脂多糖诱导THP-1细胞固有免疫相关miRNAs表达的研究

・论著・　脂多糖诱导ＴＨＰ．１细胞固有免疫相关ｍｉＲＮＡｓ表达的研究　余婷　，邹学农。，罗嘉全　，黄胜　，李亮平　，高蔓蔓　，龚铭　，周治宇　，陈孝　（１．中山大学附属第一医院药学部，广东广州　５１００８０；２．中山大学附属第一医院骨科研究所，广东广州５１００８０）　摘要：目的检测脂多糖（Ｌｉｐ０ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，ＬＰＳ）诱导ＴＨＰ．１巨噬细胞固有免疫反应不同时间点（４、８、１２、２４、４８　ｈ）差异表　ＬＰＳ　达的ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ（ｍｉＲＮＡｓ）及预测的靶基因的表达情况，探讨骨修复材料移植早期的宿主免疫炎症反应调控机制。方法处理由佛波醇ＰＭＡ诱导分化的ＴＨＰ一１细胞．分别在刺激４、８、１２、２４、４８　ｈ之后提取总ＲＮＡ，用实时荧光定量ＰＣＲ方法检测　ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ表达。生物信息学预测ｍｉＲ．１０ｂ靶基因是ＳＣＡＲＢ２并检测其蛋白表达。结果　ｍｉＲ．１０ｂ、ｌｅｔ一７家族以及ｍｉＲ－１８１ｃ　与芯片结果相符。ＳＣＡＲＢ２预测为ｍｉＲ．１０ｂ的靶基因，且蛋白表达上升。结论炎症免疫过程　ｍｉＲ．１０ｂ可能通过靶基因ＳＣＡＲＢ２参与调控　关键词：ｍｉｃｒｏＲＮＡ；固有免疫；差异表达　中图分类号：Ｒ９６　文献标志码：Ａ　文章编号：１６７３．４６１０（２０１５）０５—０３１３．０４　Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｉｎｎａｔｅ　Ｉｍｍｕｎｅ　Ｒｅｌａｔｅｄ－ｍｉＲＮＡｓ　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　Ｔｒｅａｔｅｄ　ＴＨＰ　１　Ｃｅｌｌｓ　ＹＵ　Ｔｉｎｇ　，Ｚ０Ｕ　Ｘｕｅｎｏｎｇ　，ＬＵ０　Ｊｉａｑｕａｎ　，ＨＵＡＮＧ　Ｓｈｅｎｇ　，ＬＩ　Ｌｉａｎｇｐｉｎｇ　，Ｇａｏ　Ｍａｎｍａｎ　，ＺＨＯＵ　Ｚｈｉｙｕ　，　ＣＨＥＮ　Ｘｉａｏ　（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，Ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｉｆｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆＳｕｎ　Ｙａｔ—ｓｅｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５１００８０，　Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ印ｉｎｅ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｉｌｆｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｓｕｎ　Ｙａｔ－ｓｅｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，　Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　５１００８０，Ｃｈｉｎａ）　ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴｒＶＥ　Ｔｂ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ　ｔａｒｇｅｔ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ（ＬＰＳ）－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｉｎｎａｔｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｏｆＴＨＰ一１　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｔｉｍｅ　ｐｏｉｎｔｓ（４，８，１２，２４，４８　ｈ）．Ａｎｄ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｈｏｓｔ　ｉｍｍｕｎｏ．ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ｂｏｎｅ　ｇｒａｆｔｉｎｇ　ａｔ　ｅａｒｌｙ　ｓｔａｇｅ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｔｈｅ　ｄｉｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ　ＴＨＰ．１　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ｔｈａｔ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｐｈｏｒｂｏｌ　ＰＭＡ　ｗｅｒｅ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ＬＰＳ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ＲＮＡ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ａｔ　４，８，１２，２４，４８　ｈ，　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｒｅａｌ　ｔｉｍｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ＰＣＲ　ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ　ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ　ＳＣＡＲＢ２　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｔａｒｇｅｔ　ｇｅｎｅ　ｏｆ　ｍｉＲ．１０ｂ．ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｔｒｅｎｄ　ｏｆ　ｍｉＲ．１０ｂ．１ｅｔ．７　ｆａｍｉｌｉｅｓ　ａｎｄ　ｍｉＲ．　１８１ｃ　ｗａｓ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｈｉｐ　ｒｅｓｕｌｔｓ．ＳＣＡＲＢ２　ｗａｓ　ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｔａｒｇｅｔ　ｇｅｎｅ　ｏｆ　ｍｉＲ—ｌＯｂ．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｗａｓ　ａｒｏｕｓｅｄ．　ＣｏＮＣＬＵＳＩＯＮ　ｍｉｃｒｏＲＮＡ－１０ｂ　ｍａｙ　ｂｅ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｏ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｂｙ　ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　ＳＣＡＲＢ２　ｇｅｎｅ．　ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：ＭｉｅｒｏＲＮＡｓ：ｉｎｎａｔｅ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ：ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ　ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ（ｍｉＲＮＡｓ）即微小ＲＮＡ。是一类大小　的ｍＲＮＡ表达谱，发现骨修复材料移植早期与宿主　约１９　２３　ｎｔ的小分子非编码单链ＲＮＡ。它们在转录　炎症免疫相关的基因表达随着时间改变而发生动态　后水平调控基因的表达，通过与靶基因特定位点　变化＿２］。进一步将ｍｉＲＮＡ与ｍＲＮＡ表达谱联合分　（３’．ＵＴＲ）的序列结合，引起靶基因降解或者抑制其　析表明，在骨形成过程不同时间点与宿主炎症免疫　翻译，从而发挥对基因转录后表达的调控作用。　ｍｉＲＮＡｓ参与各种重要的细胞生物学过程，包括细胞　相关的基因表达可能受不同的ｍｉＲＮＡｓ调控．包括：　ｍｉＲ一１０ｂ、ｌｅｔ－７ｄ　１　ｌｅｔ一７ｆ、ｍｉＲ－６６４ｂ　ｍｉＲ－３６３、ｍｉＲ一　的增殖、分化、凋亡与脂代谢等，在调控生物个体正　３７４ａ、ｍｉＲ．３７４ｂ、ｍｉＲ．３７４ｃ、ｍｉＲ．１８１Ｃ等　Ｊ。然而，这　常发育、新陈代谢等生理过程中扮演重要角色［１］。　些ｍｉＲＮＡｓ是否参与调控骨修复材料移植早期的宿　作者前期通过分析不同来源的Ｉ型胶原基骨修复材　主固有免疫反应尚不清楚。因此，本研究拟检测ＬＰＳ　料结合生长因子在家猪脊柱融合模型中骨形成过程　（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ，脂多糖）诱导ＴＨＰ．