循环肿瘤细胞及循环核酸检测在胃癌中的研究进展

第４２卷第５期　兰州大学学报（医学版）　Ｖｂ１．４２　ＮＯ．５　２０１６年ｌＯ月　Ｊｏｕｍａｌ　ｏｆ　Ｌａｎｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）　０ｃｔ．２０１６　文章编号：１０００—２８１２（２０１６）０５—００４８—０７　循环肿瘤细胞及循环核酸检测在胃癌中的研究进展　冯彦虎　，陈　昊　，李玉民　，　１．兰州大学第二临床医学院，甘肃兰州７３００３０　２．兰州大学第二医院消化道肿瘤研究所，甘肃兰州７３００３０　３．兰州大学第二医院甘肃省消化系肿瘤重点实验室，甘肃兰州７３００３０　摘要：胃癌是中国乃至全球发病率、死亡率最高的恶性肿瘤之一，５年生存率仅１０％，其发生和侵袭涉及一系列多基因　参与、多步骤协同的复杂过程。近１０年来，血液循环肿瘤细胞（ＣＴＣ）及循环核酸（ＣＮＡｓ）检测因其具有无创、实时　检测和有别于影像学检查结果等优点，受到了肿瘤学界的广泛关注，被称为“液体活检”。ＣＴＣ和ＣＮＡｓ分别在肿瘤基　础研究、临床疗效评价和判断预后及肿瘤的早期诊断等方面具有重要意义。开展ＣＴＣ和ＣＮＡｓ的研究将有助于开展胃癌　的早期诊断、评价手术及化疗的治疗效果、早期发现远处转移和判断预后。　关键词：胃癌；循环肿瘤细胞；循环核酸　中图分类号：Ｒ７３５．２　文献标识码：Ａ　ｄｏｉ：１０．１３８８５￣．ｉｓｓｎ．１０００－２８１２．２０１６．０５．０１０　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄｓ　ｉｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　Ｆｅｎｇ　Ｙａｎ．ｈｕ　．Ｃｈｅｎ　Ｈａｏ　．Ｌｉ　Ｙｕ—ｍｉｎ　，　，　１．Ｓｅｃｏｎｄ　Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｌａｎｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ　７３００３０，Ｃｈｉｎａ　２．Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｓｃｈｏｏｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｌａｎｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｙｔ，Ｌａｎｚｈｏｕ　７３００３０，Ｃｈｉｎａ　３．Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　ｏｆ　Ｇａｎｓｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｓｅｃｏｎｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｌａｎｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｙｔ，Ｌａｎｚｈｏｕ　７３００３０，　Ｃｈｉｎａ　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　１Ｓ　ｏｎｅ　ｏｆ　ｍａｌｉｇｎａｎｔ　ｔｕｍｏｒｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｓｔ　ｍｏｒｂｉｄｉｙｔ　ａｎｄ　ｍｏｒｔａｌｉｙｔ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｗｏｒｌｄ　ａｎｄ　Ｃｈｉｎａ．ａｎｄ　ｔｈｅ　５一ｙｅａｒ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｉｓ　ｏｎｌｙ　１　０％．Ｉｔｓ　ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎｖａｓｉｏｎ　ｃｏｖｅｒ　ａ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｇｅｎｅｓ　ｗｈｉｃｈ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｃｏｍｐｌｅｘ，ｍｕｌｔｉ—ｓｔｅｐ　ｓｙｎｅｒｇｙ　ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｏｖｅｒ　ｔｈｅ　ｐａｓｔ　１　０　ｙｅａｒｓ，ｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ（ＣＴＣ）ａｎｄ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄｓ（ＣＮＡｓ），ｂｅｃａｕｓｅ　ｏｆ　ｉｔｓ　ｎｏｎ－ｉｎｖａｓｉｖｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｔｈｅ　ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ　ａｄｖａｎｔａｇｅｓ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｉｍａｇｉｎｇ　ｒｅｓｕｌｔｓ，ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｗｉｄｅｓｐｒｅａｄ　ｃｏｎｃｅｍ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｏｎｃｏｌｏｇｙ　ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ，ｋｎｏｗｎ　ａｓ“ｌｉｑｕｉｄ　ｂｉｏｐｓｙ”．Ａ　ｗｅａｌｔｈ　ｏｆ　ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｏｔｅｎｔｉａ１　ｖａｌｕｅ　ｏｆ　ＣＴＣ　ａｎｄ　ＣＮＡｓ　ｆｏｒ　ｃａｎｃｅｒ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｆｉｆｃａｃｙ　ｏｆ　ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　ｔｈｅｒａｐｉｅｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ　ｈａｓ　ｅｍｅｒｇｅｄ．　ＣＴＣ　ａｎｄ　ＣＮＡｓ　ｈａｖｅ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂａｓａ１　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｕｔｍｏｒ，ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｅｆｆｅｃｔ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ．ｐｒｏｇｎｏ—　ｓｉｓ　ｊｕｄｇｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｅａｒｌｙ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｕｔｍｏｒ．