游离RNA的生物学特征、功能及其在肺癌临床中的意义

第２５卷第３期（第８６页）　湖北民族学院学报・医学版　Ｖ０１．２５　Ｎｏ．３　Ｐ．８６　２００８薤　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｕｂｅｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｆｏｒ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ・Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｅｄｉｔｉｏｎ　２００８　游离ＲＮＡ的生物学特征、功能及其在　肺癌临床中的意义　李威（综述），陈燕明（审校）　南京医科大学附属苏州医院呼吸内科（江苏苏州２１ｏｏｏ８）　【关键词】游离ＲＮＡ；生物学特征；肺癌　【中图分类号】Ｒ３９２．３　【文献标识码】Ａ　【文章编号】１００８—８１６４（２００Ｓ）０３—００８６—０３　游离ＲＮＡ是指存在于血清、血浆、肺泡灌洗液、　结肠癌患者手术成功切除后，其中１６例１３一连接素　尿液、胸腹水等体液中的细胞外游离ＲＮＡ，循环　ｍＲＮＡ含量下降。以上实验均说明了游离ＲＮＡ与　ＲＮＡ是特指血清或血浆中游离ＲＮＡ。随着现代分　肿瘤密切相关，具有肿瘤来源。另一方面肿瘤细胞　子生物学的发展，证实了游离ＲＮＡ的存在，为肿瘤　来源有凋亡、坏死、主动释放三种机制，目前认为以　研究开辟了新的领域。本文综述了近来游离ＲＮＡ　凋亡为主。Ｂｉｇｇｉｏｇｅｒａ等　发现在经放射线照射诱　的生物学特征、功能及其在肺癌临床应用中的意义。　导的凋亡小鼠脾细胞培养上清中，可以提取到大量　１游离ＲＮＡ的生物学特征　ＲＮＡ，用流式细胞仪检测发现凋亡细胞内的ＲＮＡ量　与正常细胞比较有所下降，采用细胞化学染色方法，　１．１游离ＲＮＡ的结构ＲＮＡ相对ＤＮＡ而言，更　脾细胞间质呈染色阳性，提示小鼠脾细胞通过凋亡　易被广泛存在的核糖核酸酶所降解，而且癌症患者　释放ＲＮＡ，胞内ＲＮＡ含量减少不是胞内核糖核酸　血清中含有更高浓度的核糖核酸酶，Ｗｉｅｃｚｏｒｅｋ等阐　酶降解作用。　述了癌症患者血清中以ＲＮＡ一蛋白脂复合物化学　Ｉ．３游离ＲＮＡ的稳定性Ｎａｃｙ等　对比了内源　组成来保护ＲＮＡ，半衰期大约为２　ｄ。Ｔａｌａｌ等…通　性和外源性ＲＮＡ在体液中稳定性，当外源性ＲＮＡ　过实验报道，向血浆中加入十二烷基磺酸钠（一种　加入血清中１５ｓ后，９９％不能进行扩增检测。然而，　表面活性剂）破坏血浆中脂质或ＲＮＡ一蛋白质复合　未离心ＥＤＴＡ抗凝血浆４ｃＣ下分别放置０、６、２４ｈ，内　体后，不能被检测到血浆中游离ＲＮＡ，说明血浆　源性游离ＲＮＡ浓度没有统计学意义的差别，单一的　ＲＮＡ被降解，证明了游离ＲＮＡ与蛋白质组成复合　冻融前后的血清ＲＮＡ浓度也没有统计学意义的差　物形式存在。Ｅｎｄｅｒｓ和Ｎａｃｙ等　ｊ对原发性肝癌患　别，提示了在未离心ＥＤＴＡ抗凝血浆４￣Ｃ环境下和　者血浆中ＲＮＡ进行研究，采用不同直径的滤网过　单一的冻融循环过程中游离ＲＮＡ是稳定的。Ｎａｃｙ　滤，分别为０．２２、０．４５、５　ｍ，利用实时ＰＣＲ的方法　指出未离心的自凝血需要在６　ｈ内分析完毕才能测　测定滤液中３一磷酸甘油醛脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）ｍＲＮＡ　定稳定的血清ＲＮＡ浓度。　浓度，发现０．２２　ｍ的直径滤液ＲＮＡ的浓度比未过　１．４　游离ＲＮＡ的完整性Ｂｌｅｎｄａｌ７　分别对孕妇血　滤组下降了１５倍，有力地证明了体液中存在ＲＮＡ　浆内６种胎盘相关ＲＮＡ和一种管家基因ＲＮＡ的３　不是真正地裸露，而是以颗粒包裹或蛋白脂结合的　端和５　端进行定量检测，发现５　端明显高于３　端的　结构存在的，正是这种结构保护了ＲＮＡ不被降解。　拷贝数（Ｐ＜０．０１），说明可能由于５　端帽子结构的　目前多数学者认为游离ＲＮＡ包被在凋亡小体中。　存在，游离ＲＮＡ片段主要分布在５　端。Ｂｌｅｎｄａ等　１．２游离ＲＮＡ的来源关于游离ＲＮＡ的来源的　还发现５３例鼻咽癌患者血浆中３　端与５　端ＧＡＰＤＨ　文献报道较少，笔者通过阅读文献总结了以下两个　ｍＲＮＡ比值较健康者明显下降（Ｐ＝０．