１巨噬细胞固　基金项目：９７３基础研究项目（２０１２ＣＢ６１９１００），国家自然科学基金重点项目（３１４３００３０）　作者简介：余婷，硕士研究生，ｙｕｔｉｎｇｊｄｚ＠１２６．ＣＯＢ　今日药学２０１５年５月第２５卷第５期　通讯作者：陈孝，主任药师，ｆｒａｎｋｗｙｃｈｅｎ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ　Ｐｈａｒｍａｃｙ　Ｔｏｄａｙ，２０１５　Ｍａｙ，Ｖｏ１．２５　Ｎｏ．５　・３１３・　症反应密切相关．若彻底清除炎症反应，势必影响骨　愈合．同时巨噬细胞能调节骨折修复和骨内稳态平　衡。促进成骨分化＿５　］。Ｇｕｉｈａｒｄ等　用ＬＰＳ处理　ＴＨＰ一１细胞后，产生的细胞因子抑瘤素Ｍ（Ｏｎｃｏｓｔａｔｉｎ　Ｍ，ＯＳＭ）能活化间充质干细胞（Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌ，ＭＳＣ）ＳＴＡＴ３转录因子从而促进ＭＳＣ矿化。　ＴＨＰ．１细胞是人单核细胞系，自１９８０年［８　建立　发表以来，常代替人原代外周血单核巨噬细胞（Ｐｅ—　ｒｉｐｈｅｒａｌ　Ｂｌｏｏｄ　Ｍｏｎｏｃｙｔｅ，ＰＢＭｓ），广泛用于牙科植人　修复材料以及动脉粥样硬化疾病等的体外研　究＿９．１０］。ＰＭＡ是蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活化剂，无论　在体内还是体外均可促进单核细胞分化。使其具有　巨噬细胞的特性＿ｌ　。本研究通过验证骨形成过程　中可能调控与宿主炎症免疫相关基因表达的ｍｉＲ．　ＮＡｓ．发现８条ｍｉＲＮＡｓ在巨噬细胞固有免疫反应中　表达有差异改变，其中ｍｉＲ．１０ｂ、ｌｅｔ．７家族以及ｍｉＲ　１８１ｃ与基因表达芯片结果相符。Ｒａｇｅｒ等　１　］检测　小鼠鼻咽癌模型外周血和鼻腔的ｍｉｃｒｏＲＮＡ芯片亦　发现ｍｉＲ．１０ｂ下调和ｌｅｔ．７上调且其ｍＲＮＡ芯片表　达谱也主要为免疫通路有关基因，与课题组的芯片　结果一致［２。］。ｍｉＲ．１０ｂ还在其他抗原提呈细胞中　具有免疫调节功能，它能通过靶蛋白ＮＫ细胞表面　ＭＩＣＢ配体。阻碍肿瘤细胞表面受体ＮＫＧ２Ｄ与配体　识别，使肿瘤细胞逃逸机体免疫［】。。　。而ｍｉＲ．１８１ｃ　在免疫细胞分化和凋亡中有着重要作用。当过表达　星形胶质细胞中ｍｉＲ一１８１ｃ．会加速ＬＰＳ诱导的该细　胞的凋亡［】　：当转染ｍｉＲ．１８１ｃ模拟物能抑制白血　病细胞和人外周血造血细胞的激活＿】　。在研究免　疫老化状态下疾病，譬如慢性心力衰竭，ｍｉＲ．１８１ｃ　也是出于高表达状态¨　Ｊ。　清道夫受体ＩＩ类成员（Ｓｃａｖｅｎｇｅｒ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ　Ｃｌａｓｓ　Ｂ　Ｍｅｍｂｅｒ　２，ＳＣＡＲＢ２），又称作溶酶体膜蛋白２（Ｌｙ，　ｓｏｓｏｍａｌ　Ｍｅｍｂｒａｎｅ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｌｉｍｐ．２），近期有报道称　ＳＣＡＲＢ２与肠道病毒Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ　７　１以及肝炎病毒感　染有关［螺删。不仅如此，Ｃａｒｒａｓｃｏ　Ｍａｒｉｎ等【。　还发　现ＬＩＭＰ　２可能与Ｌｉｓｔｅｒｉａ引起的巨噬细胞固有免疫　反应早期激活有关，是通过释放吞噬体降解Ｌｉｓｔｅｒｉａ　细菌菌壁和激活Ｒａｂ５ａ转录因子产生作用。本研　究预测ｍｉＲ　１０ｂ的靶基因可能是在骨修复材料移植　早期炎症免疫相关差异表达的ＳＣＡＲＢ２．通过ＬＰＳ　刺激的ＴＨＰ．１巨噬细胞固有免疫反应４８　ｈ后ｍｉＲ．　１０ｂ低表达，而ＳＣＡＲＢ２的蛋白高表达．提示ｍｉＲ一　・３１６・　Ｐｈａｒｍａｃｙ　Ｔｏｄａｙ，２０１５　Ｍａｙ，Ｖｏ１．２５　Ｎｏ．５　１０ｂ可能在骨修复材料移植早期调控宿主固有免疫　反应。Ⅱ型清道夫受体没有ｓｒｃＲ域，但仍具有Ｉ型　相同的功能，显然配体结合域不在ｓｒｃＲ域，其结构　域可能在胶原蛋白样域Ｃ末端的２２个氨基酸残基　作为配体识别位点。因此，作者推测高表达　ＳＣＡＲＢ２的蛋白可与Ｉ型胶原基骨修复材料是相结　合有利于单核／巨噬细胞黏附、分泌细胞因子，从而　促进间充质干细胞分化与矿化。　本研究通过分析脊柱融合模型ｍｉＲＮＡ和ｍＲ—　ＮＡ芯片以及巨噬细胞固有免疫反应验证结果显　示。ｍｉＲ．１０ｂ、ｌｅｔ．７家族以及ｍｉＲ．１８１ｃ可能通过调节　炎症免疫反应参与骨再生过程。将ｍｉＲＮＡ芯片、靶　基因点预测以及基因表达谱芯片结果综合分析，作　者推测ｍｉＲ．１０ｂ可能通过靶基因ＳＣＡＲＢ２调节骨修　复材料固有免疫反应对骨形成的作用．