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ＣＴＣ　ａｎｄ　ＣＮＡｓ　ｗｉｌｌ　ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ　ｔｏ　ｅａｒｌｙ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｇａｓ—　ｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ，ｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓｕｒｇｅｒｙ　ａｎｄ　ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，ｅａｒｌｙ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｓｔａｎｔ　ｍｅ—　ｔａｓｔａｓｉｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ　ｊｕｄｅｇｍｅｎｔ．　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｇａｓ￣ｉｃ　ｃａｎｃｅｒ；ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌ；ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　收稿日期：２０１６—０６—１５　基金项目：中央高校基本科研业务费专项资金资助项目（８６１１７２）　作者简介：冯彦虎（１９７２－），男，甘肃靖远人，副主任医师，博士研究生，研究方向为消化道肿瘤、消化内镜及肝病，　ｅ—ｍａｉｌ：ｄｏｃｆ０１＠１６３．ｃｏｍ；　李玉民（１９６２一），男，甘肃民勤人，主任医师，教授，博士研究生导师，研究方向为消化道肿瘤、肝胆胰外科及微创外科　ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉｙｍ＠ｌｚｕ．ｅｄｕ．ｃａ，通信联系人　第５期　冯彦虎，等：循环肿瘤细胞及循环核酸检测在胃癌中的研究进展　４９　胃癌起源于胃壁最表层的黏膜上皮细胞，是　会因为坏死和凋亡向外周血释放核酸，形成循环　常见恶性肿瘤之一。全球每年新发胃癌１００余万　游离肿瘤细胞核酸。最早关于ＣＮＡｓ的报道是在　例，死亡约８０余万例，全球肿瘤死亡例数排名第　１９４８年，当时并没有引起人们的关注，直到１９９４　三，５年生存率为１０％左右，严重威胁着人类的　年Ｓｏｒｅｎｓｏｎ从肿瘤患者外周血中检测到突变的　生命健康ｒ－　。近年来，检测手段和治疗方法上的进　ＲＡＳ基因片段，ＣＮＡｓ才作为肿瘤标志物受到重　步使胃癌患者的临床治疗效果有所改善，但其确　视。肿瘤发生发展的早期阶段即有核酸释放人　诊太晚、极高的转移率和复发率仍是临床需要解　血，这些游离核酸被认为携带了肿瘤组织遗传学　决的主要问题。有研究表明，在肿瘤形成的早期　阶段即可释放肿瘤细胞和核酸至外周血，形成循　环肿瘤细胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｕｒ　ｃｅｌｌ，ＣＴＣ）及循　环核酸（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄｓ，ＣＮＡｓ），为进　一步深人研究胃癌的早期诊断、疗效观察及转移　复发预测等提供了新的平台　。　１　ＣＴＣ及ＣＮＡｓ　ＣＴＣ是指自发或因诊疗操作进入外周血循环　的肿瘤细胞。研究表明，肿瘤细胞在淋巴结、外　周血、骨髓等中的微转移可能是恶性肿瘤转移和　复发的基础，存在于原发瘤和转移瘤之外的ＣＴＣ　在此过程中起到了关键的作用。ｌ８９６年，澳大利　亚学者Ａｓｈｗｏｒｔｈ首次提出ＣＴＣ的概念口】。目前，　ＣＴＣ已成为临床研究的热点之一，ＣＴＣ在前列腺　癌、乳腺癌、肺癌、结直肠癌术后远处转移和复　发中的作用屡屡被报道，在胃癌转移复发的早期　诊断和个体化治疗中的作用也日益受到国内外学　者的关注　］。　血液中的ＣＮＡｓ包括ＤＮＡ、ｍＲＮＡ和非编码　ＲＮＡ（ｎｏｎ．ｃｏｄｉｎｇ　ＲＮＡ，ｎｃＲＮＡ）等。ｎｃＲＮＡ是　一类除ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ和ｒＲＮＡ以外不编码蛋白质　却能发挥功能的ＲＮＡ分子，包括微小ＲＮＡ（ｍｉｃｒｏ　ＲＮＡ，ｍｉＲＮＡ）和长链非编码ＲＮＡ（１ｏｎｇ　ｎｏｎ．　ｃｏｄｉｎｇ　ＲＮＡ，ｌｎｃＲＮＡ）。ｍｉＲＮＡ是一类长度为　１９～２２个核苷酸的内源性ｎｃＲＮＡ。近年来研究表　明，多数ｍｉＲＮＡ基因位于染色体上与肿瘤发生　关联的区域，可以调控重要的肿瘤相关基因的表　达，从而调控肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭或血　管形成等过程。ＩｎｃＲＮＡ是一类长度大于２００个核　苷酸、缺乏蛋白编码能力的ｎｃＲＮＡ，是现今研究　的热点。近年来研究显示，ｍｉＲＮＡ和ＩｎｃＲＮＡ表　达水平的改变与胃癌的发生、发展、诊断、治疗　和预后密切相关。关于ＣＮＡｓ的来源和生物学作　用至今尚无定论。ＣＴＣ及转移灶中的肿瘤细胞也　和表观遗传学的异常改变。随着标志物研究越来　越深入，ＣＮＡｓ作为一种新兴肿瘤标志物日益受　到人们的重视。借助于分子生物学技术从外周血　中提取ＣＮＡｓ进行分析，可以实现对肿瘤的实　时、无创和动态监测，为胃癌的早期诊断、疗效　评估、复发监测及预后判断提供重要信息。外周　血游离ＤＮＡ拷贝数检测、甲基化标志物以及　ｎｃＲＮＡ标志物是肿瘤标志物研究的热点　。　２　ＣＴＣ和胃癌　ＣＴＣ检测技术的优点是血液标本比较容易获　得，缺点是细胞数量稀少，上皮细胞、癌细胞和　血液细胞在细胞大小、质量等物理特性及生物特　征上存在差异。近年来敏感分子技术的发展使得　分离、计数外周血ＣＴＣ成为可能。检测ＣＴＣ的两　个主要步骤是分离富集与分析鉴定。　２．１　ＣＴＣ分离富集技术　膜滤过法：Ｖｏｎａ等“叫建立了膜滤过法用于分　离和计数ＣＴＣ，该方法也称为上皮肿瘤细胞大小　分离法。上皮肿瘤细胞比外周血细胞大，过滤可　使上皮肿瘤细胞得到分离。这种方法简单、经　济。由于是借助细胞的物理特性进行细胞分离，　因此筛选不具特异性，应用受到一定限制。　密度梯度离心法：利用不同种类细胞密度差　异，通过离心使其分层达到提取肿瘤细胞的目　的，是实验室常用的收集肿瘤细胞的方法之一。　该方法同样是借助于细胞的物理特性进行细胞分　离，缺乏特异性，易导致缺乏相应密度的肿瘤细　胞丢失…　。　免疫磁性分选技术：采用纳米微粒制备成免　疫磁珠，磁珠上的特异性抗体与靶细胞上的抗原　结合成靶细胞一抗原抗体一磁珠复合物，其在磁　力作用下发生移动，进而与别的物质分离，达到　分离特异性细胞的目的。　５０　兰州大学学报（医学版）　美国Ｖｅｒｉｄｅｘ公司研发的ＣｅｌｌＳｅａｒｃｈ循环肿瘤　第４２卷　反转录聚合酶链式反应（ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐ．　ｉｏｎ—ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）法：以　细胞检测系统是目前美国食品和药品管理局唯一　ｔ批准的ＣＴＣ检测方法。其基本步骤为：上皮细胞　肿瘤和上皮组织中某种物质的ｍＲＮＡ为标志物检　０　～　黏附因子（ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　ａｄｈｅｓｉｏｎ　ｍｏｌｅｃｕｌｅ，Ｅｐ—　测ＣＴＣ，敏感性和特异性都很高，目前可在１ＣＡＭ）抗体磁珠用于捕获ＣＴＣ，细胞角蛋白　１０　个外周血单个核细胞中检测出单个肿瘤细胞。　（ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ，ＣＫ）荧光抗体识别上皮细胞，　由于肿瘤细胞内一个基因ｍＲＮＡ的拷贝数量在细　ＣＤ４５抗体识别白细胞，４’６．二脒基一２一苯基吲哚　胞周期中是不断变化的，而且还存在去分化现　（ＤＡＰＩ）荧光核染料用于生成细胞图像，计算机　象，使得标准ＰＣＲ的阳性率与实时定量ＰＣＲ检测　将符合肿瘤细胞学形态特征的细胞图像归类为　ＣＴＣ，ＣＫ－ＰＥ　、ＤＡＰＩ　和ＣＤ４５一细胞的图像也归　类为ＣＴＣ。该检测可自动分选从上皮性肿瘤脱落　后进人血液中的肿瘤细胞，只需要７．