００２），与肿瘤　方面，一方面游离ＲＮＡ主要来源于肿瘤细胞，Ｋｏ—　的分期呈正相关，说明了肿瘤患者游离ＲＮＡ完整性　ｒｅｓｋｉ等　报道，在６例恶性黑色瘤患者的血浆中，　是下降的，游离ＲＮＡ在体液中主要是以核酸片段形　有４例可以检测到肿瘤来源的酪氨酸酶ｍＲＮＡ，而　式存在的，绝大多数游离ＲＮＡ片段分子量在２．５Ｓ　２Ｏ例健康对照组均为阴性。Ｗｏｎｇ等　发现１９例　和４Ｓ之间，核苷酸长度为１００ｂｐ左右，但仍能扩增　作者简介李威（１９７７一），男，湖北松滋人，硕士。主要研究方向：肺癌的基础与临床。　第３期　检测到２００　ｂｐ甚至完整的ＲＮＡ。　湖北民族学院学报・医学版　８７　因、糖酵解酶的基因等。这类基因在所有类型的细　胞中呈组成性表达，对于维持细胞的基本结构和代　２游离ＲＮＡ生物学功能　２．１　作为肿瘤标志物　研究发现肺癌　、黑色素　瘤　引、乳腺癌　】、胃肠道肿瘤　等患者肿瘤组织中　谢功能是必不可少的，通常在细胞内恒定表达。测　定体液中游离看家基因拷贝数可以评价总的游离　ＲＮＡ的水平。Ｓｃｈｍｉｄｔ等¨　分析了７３例肺癌患者　肺泡灌洗液上清中ＧＡＰＤＨ　ｍＲＮＡ水平，其平均拷　贝数为３４６００／ｍＬ，５６例良性疾病患者为９２００／ｍＬ，　明显低于肺癌患者（Ｐ＝０．００９），而血清中比较无显　肿瘤相关基因表达与体液中游离肿瘤相关性基因　ＲＮＡ表达密切相关，游离ＲＮＡ作为肿瘤标志物鉴　别良恶性病变具有较好的特异性和敏感性。具有转　移潜能的肿瘤细胞在术前或术时脱离原发灶，以非　常少的数量转移到淋巴结、骨髓、血液或远处器官　中，普通的检测手段不能发现，肿瘤的微转移是肿瘤　复发和转移的重要起始步骤，及时诊断微转移有助　于对Ｉ临床治疗方案选择和预后的判断，游离ＲＮＡ是　肿瘤微转移、监测疗效、预后判断的有效标志物…Ｊ。　肿瘤相关性游离ＲＮＡ本身是否具有微转移功能，即　“基因微转移”假说，目前尚未被证实。　２．２血液的促凝作用　Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ等－】　通过体外实　验表明凝血因子ＸＩＩ、ＸＩ具有强烈ＲＮＡ结合能力，　游离ＲＮＡ具有促进凝血因子ＸＩＩ、ＸＩ蛋白酶活性，　为ＸＩＩ、ＸＩ因子提供了表面激活途径的辅助模板。　而且，在三氯化铁诱导的小鼠动脉血栓形成模型中，　游离ＲＮＡ与纤维蛋白含量具有相关性，予核糖核酸　酶预处理能明显延长血栓形成的时间。因此，Ｃｈｒｉｓ—　ｉｆａｎ认为应用核糖核酸酶可能是一种全新的抗凝治　疗策略。　２．３介导血管内皮的渗透性Ｆｉｓｃｈｅｒ　Ｓ等¨刘实验　表明游离ＲＮＡ以其聚阴离子作用结合稳定血管内　皮生长因子（ＶＥＧＦ）及其受体，通过ＶＥＧＦ介导了　单层内皮细胞问紧密连接的解离，增加了内皮细胞　通透性。在三氯化铁诱导的小鼠前矢状窦血栓形　成、脑梗塞模型中，予核糖核酸酶预处理能明显减少　脑梗塞的体积，阻止脑水肿的形成。因此，核糖核酸　酶处理可能作为血管内皮渗透性保护的一种方法。　３游离ＲＮＡ在肺癌患者中的临床意　义　目前国内外文献报道，游离ＲＮＡ中的ＲＮＡ成　分有看家基因ＧＡＰＤＨ，肌动蛋白基因，１８Ｓ—ｒＲＮＡ　等，有肿瘤标志物特异基因角蛋白ｌ８片段ｍＲＮＡ，　癌胚抗原ｍＲＮＡ，不均一核糖核蛋白ＢｌｍＲＮＡ，端粒　酶ｍＲＮＡ等。　３．１　肺癌游离看家基因ＲＮＡ定量的测定看家基　因是维持细胞最低限度功能所不可少的基因，如编　码组蛋白基因、编码核糖体蛋白基因、线粒体蛋白基　著性差别，提示了定量检测肺泡灌洗液上清总的游　离ＲＮＡ是鉴别肺部良恶性病变的有用工具。　３．２肺癌肿瘤相关性基因ｍＲＮＡ的测定　３．２．１不均一核糖核蛋白　（ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｒｉｈｏｎｕｃｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ＨｎＲＮＰ）Ｂ１　ｍＲＮＡ是一种核内　ＲＮＡ结合蛋白，可与端粒重复序列单链特异性结　合，保护其免受核酸酶的分解，并激活端粒酶。它在　癌细胞和增殖细胞中过度表达，可能是细胞癌变的　原因之一　。