需进一步研　究阐明其具体作用机制。　参考文献　［１］Ｒｏｙ　Ｓ，Ｓｅｎ　ＣＫ．ＭｉＲＮＡ　ｉｎ　ｉｎｎａｔｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ：ｎｏｖｅｌ　ｐｌａｙｅｒｓ　ｉｎ　ｗｏｕｎｄ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｇｅｎｏｍｉｅｓ，　２０１１，４３（１０）：５５７—５６５．　［２］０　Ｎｅｉｌｌ　ＬＡ，Ｓｈｅｅｄｙ　ＦＪ，ＭｃＣｏｙ　ＣＥ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ：ｔｈｅ　ｉｆｎｅ—ｔｕｎ—　ｅｒｓ　ｏｆ　Ｔｏｌｌ　ｌｉｋｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｎａｔ　Ｒｅｖ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，　２０１１，１１（３）：１６３—７５．　［３］Ｈａｍｉｄ　Ｏ，Ｓｈｅｇａｒｉｆ　Ｒ．Ｂｏｎｅ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅ—　ｓｐｏｎｓｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｏｒｔｈｏｐａｅｄｉｃ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，２００９，１７（２）：　２０６—２１　１．　［４］Ｌａｎｄｇｒａｅｂｅｒ　Ｓ，Ｊａｇｅｒ　Ｍ　Ｊａｃｏｂｓ　ＪＪ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｏｒ—　ｔｈｏｐｅｄｉｅ　ｉｍｐｌａｎｔ　ｆａｉｌｕｒｅ　ｉｓ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｂｙ　ｉｎｎａｔｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｍｅｄｉａｔｏｒｓ　ｏｆ　Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，２０１４，（９）：１８５１５０．　［５］Ｃｒｉｓｅｉｔｉｅｌｌｏ　ｃ，Ｖｉａｌｅ　Ｇ，Ｇｅｌａｏ　Ｌ，ｅｔ　ａ１　Ｃｒｏｓｓｔａｌｋ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｂｏｎｅ　ｎｉｃｈｅ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｅ　ｓｙｓｔｅｍ：Ｏｓｔｅｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ａｓ　ａ　ｐｏ—　ｔｅｎｔｉａｌ　ｔａｒｇｅｔ　ｆｏｒ　ｃａｎｃｅｒ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　Ｒｅ—　ｖｉｅｗｓ，２０１５，４１（２）：６１—６８．　［６］Ｖｉ　Ｌ，Ｂａｈｔ　ＧＳ，Ｗｈｅｔｓｔｏｎｅ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｏｓ—　ｔｅｏｂｌａｓｔｉｃ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｉｎ—ｖｉｖｏ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｆｒａｃｔｕｒｅ　ｒｅｐａｉｒ　ａｎｄ　ｂｏｎｅ　ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　Ｏｆ　Ｂｏｎｅ　Ａｎｄ　Ｍｉｎｅｒａｌ　Ｒｅ－　ｓｅａｒｃｈ，２０１４．ｄｏｉ：１０．１００２／ｊｂｍｒ．２４２２．［Ｅｐｕｂ　ａｈｅａｄ　ｏｆ　ｐｒｉｎｔ］．　（Ａｃｃｅｐｔｅｄ）　［７］Ｇｕｉｈａｒｄ　Ｐ，Ｄａｎｇｅｒ　Ｙ，Ｂｒｏｕｎａｉｓ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｓｔｅｏｇｅｎ—　ｅｓｉｓ　ｉｎ　ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｉｌｓ　ｂｙ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ／ｍａｃｒｏ—　ｐｈａｇｅｓ　ｄｅｐｅｎｄｓ　ｏｎ　ｏｎｃｏｓｔａｔｉｎ　Ｍ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｓｔｅｍ　Ｃｅｌｌｓ，　２０１２，３０（４）：７６２—７７２．　