５　ｍＬ血液样　本，即可从４００多亿血细胞中检测到一个ＣＴＣ。　磁性细胞分选技术的策略包括阳性筛选、阴性筛　选以及两种方法的结合，但此项技术在检测缺乏　细胞表面标志物的非上皮起源实体瘤（如肉瘤）　细胞的应用受到限制，并且在富集过程中可能存　在ＣＴＣ丢失的风险　Ｈ　。　ＣａｎＰａｔｒｏｌＭＴ　ＣＴＣ二代技术：ＣａｎＰａｔｒｏｌＭＴ是基　于免疫去除结合纳米过滤法的第二代ＣＴＣ富集技　术，不需要依靠特异性抗体捕获，对白细胞的去　除效率超过９９．９７％，肿瘤细胞的回收率超过　８０％。较高的回收率和不需依靠表面抗原的分离　方式，保证了在较少的全血样本（５　ｍＬ）中富集　到最全面的ＣＴＣ，保证了富集到最具转移潜能的　间质一上皮转化ＣＴＣ和上皮一间质转化ＣＴＣ。另　外，由于ＣａｎＰａｔｒｏｌＭＴ富集获得的ＣＴＣ结合在滤膜　上，便于保存，亦可灵活地进行免疫荧光、荧光　原位杂交、分子检测等分析，还可以通过显微切　割对单个ＣＴＣ进行全基因组分析　。　２．２分析鉴定技术　免疫细胞化学法：是以显色剂标记的特异性　抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和细胞化　学的呈色反应，对相应抗原进行定位、定性和定　量测定的技术。　流式细胞术：是一项集激光、电子物理、光　电测量、计算机、细胞荧光化学、单克隆抗体技　术为一体的技术，具有准确、快速的优点。但其　检测靶细胞的敏感度较低，通过与其他细胞富集　技术（如磁珠富集）联用可对ＣＴＣ进行特异性富　集，提高测定的敏感性和鉴别力，增加检出率ｕ　。　的标志物水平可能受到影响，增加了区别肿瘤细　胞数量与ｍＲＮＡ表达水平之间变化的难度　。　功能分析法：包括上皮免疫斑点法及胶原黏　附基质测定法。上皮免疫斑点法是基于酶联免疫　吸附分析原理的功能性细胞培养测定方法，对细　胞４８　ｈ短期培养后通过检测特异性标记蛋白（如　ＣＫ、前列腺特异抗原、甲胎蛋白等）的分泌计数　ＣＴＣ。胶原黏附基质测定法是根据ＣＴＣ摄取和侵　入结缔组织的能力分离侵袭性的ＣＴＣ。这些检测　方法能检测到更具转移潜能的ＣＴＣ，比发现凋亡　细胞更具意义，其敏感性和特异性均较高，有利　于药物开发　绷。　ＣＴＣ检测芯片：ＣＴＣ检测芯片技术是近年来　发展起来的一种新技术，具有较高的敏感性，同　时可以较好地保留ＣＴＣ的体外活性。在一个标准　载玻片上分布有大约７８　０００个涂布ＥｐＣＡＭ抗体　的微阵列柱，经过乙二胺四乙酸处理过的外周血　样品通过摇动装置混匀后被气压泵输入芯片，使　其在经过芯片表面和微阵列柱之间时最大程度地　捕捉肿瘤细胞。在通过抗ＣＫ、ＣＤ４５抗体和ＤＡＰＩ　免疫荧光标记后，只有ＣＫ　、ＣＤ４５一和ＤＡＰＩ　细　胞才被认为是ＣＴＣ，可对其进行原位定性及定量　检测。尽管ＣＴＣ检测芯片与ＣｅｌｌＳｅａｒｃｈ循环肿瘤　细胞检测系统相比其敏感性相对较高，但目前主　要用途是用于研究，还没有相关可靠实验证实其　有临床意义。最近有一种更精练的方法称为ｖ型　芯片，提供了一个更强的ＣＴＣ分离平台。ｖ型芯　片基于ＣＴＣ芯片技术，将微流体装置平坦的上部　更改为Ｖ型，打破细胞的层流状态，增加其微小　的涡流，进而增加其与涂布有ＥｐＣＡＭ抗体的微　阵列柱接触的机会，提高检出效率　”。　２．３　ＣＴＣ和胃癌　Ｏｋａｂｅ等口　报道１３６例进展期胃癌患者应用　第５期　冯彦虎，等：循环肿瘤细胞及循环核酸检测在胃癌中的研究进展　５ｌ　ＣｅＵＳｅａｒｃｈ循环肿瘤细胞检测系统检测ＣＴＣ，对　分析。目前提取和利用外周血ＣＮＡｓ的方法主要　其中１２３人同时进行腹水脱落细胞学检测，以腹　有酚氯仿法、碘化钠法、微柱吸附法和磁珠吸附　水脱落细胞学检测结果作为预测患者无进展生存　法。前３种方法有专用的ＤＮＡ和ＲＮＡ试剂盒，　期的指标。研究结果显示，ＣＴＣ阳性患者２５例　操作简单，磁珠吸附法采用磁场分离原理，易获　（１８．４％），均为弥漫型胃癌和远处转移患者，无　得高纯度的ＣＮＡｓ，在小片段游离核酸提取上占　进展生存期明显短于ＣＴＣ阴性患者，差异具有统　优势［２８～９Ｊ。　计学意义。多变量分析显示，通过积极治疗的患　有关外周血ＣＮＡｓ检测方法的研究近年来取　者，如果ＣＴＣ和腹水脱落细胞同时转阴，患者将　获得较长的无进展生存期。因此ＣＴＣ可作为预后　因子和疗效判定指标。　除了ＣＴＣ计数以外，ＣＴＣ的分子改变引起了　研究者的极大兴趣。Ｂｅｒｔａｚｚａ等口　研究了７０例胃　癌患者外周血ＣＴＣ中生存素的表达，认为生存　素ｍＲＮＡ状态和肿瘤ＴＮＭ分期一样是无病生存　期的独立预测因素，生存素ｍＲＮＡ高表达预示着　根治性切除术后肿瘤的复发。　王万祥等口　用ＲＴ－ＰＣＲ检测胃癌患者外周血　和肿瘤组织中黑色素瘤抗原基因１（ｍｅｌａｎｏｍａ　ｎａ－　ｔｉｇｅｎ，ＭＡＧＥ．１）ｍＲＮＡ和ＭＡＧＥ．３　ｍＲＮＡ的表　达，４０例患者外周血中ＭＡＧＥ．１　ｍＲＮＡ和　ＭＡＧＥ．３　ｍＲＮＡ的阳性率分别为４７．５％和２５％，　在胃癌组织中ＭＡＧＥ一１　ｍＲＮＡ和ＭＡＧＥ一３　ｍＲＮＡ　的阳性率分别为６２．５％和３０％；在肿瘤组织中不　表达的ＭＡＧＥ　ｍＲＮＡ在外周血中也不表达；２０　例健康者中未检测到ＭＡＧＥ　ｍＲＮＡ的表达，提　示ＭＡＧＥ　ｍＲＮＡ可作为检测循环胃癌细胞的特　异肿瘤标志物。　Ｚｈｏｕ等口　和Ｚｈｅｎｇ等　发现胃癌ＣＴＣ中的　ｍｉＲＮＡ．４２１水平显著高于健康组，ｍｉＲＮＡ．４２１　抑制剂的转染能显著抑制体内的肿瘤生长。研　究组收集了５３例胃癌术前患者和２Ｏ例健康志　愿者外周血，采用ＲＴ－ＰＣＲ检测ｍｉＲＮＡ一２１、　ｍｉＲＮＡ一１０６ａ和ｍｉＲＮＡ一１７表达水平，结果胃癌　患者的ｍｉＲＮＡ水平明显高于对照组，且ｍｉＲＮＡ　表达水平与胃癌ＴＮＭ分期、肿瘤大小、组织学　分类有关联，提示检测外周血中ｍｉＲＮＡ一２１、　ｍｉＲＮＡ一１０６ａ和ｍｉＲＮＡ一１７可能是监测胃癌患者　ＣＴＣ的一种新的工具。　３　ＣＮＡｓ与胃癌　ＣＮＡｓ作为一种新兴肿瘤标志物，可以借助　分子生物学技术从外周血中提取ＣＮＡｓ进行检测　得了较大进展。目前国内外应用最多的定量检测　方法可分为以ＰＣＲ为基础的扩增方法和信号放大　技术检测方法两大类。以ＰＣＲ为基础的扩增方　法，如甲基化特异性ＰＣＲ（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ　ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ＰＣＲ，ＭＳＰ）和实时荧光定量ＰＣＲ（ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ｌｆｕ．　ｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＰＣＲ，ＲＴＦＱ—ＰＣＲ）。ＭＳＰ的　原理是ＤＮＡ在亚硫酸氢盐的作用下，未发生甲基　化的胞嘧啶转变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶则　保持不变。ＲＴＦＱ．ＰＣＲ是目前检测ＣＮＡｓ的主要　方法。在ＲＴＦＱ—ＰＣＲ中引入一种荧光化学物质，　随着ＰＣＲ的进行，反应产物不断累积，荧光信号　强度也等比例增加。与传统ＰＣＲ技术相比，ＲＴ．　ＦＱ．ＰＣＲ具有特异性强、重复性好、定量准确、　污染少、自动化程度高等优点。信号放大技术检　测方法，如支链ＤＮＡ检测技术，与基于ＰＣＲ的　方法相比，该方法通过增加标记探针拷贝数或标　记物的信号强度来提高检测的灵敏度，可用于循　环ＤＮＡ、ＲＮＡ和ｍｉＲＮＡ的定量检测［３０－３４］，以一　次能并行对几十万到几百万条ＤＮＡ分子进行序列　测定和一般读长较短等为标志的高通量测序技术　开创了核酸检测的新时代。Ｎｅｗｍａｎ等［３１Ｊ以高通　量测序技术为基础的癌症个体化深度测序分析方　法、以定制化的ＮｉｍｂｌｅＧｅｎ　ＳｅｑＣａｐ　ＥＺ　Ｃｈｏｉｃｅ　Ｌｉ—　ｂｒａｒｙ作为“筛选器”，对样本进行靶向捕获后再　进行深度测序，其对非小细胞肺癌的循环肿瘤　ＤＮＡ检测结果灵敏度高，特异性强且经济可行。　