茜素红染色试剂盒(成骨检测,pH8

说明书修订日期：2015.01.01Catnumber：KGA363Storeat2-8℃forfor3monthsForResearchUseOnly一、产品说明茜素红S是一种蒽醌衍生物：9,10-二氢-3,4-二羟基-9,10-二氧代-2-蒽磺酸单钠盐，又称媒介红3（MordantRed3）或茜素磺酸钠。其分子式为C14H7NaO7S，分子量为342.25。茜素红和钙离子以鳌和方式形成复合物，用以识别组织细胞的钙盐成分。钙盐变化是骨细胞增殖分化和骨组织成骨潜能的标志之一。通过茜红素染色，产生桔红色沉积，但会受到其它金属元素的干扰。本产品pH8.3主要适用于动物原生代或培养细胞的钙沉积和钙化结节检测。广泛用于骨细胞或组织病理生理的研究。二、试剂组成组份名称KGA36310mL茜素红S染色液注意：以6孔板为例，每孔孵育的染色工作液为500μL，本试剂盒可以做20tests；以普通切片和96孔细胞为例，每张玻片孵育的染色工作液为100μL，本试剂盒可以做100tests。10mL2-8℃，避光储存条件三、自备材料显微镜、载玻片、盖玻片、无水酒精、二甲苯、中性树胶、亮绿复染液、70%乙醇固定液（不含钙）四、样本处理1、6孔板培养细胞爬片：去除培养基，1×PBS（pH7.2，不含钙镁）洗涤细胞爬片2次，70%乙醇室温固定细胞60min，去除固定液，1×PBS（pH7.2，不含钙镁）洗涤细胞爬片2次后待用。（注意：本步骤的固定液也可用4%多聚甲醛来替代，室温15-30min。）2、冰冻切片：冰冻切片，室温平衡，1×PBS（pH7.2，不含钙镁）洗涤2次，待用。100%甲醇固定1-2分钟。3、石蜡切片：①脱蜡：二甲苯中脱蜡5-10分钟。再换用新鲜的二甲苯，脱蜡5-10分钟。②梯度入水：95%、70%、30%乙醇各2分钟，蒸馏水2分钟。五、染色1、茜素红S染色①以茜素红染色液覆盖样本，37℃避光孵育至少60分钟。（如果颜色偏淡，可以适当延长时间。）②取出染色玻片，双蒸水缓慢冲洗玻片3-5分钟。（注意：细胞爬片样本建议多用1×PBS，pH7.2，不含钙镁洗涤5次，每次2min，直接显微镜拍照观察。）2、亮绿染色（组织样本可选步骤）滴加1-2滴亮绿染色液覆盖样本，染色20-30S。3、分化透明处理（组织样本可选步骤）①盐酸-酒精分化液每片100μL覆盖样本10S后去除。②无水酒精脱水，二甲苯透明。③封片剂封片后，显微镜观察，拍照。六、染色结果钙沉积阳性细胞呈现桔红色；胞浆及胶原纤维呈现绿色（可选）。