［８］Ｔｓｕｃｈｉｙａ　Ｓ，Ｙａｍａｂｅ　Ｍ，Ｙａｍａｇｕｃｈｉ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｈｕｍａｎ　ａｃｕｔｅ　ｍｏｎｏｃｙｔｉｃ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｃｅｌｌ　ｌｉｎｅ　（ＴＨＰ一１）［Ｊ］．Ｉｎｔ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ，１９８０，２６（２）：１７１—１７６．　［９］Ｈｅｉｌ　ＴＬ，Ｖｏｌｋｍａｎｎ　ＫＲ，Ｗａｔａｈａ　ＪＣ，ｅｔ　ａ１．Ｈｕｍａｎ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　ｂｌｏｏｄ　ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ　ｖｅｒｓｕｓ　ＴＨＰ・－１　ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ　ｆｏｒ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｂｉｏｃｏｍ－－　ｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｔｅｓｔｉｎｇ　ｏｆ　ｄｅｎｔａｌ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　Ｏｆ　Ｏｒａｌ　Ｒｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ，２００２，２９（５）：４０１—４０７．　（下转第３２０页）　今日药学２０１５年５月第２５卷第５期　中ＴＭＰ的ＡＵＣ最高，为（０．７２±０．０２）Ｉｘｇ・ｍＬ～・ｈ．　Ｔｌ／２为（Ｏ．２８＋－０．Ｏ１）ｈ，这表明ＦＡＴＭ在肝脏的分布最多　且消除快，说明其代谢主要在肝脏。ＴＭＰ在在其他脏　器中的ＡＵＣ数值由高到低依次是脾，肾，心，脑。这也　良好的作用，能帮助改善血流循环。由表３可知．　ＴＭＰ在兔脑中的Ａ　值为（０．４１＋－０．０２）ｍｇ・Ｌ～・ｈ，　说明ＦＡＴＭ能透过血脑屏障，似乎此药物利于中风及　其他脑部疾病的治疗。　５结论　计提要［Ｍ］．中国协和医科大学出版社，２０１３：８－１０．　［３］卫生部心血管病防治研究中心．中国心血管病报告２０１２　［Ｍ］．北京：中国大百科全书出版社，２０１３．　［４］王文，刘明波，隋辉，等．中国心血管病的流行状况与防治对　策［Ｊ］．中国心血管杂志，２０１２，１７（５）：３２１—３２３．　ｒｙ　ＵＳ，Ｇｕｒｂｅｌ　ＰＡ．Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　０ｆ　ｏｒａｌ　ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ　ｔｈｅｒａ．　表明ＦＡＴＭ主要分布于血流量大的器官中．与血液有　［５］ＴａｎｔＰＹ　ｂｙ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｔｅｓｔｉｎｇ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　Ｃａｒｄｉｏｌｏｙ　ｇ２０１１，６：５７２—５７９．　［６］Ａｒｎｏｌｄ　ＳＶ，Ｃｏｈｅｎ　ＤＪ，Ｍａｇｎｕｓｏｎ　ＥＡ．Ｃｏｓｔ—ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｎｅｓｓ　ｏｆ　ｏｒａｌ　ａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔ　ａｇｅｎｔｓ－ｃｕｒｒｅｎｔ　ａｎｄ　ｆｕｔｕｒｅ　ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，２０１１，８：５８０—５９１．　［７］Ｆｒａｎｃｈｉ　Ｆ，Ａｎｇｉｏｌｉｌｌｏ　ＤＪ．Ｎｏｖｅｌ　ａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔ　ａｇｅｎｔｓ　ｉｎ　ａｃｕｔｅ　ｃｏｏ—ｒ　药品在临床实验开发阶段中。其动物在体实验　具有很强的代表性，动物模型可以有效地获得新药　早期的药代动力学特征。基本的动物实验数据也能　用于记录新型药物的吸收、分布、代谢和消除机制。　