在胃癌患者血循环ＤＮＡ的研究中，Ｋｏｌｅｓｎ—　ｉｋｏｖａ等【３　通过检测血浆循环ＤＮＡ和细胞表面结　合的ＤＮＡ含量时发现，胃癌患者血浆循环　ＤＮＡ的含量为２０５　ｎｇ／ｎ￣，显著高于健康对照组　（１　０　ｎｇ／ｍＬ）。Ｈａｍａｋａｗａ等　应用标记扩增深度平　行测序的方法定量测定１０例患者手术前后血清中　ＴＰ５３与循环肿瘤ＤＮＡ水平，认为循环肿瘤ＤＮＡ　是检测胃癌进展及术后残留非常有用的标志物。　Ｓａｋａｋｕｒａ等　检测了６５例胃癌患者术前与术后血　５２　兰州大学学报（医学版）　第４２卷　清中ＲＵＮＴ相关转录因子３（Ｒｕｎｔ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐ—　ｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　３。Ｒｕｎｘ３）基因的甲基化水平，发现　４　结语　２９％（１９／６５）的患者术前血清中能够检测到　ＣＴＣ和ＣＮＡｓ检测能实时、动态反映肿瘤特　　Ｒｕｎｘ３甲基化，并且Ｒｕｎｘ３的甲基化系数与肿瘤　征，简单无创，被称为“液体活检”。目前，的级别、组织类型、有无淋巴及浸润转移相关，　ＣＴＣ计数可用于判断预后以及肿瘤复发检测，还　其敏感性较癌胚抗原高，而术后血清中Ｒｕｎｘ３甲　可以指导肿瘤用药，掌握癌症的动态变化，检测　基化水平明显下降。临床队列研究证实，以ＤＮＡ　抗性改变及时调整治疗方案。ＣＴＣ是实体瘤的一　甲基化异常为代表的表观遗传学改变同样可作为肿　部分，得到ＣＴＣ就相当于取得了实体瘤的组织，　瘤标志物用于血循环ＤＮＡ的检测　。环指蛋白　１８０（ｒｉｎｇ　ｉｆｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＮＦｌ８Ｏ）具有抑制细胞　生长和促凋亡作用，启动子区甲基化导致ＲＮＦ１８０　低表达与胃癌不良预后相关。Ｃｈｅｕｎｇ等ｐ　进行的　研究对３２例胃癌患者和６４例正常人外周血进行　ＲＮＦ１８０甲基化检测，其灵敏性和特异性分别为　６３％和９１％，提示ＲＮＦ１８０可作为胃癌诊断的标　志物。　Ｓｏｎｇ等　。　研究证实，与胃癌紧密相关的　ｍｉＲＮＡ有ｍｉＲＮＡ一２１、ｍｉＲＮＡ．６２５、ｍｉＲＮＡ．１、　ｍｉＲＮＡ一２０ａ和ｍｉＲＮＡ．３７８等。外周血循环　ｍｉＲＮＡ在胃癌诊断中的意义也有较多的研究，　ｍｉＲＮＡ一１９９ａ．３ｐ诊断早期胃癌的准确性可达　７５％，敏感性为７６％，特异性为７４％，是理想的肿　瘤标志物。Ｓｏｎｇ等㈣的研究显示，ｍｉＲＮＡ一２２１、　ｍｉＲＮＡ．３７６ｃ和ｍｉＲＮＡ一７４４诊断早期胃癌的敏　感性为８２．４％，特异性为５８．８％，诊断正确率可　达７３．３％。ｍｉＲＮＡ的表达水平与癌细胞分化程　度呈负相关，且随胃癌的进展呈增高趋势，因　而具有一定的风险评估价值和疗效观察价值。　Ｔｓｕｊｉｕｒａ等　发现，胃癌患者外周血与健康对照者　相比，ｍｉＲＮＡｌｅｔ一７ａ明显下调，而ｍｉＲＮＡ．１７—５ｐ、　ｍｉＲＮＡ一１０６ａ、ｍｉＲＮＡ．１０６ｂ及ｍｉＲＮＡ．２１显著　上调；术前上调的ｍｉＲＮＡ在术后明显下降，　ｍｉＲＮＡ在预后判断方面同样具有重要作用。　Ｗａｎｇ等Ｈ　对胃癌患者外周血中表达上调的　ｍｉＲＮＡ－１７—５ｐ和ｍｉＲＮＡ．２０ａ进行了研究，发现术　前ｍｉＲＮＡ．１７　５ｐ、ｍｉＲＮＡ一２０ａ含量与预后不良相　关，其中ｍｉＲＮＡ．２０ａ可作为预后的独立危险因　素。ｌｎｃＲＮＡ基因Ｈ１９由Ｈ１９基因转录，Ａｒｉｔａ　等　发现胃癌患者血浆中Ｈ１９的水平明显比正　常人高，并且在术后显著下降，由此推测其有　可能成为胃癌的肿瘤标志物，这也是目前研究　发现唯一可以在外周血中可检测的ｌｎｃＲＮＡ。　可以对肿瘤组织进行检测，但检测的结果并不代　表全部的肿瘤细胞。ＣＮＡｓ可来自于任何裂解的　肿瘤细胞，能反映肿瘤细胞整体的基因变异信　息。得益于测序成本的下降和大规模平行测序技　术的发展，不必在分子水平去分离ＣＮＡｓ，通过　测序，利用肿瘤细胞基因组的特点，即可从基因　水平获取肿瘤信息从而挑出属于肿瘤细胞的部　分　］。但是，在当前ＣＴＣ和ＣＮＡｓ的研究及临　床实践中仍存在以下问题：（１）由于不同检测方　法的敏感性和特异性的差异未实现标准化，因　此，不同的商业化技术平台或方法用于ＣＴＣ或　ＣＮＡｓ的检测难以对不同研究机构的检测结果进　行比对。（２）标本收集的规范性、外周血的采集　时间、采集后的处理都应满足质量控制的要求。　（３）使用单一上皮分子标志物来检测ＣＴＣ，极有　可能漏检一部分完成上皮一间质转化的ＣＴＣ，让　研究者们对利用ＣｅｌｌＳｅａｒｃｈ循环肿瘤细胞检测系　统计数ＣＴＣ评判转移性肿瘤预后和疗效监测存在　质疑。（４）胃癌是一个高度异质性的细胞群体，　在不同发展阶段，ＣＴＣ和ＣＮＡｓ具有不同的分子　特征，这无疑增加了ＣＴＣ和ＣＮＡｓ用于肿瘤标志　物的临床转化难度　。随着高通量测序平台以及　单细胞基因组扩增技术的进步，ＣＴＣ检测方法正　在向单细胞组学发展。当前虽没有能力检测低浓　度的ＣＮＡｓ，但可以通过采用更加灵敏的检测方　法克服。增加灵敏性的同时也增加了基因杂音的　干扰，且使区分肿瘤相关ＤＮＡ突变和非肿瘤相　关ＤＮＡ突变变得更加困难，从而导致假阳性风　险的增加。因此，ＣＮＡｓ的发展方向就是在高通　量测序的基础上不断提高检测的灵敏度和明确新　的肿瘤通用的分子标志物Ｈ　７］。　最近１０年新兴肿瘤标志物方面的研究呈指数　增长，其中外周血ＤＮＡ甲基化及ｍｉＲＮＡ检测已　逐步应用于肺癌和结肠癌的临床诊断。但迄今为　第５期　冯彦虎，等：循环肿瘤细胞及循环核酸检测在胃癌中的研究进展　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｐａｔｈｏｌ，２０００，１５６（１）：５７－６３．　５３　止尚未见临床上利用胃癌相关基因甲基化状态的　疗来防治胃肠系肿瘤的发生。目前ＣＮＡｓ主要是　在全血中检测，如能在富集分离的ＣＴＣ中检测或　］Ｔａｎ　Ｓ　Ｊ，Ｙｏｂａｓ　Ｌ，Ｌｅｅ　Ｇ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｍｉｃｒｏｄｅｖｉｃｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　改变进行胃癌的早期诊断及干预甲基化的基因治　［１１ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｎｕｍｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｆｒｏｍ　ｂｌｏｏｄ［Ｊ］．　Ｂｉｏｍｅｄ　Ｍｉｃｒｏｄｅｖｉｃｅｓ，２００９，ｌ１（４）：８８３—８９２．　许能有更高的阳性率，也使胃癌的分子特征进一　步明确。希望通过ＣＴＣ计数和ＣＮＡｓ的检测分析　寻找并筛选出一些敏感性和特异性更高的分子指　［１２】Ｇｅｒｔｌｅｒ　Ｒ，Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ　Ｒ，Ｆｕｅｈｒｅｒ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ｕｓｉｎｇ　ａｎ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｄｅｎｓｉ—　ｔｙ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｒｅｃｅｎｔ　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，　２００３，１６２：１４９・１５５．　标，为实现胃癌的早期诊断以及提供良好的靶点　进行个体化治疗，为肿瘤学的临床应用开辟新　领域。　参考文献　［１］Ｔｏｒｒｅ　Ｌ　Ａ，Ｂｒａｙ　Ｓｉｅｇｅｌ　Ｒ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｇｌｏｂａｌ　ｃａｎｃｅｒ　ｓｔａｔｉｓ・　ｔｉｃｓ，２０１２［Ｊ］．