一、土壤采选
选取校园的大花坛（土壤较肥沃）土样若干，去掉表层5~10cm的土壤后取样，通过筛子进行初步的筛选，得到较细致的土壤。
二、细菌的分离
配置生理盐水，并在灭菌箱中灭菌，取30ml放入100ml三角瓶中，加入土壤，常压加热至水温80℃后维持20min，取出，置28-37摄氏度培养24-48h，液面则产生黄白色皮膜。
用接种环取皮膜适量于无菌水中分散，稀释涂布于蔗糖豆芽汁琼脂平皿，置28-37摄氏度培养24-48h，挑取典型菌落。
三、对分离出的细菌菌落革兰氏染色镜检。
是先用龙胆紫来染细菌，所有细菌都染成了紫色，然后再涂以革兰氏碘液，来加强染料与菌体的结合，再用95％的酒精来脱色20～30秒钟，有些细菌不被脱色，仍保留紫色，有些细菌被脱色变成无色，最后再用番红或沙黄复染1分钟，结果已被脱色的细菌被染成红色，未脱色的细菌仍然保持紫色，不再着色，取被染成紫色的细菌即为革兰氏阳性菌，而枯草芽孢杆菌菌即为革兰氏阳性菌。
四、进行革兰氏阳性菌的纯培养。
枯草芽孢杆菌的常见培养基成分：1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂。不断挑取单个菌落进行划线及保存，直到得到纯净的单一菌落。
五、细菌的鉴定 1、形态鉴定：
无荚膜，周生鞭毛，能运动。芽孢0.6-0.9×1.0-1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
2、生化鉴定：
①葡萄糖产气实验：取某一细菌的24h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖微量生化反应管内，37C培养24h，观察结果并记录。若细菌分解糖则产酸或产酸或产气，使培养基颜色改变，从而判断细菌是否分解某种糖或其他碳水化合物。
②硫化氢：取一种细菌纯培养物，接种于H2S微量发酵管中，置于37C培养24h后，观察结果。培养液呈黑色者为阳性，以“+”表示，无色者为阴性，以“-”表示。
③枸橼酸盐试验：取纯培养细菌接种于西蒙氏枸橼微量生化反应管内，置于37C培养48-72h，培养基由草绿色变为深蓝色为阳性，否则为阴性。肠杆菌、酸
杆菌和一些沙门氏菌种产生阳性反应，可见菌体生长良好或培养基显为深蓝色。
④吲哚试验：将一小指大的脱脂棉，滴上两滴Ehrlich氏试剂，再在同一处加滴两滴高硫酸钾（K2S2O8）饱和水溶液，置于含培养液的被检试管中，离液面约1.5cm，将被检试管放入烧杯或搪瓷缸水浴煮沸为止，脱脂棉上出现红色者为阳性。否则为阴性如大肠杆菌等能分解蛋白质中的色氨酸产生吲哚，吲哚与对二氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而成红色。
3.16S RNA特异引物PCR扩增鉴定枯草芽孢杆菌
①模板DNA的提取：用苯酚氯仿抽提法提取。 ②配置PCR反应液：SORRY,不知道
③琼脂糖凝胶电泳：用1%的琼脂糖凝胶进行电泳。
④PCR产物的回收及DNA测序：使用切胶回收试剂盒回收纯化PCR扩增产物，然后进行DNA测序。
⑤菌种鉴定：将DNA测序结果与已知数据库对比，确定菌种种类。
备注：
(*^__^*) 嘻嘻„„，我就能写出这点儿了，你们再补充啊，就靠你们了，加油！
改完了，咱们再商量啊！
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