ｎａｒｙ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ，２０１４，１２：３０—４７．　［８］谭载友．一种抑制血小板形成、抗血栓化合物，其制备方法　及应用［Ｐ］．中国：ＺＬ００１１４２３９．９，２０００—１１—２９．　［９］谭载友，江涛，唐春萍，等．阿魏酸川芎嗪的抗血小板聚集作　用［Ｊ］．中国新药杂志，２００３，１２（７）：５２９．５３１．　［１Ｏ］谭载友．一种抑制血小板聚集、抗血栓形成的阿魏酸四甲基　吡嗪晶体及其制备方法［Ｐ］．中国：２０１０１０５６２４７７．０，２０１０．　Ｏ５—６．　因此。动物体内药动学评价的数据通常作为筛选新　　ＺＹ，Ｚｈｕ　ＥＪ，Ｌｕｏ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．３一（４一Ｈｙｄｒｏｘｙ一３一ｍｅｔｈｏｘｙ—　颖药物或优化其处方的依据，并指导最终产品剂型　［１１］Ｔａｎｐｈｅｎ１）ｃｒｙｌｉｃ　ａｃｉｄ・２，３，５，６－ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｐｙｒａｚｉｎｅ（２／１）［Ｊ］．　的整个设计过程。本研究所得到的动物药动学数据　Ａｃｔａ　Ｃｒｙｓｔ．２０１１，Ｅ６７：ｏ４２４．　表明，ＦＡＴＭ可在兔各个组织中快速分布并消除，表　［１２］Ｊａｍｂｈｅｋａｒ　ＳＳ，Ｂｒｅｅｎ　ＰＪ．Ｂａｓｉｃ　Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ［Ｍ］．Ｐｈａｒ－　ｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｐｒｅｓｓ．Ｌｏｎｄｏｎ．Ｃｈｉｃａｇｏ：２００９：１－１．　明ＦＡＴＭ是一种很有前景的潜在药物。　参考文献　［１］Ｖｉｌａｈｕｒ　Ｇ，Ｂａｄｉｍｏｎ　Ｌ－Ａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｎａｔｕｒａｌ　ｐｒｏｄ・　ｕｃｔｓ［Ｊ］．Ｖａｓｃｕｌａｒ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１３，５９（３－４）：６７—７５．　［２］国家卫生和计划生育委员会．２０１３中国卫生和计划生育统　［１３］Ｗａｔｓｏｎ　ＤＧ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ａ　Ｔｅｘｔｂｏｏｋ　ｆｏｒ　Ｐｈａｍａ．ｒ　ｃｙ　Ｓｔｕｄｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｐｈａｍａｃｒｅｕｔｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｓ［Ｍ］．Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ　Ｌｉｖ—　ｉｎｇｓｔｏｎｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）：２００９：１（１１）：２３８—２７４．　（收稿日期：２０１５．Ｏ１—２８）　（上接第３１６页）　［１０１　Ｑｉｎ　ｚ．Ｔｈｅ　ｕｓｅ　ｏｆ　ＴＨＰ一１　ｃｅｌｌｓ　ａｓ　ａ　ｍｏｄｅｌ　ｆｏｒ　ｍｉｍｉｃｋｉｎｇ　ｔｈｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ　ａｎｄ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌｙｍｐｈｏｅｙｔｅｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ＩＬ一２　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｙ　ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｍｌ’－　ｃｒｏＲＮＡ一１８１ｃ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１１，４８（４）：５９２—　５９９．　ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ［Ｊ］．Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，２０１２，２２１（１）：２一ｌＩ．　［１１］Ｔｓｕｃｈｉｙａ　Ｓ，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ　Ｙ，Ｇｏｔｏ　Ｙ，ｅｔ　ａ／．