ＣＡ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｊ　Ｃｌｉｎ，２０１５，６５（２）：８７—１０８．　［２１　Ａｓｈｗｏｒｔｈ　Ｔ　Ｒ．Ａ　ｃａｓｅ　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ　ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ｃｅｌｌｓ　ｓｉｍｉ－　ｌａｒ　ｔｏ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｕｍｏｕｒｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｅｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ　ａｆｔｅｒ　ｄｅａｔｈ［Ｊ］．Ａｕｓｔ　Ｍｅｄ　Ｊ，１８６９，１４：１４６—１４９．　［３］Ｔｓｕｊｉｕｒａ　Ｍ，Ｉｃｈｉｋａｗａ　Ｄ，Ｋｏｎｉｓｈｉ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｌｉｑｕｉｄ　ｂｉｏｐｓｙ　ｏｆ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ：ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｃｅｌｌ　ｆｒｅｅ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄｓ［Ｊ］．Ｗｏｒｌｄ　Ｊ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１４，２０（１２）：　３２６５－３２８６．　［４１　Ａｌｌａｒｄ　Ｗ　Ｊ，Ｍａｔｅｒａ　Ｊ，Ｍｉｌｌｅｒ　Ｍ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｃｉｒｃｕ－　ｌａｔｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｏｆ　ａｌｌ　ｍａｊｏｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ　ｂｕｔ　ｎｏｔ　ｉｎ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｓｕｂｊｅｃｔｓ　ｏｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｎｏｎｍａｌｉｇｎａｎｔ　ｄｉｓ－　ｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２００４，１０（２０）：６８９７—６９０４．　［５】Ｓａａｄ　Ｆ，Ｐａｎｔｅｌ　Ｋ．Ｔｈｅ　ｃｕｒｒｅｎｔ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｂｏｎｅ　ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ　ｉｎ　ａｄｖａｎｃｅｄ　ｐｒｏｓｔａｔｅ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｆｕｔｕｒｅ　Ｏｎｃｏｌ，２０１２，１３（３）：　３２１．３３１．　［６】Ｆｌｅｉｓｃｈｈａｃｋｅｒ　Ｍ，Ｓｃｈｍｉｄｔ　Ｂ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄｓ　（ＣＮＡｓ）ａｎｄ　ｃａｎｃｅｒ：ａ　ｓｕｒｖｅｙ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ａｃｔａ，　２００７，１７７５（１）：１８１－２３２．　［７】Ｈｕｎｇ　Ｔ，Ｗａｎｇ　Ｌｉｎ　Ｍ　Ｆ’ｅｔ　ａ１．Ｅｘｔｅｎｓｉｖｅ　ａｎｄ　ｃｏｏｒｄｉ—　ｎａｔｅｄ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｏｎｃｏｄｉｎｇ　ＲＮＡｓ　ｗｉｔｈｉｎ　ｃｅｌｌ－ｃｙｃｌｅ　ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｇｅｎｅｔ，２０１１，４３（７）：６２１—６２９．　［８］Ｇｏｒｍａｌｌｙ　Ｅ，Ｃａｂｏｕｘ　Ｅ，Ｖｉｎｅｉｓ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｆｒｅｅ　ＤＮＡ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ　ｏｒ　ｓｅｒｕｍ　ａｓ　ｂｉｏｍａｒｋｅｒ　ｏｆ　ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ：　ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ａｓｐｅｃｔｓ　ｎａｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ［Ｊ］．Ｍｕｔａｔ　Ｒｅｓ，　２００７，６３５（２—３）：１０５－１　１７．　［９］Ｓｏｒｅｎｓｏｎ　Ｇ　Ｄ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｕｔａｔｅｄ　ＫＲＡＳ２　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ａｓ　ｔｕｍｏｒ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ／ｓｅｒｕｍ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｇａｓｔｒｏｉｎ－　ｔｅｓｔｉｎａｌ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２０００，６（６）：２１２９－２１３７．　［１０】Ｖｏｎａ　Ｇ，Ｓａｂｉｌｅ　Ａ，Ｌｏｕｈａ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｓｉｚｅ　ｏｆｅｐ—　ｉｔｈｅｌｉａｌ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ：ａ　ｎｅｗ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｏｍｏｒ－　ｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　［１３］Ｍｏｃｅｌｌｉｎ　Ｓ，Ｋｅｉｌｈｏｌｚ　Ｕ，Ｒｏｓｓｉ　Ｃ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ：ｔｈｅ‘ｌｅｕｋｅｍｉｃ　ｐｈａｓｅ’ｏｆ　ｓｏｌｉｄ　ｃａｎｃｅｒｓ［Ｊ］＿　Ｔｒｅｎｄｓ　Ｍｏｌ　Ｍｅｄ，２００６，１２（３）：１３０－１３９．　［１４］Ｍｓａｏｕｅｌ　Ｐ，Ｋｏｕｔｓｉｌｉｅｒｉｓ　Ｍ．Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｖａｌｕｅ　ｏｆｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｕｔｍｏｒ　ｃｅｌｌ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｂｌａｄｄｅｒ　ｎａｄ　ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃａｎｃｅｒ：ｓｙｓ—　ｔｅｍａｔｉｃ　ｒｅｖｉｅｗ　ｎａｄ　ｍｅｔａ－ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．