Ｓｃｈｍｉｄｔ等¨刮检查了２５例肺癌患者　的肺泡灌洗液中，ｌ８例ｈｎＲＮＰ　ＢｌｍＲＮＡ阳性　（７２％），５例ＭＡＧＥ一２阳性（２Ｏ％），３例ｈＴＥＲＴ阳　性（１２％），２５例患者至少有一项是阳性，ｈｎＲＮＰ　Ｂ１ｍＲＮＡ阳性率最高。Ｓｕｅｏｋａ等　采用实时ＲＴ—　ＰＣＲ定量分析了４４例肺癌患者血浆中ｈｎＲＮＰ　Ｂ１ｍＲＮＡ，其平均浓度为０．９９　ｐｇ／ｇＲＮＡ，而２５例健　康对照及２４例肺部良性疾病患者分别为０．２３　Ｐｇ／ｇ　ＲＮＡ和０．３０　Ｐｇ／ｇ　ＲＮＡ，明显低于肺癌患者（Ｐ＜　０．０５），２Ｏ例肺癌患者（４５．５％）血浆ＲＮＡ的浓度超　过０．７０Ｐｇ／ｇ，相比较健康对照组只有３例（１２％）超　过其值。Ｉ期肺癌患者３／７（４２．９％）ＩＩ期３／５　（６０％）血浆ｈｎＲＮＰ　Ｂ１　ｍＲＮＡ含量升高，结果表明　ｈｎＲＮＰ　Ｂ１ｍＲＮＡ可望成为肺癌早期诊断的一种无　创或微创的分子标记物。　３．２．２端粒酶ｍＲＮＡ端粒酶的激活是细胞永生　化的必要途径，而永生化是肿瘤发生必要的步骤，端　粒酶表达可能是肿瘤细胞形成和发展的共同途　径Ⅲ　。Ｍｉｕｒａ等¨副采用实时定量ＰＣＲ的方法测定　了１　１２例肺癌患者和８０例血清中端粒酶逆转录酶　ｍＲＮＡ和表皮生长因子受体ｍＲＮＡ含量，结果发现　ｈＴＥＲＴｍＲＮＡ的拷贝数与肿瘤大小、数量、是否转移　复发、吸烟指数独立相关。ｈＴＥＲＴ　ｍＲＮＡ作为标志　物诊断肺癌的敏感性和特异性分别为８９．Ｏ％和　７２．７％，同时发现ｈＴＥＲＴ　ｍＲＮＡ血清中拷贝数与肿　瘤组织中拷贝数呈正相关，表明游离ｈＴＥＲＴ　ｍＲＮＡ　是肺癌诊断和临床分期的新颖特异的标志物。　３．２．３癌胚抗原（ＣＥＡ）ｍＲＮＡ　Ｃａｓｔａｌｄｏ等研究发　现，在３２例肺癌患者中有ｌ７例血清ＣＥＡ　ｍＲＮＡ阳　８８　湖北民族学院学报・医学版　第３期　性，这１７例中１２例在９个月内发生转移，而ｌ５例　血清ＣＥＡ　ｍＰ，￣Ａ阴性患者有ｌ２例随访２４个月未　出现转移，可见游离ＣＥＡ　ｍＲＮＡ检测有助于评价肺　癌患者转移的风险是Ｉｉ缶床治疗的选择之一。　３．２．４　５Ｔ４　ｍＲＮＡ　５３＂４是一种高表达于上皮恶性　肿瘤细胞和胚胎干细胞表面的糖蛋白分子，在胚胎　正常发育中，５３＇４分子促使干细胞有规律的移动，而　在癌组织中，促使癌细胞以一种失控方式扩散。Ｋｏ—　ｐｒｅｓｋｉ等采用半巢式ＲＴ—ＰＣＲ方法测定了１４例肺　癌患者和２５例正常对照者血清中５Ｔ４　ｍＲＮＡ的阳　性率，结果８例肺癌５Ｔ４　ｍＲＮＡ阳性４２％，而对照　组只有３例阳性（１２％）。游离５３＂４　ｍＲＮＡ可以作　为肺癌诊断的标志物。　游离ＲＮＡ作为一个新兴的研究领域，许多方法　和技术尚处于探索阶段。它作为一种非侵入性的早　期检测手段，能在许多领域广泛地应用，目前的研究　中已显示出了良好的发展前景，但是游离ＲＮＡ作为　一种成熟的监测、诊断手段，还需要大样本基础临床　实验，检测技术的标准化。随着循环ＲＮＡ分子的基　础实验及临床研究在深度和广度上的日益加强，也　许在不远的明天，尤其肿瘤相关性游离ＲＮＡ分子的　检测会成为肿瘤早期诊断、鉴别诊断、有效观察及预　后监测中一个重要的检测项目。　［参考文献】　［１］ＴａｌａｌＥＨ，ＳｉｖａＲ，Ｌｏｆｔ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｉｔｏｎ　ｏｆ　ａｍｐｈ・　ｉｆａｂｌｅ．ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ　ＲＮＡ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ａｓ　ａ　ｔｏｏｌ　ｆｏｒ　ｃａｎｃｅｒ　ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｅｍ，２００４，ｓｏ（３）：　５６４—５７３．　［２］Ｅｎｄｅｒｓ　ＫＯ，Ｎａｎｃｙ　ＢＹ，Ｎｉｃｏｌｅ　ＹＬ，ｅｔ　ａ１．Ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ｉｆｌ—　ｔｅｒａｂｌｅ　ａｎｄ　ｎｏｎｆｉｌｔｅｒａｂｌｅ　ｍＲＮＡ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｐｌａｓｍａ　ｏｆ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｐａｔｉｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｈｅａｌｔｈｙ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ【Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｃｍ，２００２，　４８（８）：１２１２—１２１７．　［３］Ｍｉｃｈａｅｌ　Ｓ，Ｋｏｐｒｅｓｋｉ，Ｆｌｏｙｄ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｕｎｌｏｒ　ｍｅｓｓｅｎｇｅｒ　ＲＮＡ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｅｒｕｍ　ｏｆ　Ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　Ｍａｌｉｇｎａｎｔ　Ｍｃｌａｎｏｌｎａ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，１９９９，５（８）：１９６１—　１９６５．　［４］　Ｗｏｎｇ　ＳＣ，Ｌｏ　ＳＦ，Ｃｈｅｕｎｇ　ｂｉＴ，ｅｔ　ａ１．Ｑｕａｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｌａｓｍａ　ｂｅｔａ——ｅａｔｅｎｉｎｍＲＮＡｉｎ　ｅｏｌｏｒｅｃｔｌａ　ｃａｎｃｅｒ　ａｎｄ　ａｄ－・　ｅｎｏｌｎａ　ｐａｔｉｅｎｔｓ，Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２００４，ｌｏ（５）：１　６１３一　ｌ６１７．　［５］Ｂｉｇｇｉｏｇｅｒａ　Ｍ，Ｂｏｔｔｏｌｉｔｃ　ＭＧ，ＰｅＵｉｅｃｉａｒｉ　Ｃ．Ｎｕｃｌｅａｒ　ＲＮＡ　ｉｓ　ｅｘｔｒｕｄｅｄ　ｆｒｏｍ　ａｐｏｐｔｏｔｉｃ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ　Ｃｙｔｏｃｈｅｍ，　１９９８，４６（９）＿－９９９—１００５．　［６］Ｔｓｕｉ　ＮＢ，Ｎｇ　ＥＫ，　ＹＭ．Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ　ａｎｄ　ａｄｄｅｄ　ＲＮＡ　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ，ｓｅｒｔｌｍ，ａｎｄ　ｐｌｓａｍａ［Ｊ］．　Ｃｌｉｎ　Ｃｈｅｍ，２００２，４８（１０）：Ｉ６４７—１６５３．　［７］Ｂｌｅｎｃｈ　ＣＫ，Ｗｏｎｇ　ＫＣ，Ｒｏｓｓａ　ＷＫ，ｅｔ　ａ１．Ｃｉｒｃｕｌａｉｔｎｇ　ｐｌａ－　ｃｅｎｔｌａ　ＲＮＡ　ｉｎ　ｍａｔｅｒｎａｌ　ｐｌａｓｍａ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｄｅ　ｗｉｔＩＩ　ａ　ｐｒｅ．　ｏｐｎｄｅｒｎａｃｃ　ｏｆ５’ｍＲＮＡｆ１＂ａｇｍｅｎｔ８：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｎｏｎｉｎ—　ｖａｓｉｖｅ　ｐｒｅｎａｔａｌ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｅｍ，　２００５，５１（８）：１７８６—１７９５．　［８］Ｂｌｅｎｄａ　ＣＫ，Ｗｒｏｎｇ　ＫＣ，Ａｌｉｅｎ　Ｃｈａｎ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｄｕｃｅｄ　ｐｌａｓａｍ　ＲＮＡ　ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ　ｉｎ　ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌ　ｃａｒｃｉｎｏａｍ　ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．　Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２００６，１２（８）：２５１２—２５１７．　［９］Ｓｕｅｏｋａ　Ｅ，Ｓｕｅｏｋａ　Ｎ，１ｗａｎａｇａ　Ｋ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｔｃｅｔｉｏｎ　ｏｆｐｌａｓ．　ｍａ　ｈｎＲＮＰ　Ｂ１　ｍＲＮＡ，ａ　ｎｅｗ　ｃａｎｃｅｒ　ｂｉｏｍａｒｋｅｒ，ｉｎ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｂｙ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ｐｏｌｙｍｅ，￣ｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ，２００５，４８：７７—８３．　［１０］Ｓｉｌｖａ　ＪＭ，Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ　Ｇ，Ｓｉｌｖａ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｔｃｅｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｐｉ－　ｈｔｃｌｉｌａ　ｍｅｓ∞ｎｇｅｒ　ＲＮＡ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｌａｓｍａ　ｏｆ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｄｅ　ｔｌｌ　ｐｏｏｒ　ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ　ｔｕｍｏｒ　ｃｈａｒａｃ—　ｔｅｒｉｓｉｔｃｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２００１，７（９）：２８２１—　２８２５．　［１１］　王景美，黄培林．循环ＲＮＡ测定与肿瘤外周血微转移　的研究进展【Ｊ］．东南大学学报，２００２，２１（３）：２２５—　２２７．　［１２］Ｃｈｒｉｓｔｉｎａ　Ｋ，Ａｙａ　Ｓ，Ｆｕｍｉｅ　Ｎ，ｅｔ　ａ１．Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ＲＮＡ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｓ　ａ　ｎａｔｕｒａｌ　ｐｒｏｅｏａｇｕｌａｎｔ　ｃｏｆａｃｔｏｒ　ｉｎ　ｂｌｏｏｄ　ｃｏａｇ－　ｌｕａｆｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ　Ｎａｉｌ　Ａｃａｄ　Ｓｃｉ　Ｕ　Ｓ　Ａ，２００７，１０４（１５）：　６３８８—６３９３．　［１３］　Ｆｉｓｃｈｅｒ　ｓ，Ｇｅｒｒｉｅｔｓｅｔ　Ｔ，ｅｔ　１ａ．Ｅｘｔｒａｃｅｌｈｌａｒ　ＲＮＡ　ｍｅｄｉａｔｅｓ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｌ　ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ　ｖｉａ　ｖａＢｅｕｌＢ２ｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｌａ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ［Ｊ］．Ｂｌｏｏｄ，２００７，１１０（７）：２４５７—２４６５．　［１４］Ｓｃｈｍｉｄｔ　Ｂ，Ｅｎｇｅｌ　Ｅ，Ｃａｒｓｔｅｎａｅｎ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｑｕａｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｆｏｆｒｅｅ　ＲＮＡ　ｉｎ　８ｅｒｕｌｎ　ａｎｄ　ｂｒｏｎｃｈｉｌａ　ｌａｖａｇｎ：ａ　ｎｅｗ　ｄｉａｇ－　ｎｏｓｔｉｃ　ｔｏｏｌ　ｉｎ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ？［Ｊ］．Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ，　２００５，４８（１）：１４５—１４７．　［１５］Ｓｕｅｏｋａ　Ｅ，Ｓｕｅｏｋａ　Ｎ，Ｇｏｔｏ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ　ｎｕ－　ｃｌｅａｒ　ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｐｒｏｔｅｉｎ　ＢＩ　ａｓ　ｅ　ｃａｎｃｅｒ　ｂｉｏｍａｒｋｅｒ　ｆｏｒ　ｏｃｃｕｌｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｌｎｕｇｓ　ａｎｄ　ｂｒｏｎｃｈｉａｌ　ｄｙｓｐｌａｓｉａ　［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２００１，６１（５）：ｌ　８９６—１９０２．　［１６］　Ｓｅｈｍｉｄｔ　Ｂ，Ｃａｒｓｔｅｎｓｅｎ　Ｔ，Ｅｎｇｅｌ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｔｃｅｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅＨ—ｆｒｅｅ　ｎｕｃｌｅｉｃ　ａｃｉｄｓ　ｉｎ　ｂｒｏｎｃｈｉａｌ　ｌａｖａｇｅ　ｆｌｕｉｄ　ｓｕｐｅｒ－　ｎａｔａｎｔｓ　ｆｒｏｍ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｈｔ　ｌｎｕｇ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｃａｎｅ－’　ｃｒ，２００４，４０（３）：４５２—４６０．　［１７］Ｙａｎ　Ｐ，Ｃｏｉｎｄｒｅ　ＪＭ，Ｂｅｎｈａｔｔａｒ　Ｊ，ｅｔ　ａ１．Ｔｅｌｏｍｅｒａｃｓ　ａｃ—　ｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｈｕｍａｎ　ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ　Ｉ　ｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｅｒｉｐｔａｓｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｓｏｆｔ　ｔｉｓｓｕｅ　ｔｍｕｏｒｓ：ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｇｒａｄｅ，　ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ。ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ【Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，　１９９９，５９（１３）：３１６６—３１７０．　［１８］ＭｉｕｒａＮ，ＮａｋａｍｕｒａＨ，ＳａｔｏＲ，ｅｔａ１．Ｃｌｉｉｎｃａｌｕｓｅｆｕｌｎｅｓｓ　ｆｏ　ｓｅｍｍ　ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ　ｅｒｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓｕｃ（ｈＴＥＲＴ）ｍＲ－　ＮＡ　ａｎｄ　ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＥＧＦＲ）ｍＲ－　ＮＡ　ａｓ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｔｕｍｏｒ　ｍａｒｋｅｒ　ｏｆｒ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｓｃｉ，２００６，９７（１２）：１　３６６～１　３７３．　［收稿日期２００８—０７—０３］