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆｍａｔｕｒａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｈｕｍａｎ　ｍｏｎｏｃｙｔｉｃ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｃｅｌｌｓ　ｂｙ　ａ　ｐｈｏｒｂｏｌ　ｄｉｅｓｔｅｒ　［１７］Ｓｅｅｇｅｒ　Ｔ，Ｈａｆｆｅｚ　Ｆ，Ｆｉｓｃｈｅｒ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｉｍｍｕｎｏｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ—ａｓｓｏ—　ｃｉａｔｅｄ　ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ　ｉｎ　ａｇｅ　ａｎｄ　ｈｅａｒｔ　ｆａｉｌｕｒｅ［Ｊ］．Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒ－　ｎａ１　Ｏｆ　Ｈｅａｒｔ　Ｆａｉｌｕｒｅ，２０１３，１５（４）：３８５・３９３．　［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，１９８２，４２（２）：１５３０－１５３６．　［１２］Ｒａｇｅｒ　ＪＥ，Ｍｏｅｌｌｅｒ　ＢＣ，Ｍｉｌｌｅｒ　ＳＫ，ｅｔ　ａ１．Ｆｏｒｍａｌｄｅｈｙｄｅ—ａｓｓｏｃｉａｔ—　ｅｄ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ：ｔｉｓｓｕｅ　ａｎｄ　ｔｅｍｐｏｒａｌ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　［１８］Ｈｓｉａｏ　ＨＢ，Ｃｈｏｕ　ＡＨ，Ｌｉｎ　ＳＩ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｌｉｖｅｒｙ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ＥＶ７１　ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ　ｂｙ　ａｄｅｎｏ－－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｓ　ＥＶ７１　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ－・　ｒａｔ　ｎｏｓｅ，ｗｈｉｔｅ　ｂｌｏｏｄ　ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ　ｂｏｎｅ　ｍａ／Ｔｏｗ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０１４，１３８（１）：３６—４６．　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｌｏｃａｌ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ　ｉｎ　ａｄｕｌｔ　ｍｉｃｅｆ　Ｊ］．Ｂｉｏｍｅｄ　Ｒｅｓ　Ｉｎｔ．　［１３］Ｔｓｕｋｅｒｍａｎ　Ｐ，Ｅｎｋ　Ｊ，Ｍａｎｄｅｌｂｏｉｍ　Ｏ．Ｍｅｔａｓｔａｍｉｒ—ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｉｍ—　ｍｕｎｅ　ｅｖａｓｉｏｎ：ｍｉＲ・ｌｏｂ　ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ｔｈｅ　ｓｔｒｅｓｓ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｍｏｌｅ—　２０１４，（２）：８７８１３９．　［１９］Ｌｉｎ　Ｙｗ，Ｙｕ　ＳＬ，Ｓｈａｏ　ＨＹ，ｅｔ　ａ１．Ｈｕｍａｎ　ＳＣＡＲＢ２　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｍｉｃｅ　ａｓ　ａｎ　ｉｎｆｅｅｔｉｏｕｓ　ａｎｉｍａｌ　ｍｏｄｅｌ　ｆｏｒ　ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｕｓ　７１（Ｊ］．ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ，２０１３，８（２）：ｅ５７５９１．　