ＢＭＣ　Ｃａｎｃｅｒ，２０１１，　ｌ１：３３６．　［１５］Ｈｏｆｍａｎ　Ｉｌｉｅ　Ｍ　Ｉ，Ｌｏｎｇ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ａｓ　ａ　ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ　ｆａｃｔｏｒ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｕｒｇｅｒｙ　ｆｏｒ　ｎｏｎ・－ｓｍａｌｌ・－ｃｅｌｌ　ｌｕｎｇ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｃｏｍ・－　ｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｆｉｆｃａｃｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＣｅｌｌＳｅａｒｃｈ　Ａｓｓａｙ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｓｉｚｅ　ｏｆ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌ　ｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ，２０１１，１２９（７）：１６５１－１６６０　【１６】Ｗ＿ｕ　Ｓ　Ｌｉｕ　Ｚ　Ｍ，Ｌｉｕ　Ｓ　ｅｔ　ａ１．Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｅｎｕｍｅｒａ－　ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ｅｆｉｆｃｉｅｎｔ　ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｃｌｎｉ　Ｃｈｅｍ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，２０１３，５２（２）：　２４３．２５１．　【１７】Ｍｏｏｎ　Ｈ　Ｓ，Ｋｗｏｎ　Ｋ，Ｋｉｍ　Ｓ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｆｒｏｍ　ｂｌｏｏｄ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｕｓｉｎｇ　ｍｕｌｔｉｏｒｉ－　ｉｒｃｅ　ｆｌｏｗ　ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ（ＭＯＦＦ）ａｎｄ　ｄｉｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　（ＤＥＰ）［Ｊ］．ＬａｂＣｈｉｐ，２０１１，ｌ１（６）：１１１８－１１２５．　［１８】ＹａｔｅｓＤＲ，Ｒｏｕｐｒ￣ｔＭ，ＤｒｏｕｉｎＳ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＲＴ－　ＰＣＲ　ｎａａｌｙｓｉｓ　ｏｆＰＳＡ　ａｎｄ　ｐｒｏｓｔａｔｅ・・ｓｐｅｃｉｉｆｃ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｎａ－－　ｔｉｇｅｎ　ｍＲＮＡ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｕｔｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｍｐｒｏｖｅｓ　ｒｅ—　ｃｕｒｒｅｎｅｅ－ｆｒｅｅ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｎｏｍｏｇｒａｍ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ　ａｆｔｅｒ　ｒａｄｉｃａｌ　ｐｒｏｓｔａｔｅｃｔｏｍｙ［Ｊ］．Ｐｒｏｓｔａｔｅ，２０１２，７２（１２）：１３８２—１３８８．　［１９】Ａｌｉｘ　Ｐａｎａｂｉｒｅｓ　Ｃ．Ｅｐｉｓｐｏｔ　ａｓｓａｙ：ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆｖｉａｂｌｅ　ＤＴＣｓ／　ＣＴＣｓ　ｉｎ　ｓｏｌｉｄ　ｔｕｍｏｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｒｅｃｅｎｔ　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２０１２，１９５：６９—７６．　［２０］Ｌｕ　Ｊ，Ｆａｎ　Ｔ，Ｚｈａｏ　Ｑ，ｅｔ　ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｉｒｃｕｌａｔｎｉｇ　ｅｐｉｔｈｅｌｉ－　ａｌ　ａｎｄ　ｔｕｍｏｒ　ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｗｉｔｈ　ｎａ　ｉｎｖａｓｉｖｅ　ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ　ｆｒｏｍ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｃａｎｃｅ，ｒ２０１０，１２６（３）：　６６９．６８３．　［２１］Ｓｔｏｔｔ　Ｓ　Ｌ，Ｈｓｕ　Ｃ　Ｈ，Ｔｓｕｋｒｏｖ　Ｄ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆｃｉｒｃｕ‘　ｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｕｓｉｎｇ　ａ　ｍｉｃｒｏｖｏｒｔｅｘ・－ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ　ｈｅ￣ｉｎｇ‘　ｂｏｎｅ－ｃｈｉｐ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔ１　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，２０１０，１０７（４３）：　１８３９２．１８３９７．　［２２】Ｏｋａｂｅ　Ｈ，Ｔｓｕｎｏｄａ　Ｈ，Ｈｉｓａｍｏｒｉ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ　兰州大学学报（医学版）　ｃｅｌｌｓ　ａｓ　ａｎ　ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ　ｏｆ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｉｎ　ａｄｖａｎｃｅｄ　第４２卷　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔａｉｌｏｒ—ｄｅｒｉｖｅｄ　ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ　ＲＵＮＸ３　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｇａｓｔｉｒｃ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ａｎｎ　Ｓｕｒｇ　Ｏｎｃｏｌ，２０１５，２２（１２）：３９５４－　３９６１．　ｎ　ｉｈｅ　ｔｓｅｒｕｍ　ｏｆ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，　２００９，２９（７）：２６１９－２６２５．　