上，对金线莲组织培养快速繁殖方法进行积极的探究和实验，旨在探索一套完整、高效、环保、低成本的工业化生产工艺。

一、金线莲概况：

金线莲（Anoectochilus roxburghii）,兰科开唇兰属，为多年生草本植物，主要分布在浙江、福建、台湾等和东南亚地区，金线莲属阴性植物，性喜温凉潮湿环境，常生长在人迹稀少的亚热带常绿阔叶林、遮荫且潮湿的腐殖土上，其分布较为广泛，种内差异大[1]。

金线莲种子微小、发芽率极低且对其生长的生态环境要求非常严格，其自然萌发率和繁殖率极低并生长速度缓慢，所以野生的金线莲资源稀少，伴随着鸟兽和人为的采摘及多

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年来的环境破坏和水土资源的流失，使得其野生资源日渐枯竭[2]。

金线莲是珍贵的中草药材，别名金蚕、金石松等，在民间有“药王”、“金草”、“神药”、“乌人参”等美称，对糖尿病、风湿性关节炎、肿瘤等病症具有很好的疗效，其含有的氨基酸组分，含量及抗衰老火星微量元素的含量均高于野生西洋参[3]；除了药用，金线莲还是有名的花叶观赏类珍品，具有很高的观赏价值，其株型小巧、叶脉金黄呈网状，叶背淡紫色。因此，金线莲具有广阔的开发和利用前景。

在日本和台湾等地已有较为成熟的提取金线莲药用多糖的技术，每年金线莲消耗的鲜草数量极为庞大，需求量的增加，野生金线莲资源日益减少，其市场开发前景极为广阔，相应的植物组培快速繁殖技术的成熟和应用，以金线莲为原料进行快速繁殖，既可以满足市场的需求，也可以避免野生资源的灭绝。

二、金线莲组培研究现状

（一）植物激素的影响

林俊芳等人的研究结果显示，不同浓度激素的组合对金线莲茎段愈伤组织分化丛芽的影响不同，其中以6-BA 0.12mg/L 、萘乙酸0.5mg/L、激动素（KT）0.18mg/L 组合为最佳，丛芽分化比率高达100%[4]。而郑为鹏研究表明金线莲外植体接种在MS培养基附加激素6-BA 3-4mg/L、ZT(玉米素)0.3-0.4mg/L适合金线莲茎尖的诱导，诱导率达69%[5]。而刘伟等人对金线莲组培增殖培养基的筛选研究表明增殖最佳培养基配方为:MS+琼脂7g/L+蔗糖25g/L+NAA0.2mg/L+6-BA 2mg/L。在添加6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L

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的MS培养基中，增殖株数较高。壮苗培养基配方为：MS+琼脂7g/L+蔗糖25g/L+蛋白胨2g/L+花宝1号3g/L+香蕉100g/L+活性炭1g/L。或1/2 MS+琼脂7g/L+蔗糖25g/L+蛋白胨2g/L+香蕉100g/L+活性炭1g/L[6]。

（二）光强、温度的影响

吴坤林报道了光照强度对金线莲组培过程的组培苗的发育影响，在低光强下组培苗呈徒长、纤弱，在2000-3000Lx的光强下，组培苗生长旺盛，叶面积和茎径适中，符合商品化的质量标准，当光强大于4000Lx时，生长伸长受限制，苗矮壮，叶片较大[7]。金线莲组培茎段愈伤组织诱导分化丛芽的适宜温度为培养室温度25+-1℃。

三、组培方法探究

（一）实验材料

福建品种金线莲、台湾品种金线莲。

（二）无菌苗的获得

选取生长健壮且无病虫害的金线莲幼苗在实验室内用解剖刀去除须根后，放入低浓度的洗衣粉水中漂洗3-5min，后用清水洗净并即使放入VC液中浸泡10min，转移至接种室，在超净工作台上用75%酒精灭菌30-50s后,用HgCl2灭菌9-10min，最后用无菌水冲洗7-8次，用滤纸吸干消毒好的材料，，切取1-2节带腋芽的茎段，约1-2cm，外植体制备好后，接种在配置好的培养基上，暗培养2-3天后，转移至光照培养室，光强为1500-2000Lx,每日光照12h，培养室温度25+-1℃。每5天一个周期观察一次幼苗生长

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情况并记录现象。（三）培养基选择和制备

诱导培养基：以MS为基本培养基，附加6-BA 0.12mg/L 、萘乙酸0.5mg/L、激动素（KT）0.18mg/L 为1-5编号；附加激素6-BA 3-4mg/L、ZT(玉米素)0.3-0.4mg/L为6-10编号，调整PH为5.5-5.8范围。

继代培养基：以MS+琼脂7g/L+蔗糖25g/L+NAA0.2mg/L+6-BA 2mg/L为配方，编号11-15号，调整PH为5.5-5.8范围。

（四）实验观察和记录

1.外植体分化腋芽观察：记载分化期和生长情况。

2.继代观察：分化芽再生芽苗生长，观察芽数、株高、节数。

3.生根观察：丛芽诱导生根，观察生根日期、根系数、和着生

部位。

参考文献

[1]福建省中医药研究院 福建药物志[M] 第二册 福州：福建科技出版社

[2]蔡文燕，肖华山，等.金线莲研究进展[J].亚热带植物科学，2003，32（3）：68-72

[3]赵元藩.金线莲的开发利用价值及林下栽培技术初步研究[J].2008，33（03）

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[4]林俊芳，等.珍稀中草药金线莲快繁研究初报[J].中国中药杂志，1993，18（12）：721

[5]郑为鹏.金线莲组培与移栽技术的研究[J].福建林学院学报，1995.15（4）：337-341

[6]刘伟，王牛柱.金线莲组培增殖培养基筛选[J].安徽农业科学，2009，37（04）：1475-1476

[7]吴坤林.金线莲快繁及工厂化式生产中间试验，中药材，1997，20（12）：595

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