ｃｕｌｅ　ＭＩＣＢ，ｈｅｎｃｅ　ａｖｏｉｄ　ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ　ｂｙ　ＮＫＧ２Ｄ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ［Ｊ］．　Ｏｎｅｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１３．２（１）：ｅ２２２４５．　［２０］Ｇｒｏｖｅ　Ｊ，Ｈｕｂｙ　Ｔ，Ｓｔａｍａｔａｋｉ　ｚ，ｅｔ　ａ１．Ｓｃａｖｅｎｇｅｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ＢＩ　ａｎｄ　ＢＩＩ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｍｏｄｕｌａｔｅ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｃ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎｆｅｃｔｉｖｉｔｙ　［１４３　Ｔｓｕｋｅｒｍａｎ　Ｐ，Ｓｔｅｒｎ—Ｇｉｎｏｓｓａｒ　Ｎ，Ｇｕｔ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．ＭｉＲ—ｌＯｂ　ｄｏｗｎ—　ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ｔｈｅ　ｓｔｒｅｓｓ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｅｌｌ　ｓｕｒｆａｃｅ　ｍｏｌｅｃｕｌｅ　ＭＩＣＢ，ａ　ｃｔｉｔ－　［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＶｉｒｏｌｏｙ，２００７，８１（７）：ｇ３１６２．３１６９．　ｉｃａｌ　ｌｉｇａｎｄ　ｏｆｒ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌ　ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ　ｂｙ　ｎａｔｕｒａｌ　ｋｉｌｌｅｒ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１２，７２（２１）：５４６３—５４７２．　［２１］Ｃａｒｒａｓｃｏ—Ｍａｔｉｎ　Ｅ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｐｒｉｅｔｏ　Ｌ，Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ—Ｄｅｌ　ＲＥ，ｅｔ　ａ１．ＬＩＭＰ一２　ｌｉｎｋｓ　ｌａｔｅ　ｐｈａｇｏｓｏｍａｌ　ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｏｎｓｅｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｎａｔｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　Ｌｉｓｔｅｒｉａ　ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ：ａ　ｒｏｌｅ　［１５］Ｈｕｔｃｈｉｓｏｎ　ＥＲ，Ｋａｗａｍｏｔｏ　ＥＭ，Ｔａｕｂ　ＤＤ，ｅｔ　ａ１．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ　ｆｏｒ　ｍｉＲ一１８１　ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ　ｉｎ　ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　ｏｆ　ａｓｔｒｏ—　ｉｎ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　Ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｙ，ｒ　２０１１，２８６（５）：３３３２—３３４１．　（收稿日期：２０１５　０４．０７）　ｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｇｉｌａ，２０１３，６１（７）：１０１８—１０２８．　［１６］Ｘｕｅ　Ｑ，Ｇｕｎ　ＺＹ，Ｌｉ　Ｗ，ｅｔ　ａ１．Ｈｕｍａｎ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ＣＤ４（＋）Ｔ　・３２０・　Ｐｈａｒｍａｃｙ　Ｔｏｄａｙ２０１５　Ｍａｙ，Ｖｏ１．２５　Ｎｏ．５　，今日药学２０１５年５月第２５卷第５期