【２３］Ｂｅｒｔａｚｚａ　Ｌ，Ｍｏｃｅｌｌｉｎ　Ｓ，Ｍａｒｃｈｅｔ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｓｕｒｖｉｖｉｎ　ｇｅｎｅ　［３６］Ａｓａｄａ　Ｋ，Ｎａｋａｊｉｍａ　Ｔ，Ｓｈｉｍａｚｕ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｍｏｎｓｒｔａｔｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎ・　ｏｆ　ｔｈｅ　ｕｓｅｆｕｌｎｅｓｓ　ｏｆ　ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ｒｉｓｋ　ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ　ｃｅｒ　ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ　ｐｒｅｄｉｃｔ　ｓｕｒｖｉｖａｌ［Ｊ］．Ｊ　Ｔｒａｎｓｌ　Ｍｅｄ，２００９，　７：ｌ１１　ｂｙ　ａ　ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ　ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ　ｃｏｈｏｒｔ　ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｇｕｔ，２０１５，　６４（３）：３８８－３９６．　［２４］王万祥，李英彬，谢晓亮，等．以黑色素瘤抗原基因ｍＲＮＡ　［３７］Ｃｈｅｕｎｇ　Ｋ　Ｆ，Ｌａｍ　Ｃ　Ｎ，Ｗｕ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　为标记检测胃癌患者外周血肿瘤细胞［Ｊ】．中华胃肠外　科杂志，２００９，１２（６）：６１１．６１４．　［２５】Ｚｈｏｕ　Ｈ，Ｘｉａｏ　Ｂ，Ｚｈｏｕ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．ＭｉＲ一４２１　ｉｓ　ａ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｍａｒｋｅｒ　ｏｆ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｎｌｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａ—　ｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ，２０１２，１７（２）：１０４—１　１０．　［２６］Ｚｈｏｕ　Ｈ，Ｇｕｎ　Ｊ　Ｍ，Ｌｏｕ　Ｙ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｉｒｃｕｌａｔ－　ｉｎｇ　ｔｕｒｎｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｆｒｏｍ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ｕｓｎｉｇ　ｍｉｃｒｏＲＮＡ　ａｓ　ａ　ｍａｒｋｅｒ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｏｌ　Ｍｅｄ（Ｂｅｒ１），２０１０，８８（７）：７０９—７１７．　［２７］Ｚｈｅｎｇ　Ｃｕｉ　Ｌ，Ｓｕｎ　ｅｔ　ａ１．ＭｉｃｒｏＲＮＡ．２１　ｉｓ　ａ　ｎｅｗ　ｍａｒｋｅｒ　ｏｆ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｒｎｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ’ｐａ—　ｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｂｉｏｍａｒｋ，２０１１，ｌ０（２）：７１－７７．　［２８】Ｇｏｒｍａｌｌｙ　Ｅ，Ｃａｂｏｕｘ　Ｅ，Ｖｉｎｅｉｓ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｆｒｅｅ　ＤＮＡ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ　ｏｒ　ｓｅｒｕｌＴｌ　ａｓ　ｂｉｏｍａｒｋｅｒ　ｏｆ　ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ：　ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ａｓｐｅｃｔｓ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ［Ｊ］．Ｍｕｔａｔ　Ｒｅｓ，２００７，６３５（２—３）：１０５－ｌ１７．　［２９］Ｍｉｔｃｈｅｌｌ　Ｐ　Ｓ，Ｐａｒｋｉｎ　Ｒ　Ｋ，Ｋｒｏｈ　Ｅ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ　ａｓ　ｓｔａｂｌｅ　ｂｌｏｏｄ　ｂａｓｅｄ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｆｏｒ　ｃａｎｃｅｒ　ｄｅ．　ｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｔｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　ＵＳＡ，２００８，１０５（３０）：　１０５１３．１０５１８．　［３０］Ｋｏｌｅｓｎｉｋｏｖａ　Ｅ　Ｔａｍｋｏｖｉｃｈ　Ｓ　Ｎ，Ｂｒｙｚｇｕｎｏｖａ　Ｏ　Ｅ，　ｅｔ　ａ１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ＤＮＡ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｌｏｏｄ　ｏｆ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．ＡｎｎＮＹＡｃａｄ　Ｓｃｉ，２００８，１１３７：２２６．３１．　［３１］ＮｅｗｍａｎＡＭ，Ｂｒａｔｍａｎ，Ｓ　Ｔｏ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ａｎｕｌｒｔａｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｎｇ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔＵｌＴＩＯｒ　ＤＮＡ　ｗｉｔｈ　ｂｒｏａｄｐａｔｉｅｎｔｃｏｖｅｒａｇｅ［Ｊ］．ＮａｔＭｅｄ，２０１４，２０（５）：５４８—５５４．　［３２］Ｓｃｈｍｉｄｔ　Ｂ　Ｅｎｇｅｌ　Ｅ，Ｃａｒｓｔｅｎｓｅｎ　Ｌ　ｅｔ　ａ１．Ｑｕａｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｆｅｅ　ＲＮＡ　ｉｎ　ｓｅｒｕｍ　ａｎｄ　ｂｒｏｎｃｈｉａｌ　ｌａｖａｇｅ：ａ　ｎｅｗ　ｄｉａｇ・　ｎｏｓｔｉｃ　ｔｏｏｌ　ｉｎ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ，　２００５，４８（１）：１４５－１４７．　［３３】Ｐａｐａｄｏｐｏｕｌｏｕ　Ｅ，Ｄａｖｉｌａｓ　Ｅ，Ｓｏｔｉｒｉｏｕ　ｅｔ　ａ１．Ｃｅｌ１．ｆｒｅｅ　ＤＮＡａｎｄＲＮＡｉｎｐｌａｓｍａ　ａｓ　ａｎｅｗｍｏｌｅｃｕｌｒａｍａｒｋｅｒｆｏｒ　ｐｒｏｓｔａｔｅ　ａｎｄ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ａｎｎ　Ｎ　Ｙ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ，２００６，　１０７５：２３５．２４３．　［３４］Ｈａｍａｋａｗａ　Ｔ，Ｋｕｋｉｔａ　Ｙ　Ｋｕｒｏｋａｗａ　Ｙ’ｅｔ　ａ１．Ｍｏｎｉｔｏｒ．　ｉｎｇ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｕｒ　ＤＮＡ［Ｊ］．Ｂｒ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ，２０１５，１　１２（２）：３５２．３５６．　［３５］Ｓａｋａｋｕｒａ　Ｃ，Ｈａｍａｄａ　Ｔ，Ｍｉｙａｇａｗａ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｓｉｎｇｉｉｆｃａｎｃｅ，ａｎｄ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＲＮＦ１　８０，ａ　ｎｏｖｅｌ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．　Ｃａｎｃｅｒ，２０１２，１１８（４）：９４７—９５９．　［３８】Ｓｏｎｇ　Ｊ　Ｈ，Ｍｅｌｔｚｅｒ　Ｓ　Ｊ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ　ｉｎ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｄｉａｇ—　ｎｏｓｉｓ，ａｎｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｇａｓｔｒｏｅｓｏｐｈａｇｅａｌ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｇａｓ—　ｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２０１２，１４３（１）：３５—４７．　［３９］ＳｏｎｇＭ　ＰａｎＫＦ，ＳｕＨ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆｓｅｕｒｍ　ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ　ａｓ　ｎｏｖｅｌ　ｎｏｎ－ｉｎｖａｓｉｖｅ　ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ　ｆｏｒ　ｅａｒｌｙ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇａｓｔｉｒｃ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ，２０１２，７（３）：　ｅ３３６０８．　［４０］Ｔｓｕｊｉｕｒａ　Ｍ，Ｉｃｈｉｋａｗａ　Ｄ，Ｋｏｍａｔｓｕ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒｓ　［Ｊ］．Ｂｒ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｌ　２０１０，１０２（７）：１１７４—１１７９．　［４１］Ｗａｎｇ　Ｍ，Ｇｕ　Ｈ，Ｗａｎｇ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｍｉＲ－１７—５ｐ　ｎａｄ　ｍｉＲ－２０ａ：ｍｏｌｅｃｕｌｒａ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｆｏｒ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｍｅｄ　Ｒｅｐ，２０１２，５（６）：１５１４—１５２０．　［４２］Ａｒｉｔａ　Ｌ　Ｉｃｈｉｋａｗａ　Ｄ，Ｋｏｎｉｓｈｉ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｌｏｎｇ　ｎｏｎ－ｃｏｄｉｎｇ　ＲＮＡｓ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎ—　ｃｅｒ［Ｊ］．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２０１３，３３（８）：３１８５—３１９３．　［４３］Ｓｕｎ　Ｙ　Ｙａｎｇ　Ｘ　Ｒ，Ｚｈｏｕ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｌｓ：ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ，ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｉｓｓｕｅｓ，　ａｎｄ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｒｅｌｅｖａｎｃｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ　Ｃｌｉｎ　Ｏｎｃｏｌ，２０１　１，　１３７（８）：１１５１－１１７３．　［４４］Ｓｈｉｍａｄａ　Ｈ，Ｎｏｉｅ　Ｌ　Ｏｈａｓｈｉ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｓｉｇｎｉｉｆ—　ｃａｎｃｅ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ｔｕｎｌｏｒ　ｍａｒｋｅｔｓ　ｆｏｒ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｃａｎｃｅｒ：ａ　ｓｙｓ－　ｔｅｍａｔｉｃ　ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｔａｓｋ　Ｆｏｒｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｊａｐ．　ａｎｅｓｅ　Ｇａｓｔｉｒｃ　Ｃａｎｃｅｒ　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｉｃ　Ｃａｎｃｅｒ，　２０１４，１７（１）：２６—３３．　［４５］Ｂａｓｓ　Ａ　Ｊ，Ｔｈｏｒｓｓｏｎ　Ｓｈｍｕｌｅｖｉｃｈ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎ．　ｓｉｖｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇａｓｔｒｉｃ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏ—　ｍａ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２０１４，５１３（７５１７）：２０２—２０９．　［４６】Ｗａｎｇ　Ｋ，Ｙｕｅｎ　Ｓ　Ｔ，Ｘｕ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｗｈｏｌｅ—ｇｅｎｏｍｅ　ｓｅｑｕｅｎｃ—　ｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ　ｉｄｅｎｔｉｆｙ　ｎｅｗ　ｄｒｉｖｅｒ　ｍｕｔａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｇａｓｔｉｒｃ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｇｅｎｅｔ，２０１４，　４６（６）：５７３－５８２．　［４７］Ｓｕｎｄａｒｅｓａｎ　Ｔ　Ｋ，Ｈａｂｅｒ　Ｄ　Ａ．Ｆａｎｔａｓｔｉｃ　ｖｏｙａｇｅ：ｔｈｅ　ｆｕ－　ｔｕｒｅ　ｏｆ　ｃａｎｃｅｒ　ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｌａｎｃｅｔ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１５，　１６（１６、：１５９６—１５９８．