植物石蜡切片技术改进_赵俊

植物石蜡切片技术改进

赵　俊　木万福　张志星

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(1云南省农业科学院热区生态农业研究所,云南元谋　651300;2云南思农种业公司,云南元谋　651300)

摘　要:以植物龙蒿为材料,为提高试验的效率。在大量的试验基础上,对常规植物石蜡切片技术进行了改进。关键词:石蜡切片;技术;改进

中图分类号　Q81　　　文献标识码　A　　　文章编号　1007-7731(2009)05-69-01

ImprovementofPlantParaffinSectionTechnical

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ZhaoJun　(InstituteofTropical-agriculturalSciencesofYunnanAcademyofAgriculturalSciences,YunnanYuanmou651300,china)Abstract:ThisarticleplantArtemisiadracunculusformaterials,inthemassiveexperimentalfoundation,hasmadetheim-provementtotheconventionalplantparaffinsectiontechnology,aimstoimprovetheefficiencyoftests.Keywords:Paraffinsection;technical;improvement

1　石蜡的精炼

本文所使用的切片石蜡需要进一步加工,方才可以使用。而通常对石蜡的精炼都采用的是高温熔化法,通过多次的熔化、冷却循环来达到石蜡的精炼。常规的石蜡精炼往往由于温度过高,时间把握不准,容易使石蜡颜色发黄,或者燃烧等,从而影响石蜡的使用,造成了极大的浪费。同时在加温过程中石蜡溅出,污染实验工作台,甚至于造成实验人员烫伤等情况。

在对石蜡的安全精炼和不影响品质的原则下,通过反复实验,对石蜡的精炼进行了改进。将100g石蜡放在已经沸腾的、干净无杂质的500mL水中溶化,待石蜡完全融化后2-3min,让其自然冷却。凝固后取出使用即可,如果需要可以多次融化。用水化法对石蜡精炼可以避免常规石蜡精炼中容易出现的状况,也没有常规石蜡精炼中出现的满屋子刺鼻的石蜡味,提高石蜡精炼的速度和质量。

两次梯度,1/2纯酒精、1/2二甲苯与番红配成饱和液2h,二甲苯2h。使用透明剂时,要随时盖紧盖子,以免空气中的水分进入。更换每级透明剂,动作要迅速,一方面为了不使材料块干涸,另一方面能避免吸收湿气。加入番红可以使微小材料容易辨认,也同时可以缩短番红固绿双重染色中番红的染色时间。

5　浸蜡和包埋

自制饱和液体石蜡(37℃),100g石蜡融于500mL二甲苯中,一般需要提前2h准备,需保存于37℃环境中。

将龙蒿花蕾用3-5mL自制饱和液体石蜡中,37℃恒温箱过夜。第2天倒出液体石蜡,换成纯石蜡在58-60℃恒温箱中浸蜡4h,期间要换1-2次纯石蜡。

将经过浸蜡的龙蒿花蕾连同熔化的石蜡,一起倒入置备好的纸盒内,然后立即投入冷水中,使其立刻凝固成蜡块。待石蜡完全凝固(约30min)后即可取出备用。

2　取材以及固定

取龙蒿小花蕾3-5个,剥离外层的小叶片。采用卡诺氏液(CanoysFluid)(纯酒精∶冰醋酸=3∶1)固定液固

定。单瓶固定液使用量3-5mL,固定1h(也可以长期保存)。

6　切片

与常规方法一致,要注意蜡块一定要平整。由于环境温度高,切片时容易黏着在刀上,可以使用冰块来降低切

片机的温度,使用丝绸擦拭刀片,以防止静电造成的黏着现象。

3　脱水

依次使用50%、70%、85%、95%、100%各级乙醇溶液脱水各40-60min,组织中含有大量的水分,脱水不彻底,将影响到与石蜡的包埋。脱水必须在有盖的玻璃品中进行,防止吸收空气中的水分。在更换高一级的脱水剂时,最好不要移动材料以免损坏,可用吸管吸出器皿中的脱水剂,再用吸水吸尽器皿内剩余液,然后于皿中加入高一级脱水剂。如需过夜,应停留在70%酒精中。脱水必须彻底,否则不易透明,甚至使透明剂内出现白色混浊现象。

7　展片、贴片

将前期脱水使用后的酒精过滤稀释成40%溶液,作为展片液。展片后把载玻片放在平盘上编好记号置于37℃温箱烘干,一昼夜干燥后即可取出存放于切片盒待染。

8　脱蜡复水及染色

石蜡切片经二甲苯脱蜡10min,然后放入100%、95%、85%、70%、50%各级酒精溶液中各3-5min。切片放入1%番红溶液中染色约2-4h。室温高时促进染色,染色时间可短些,否则可适当延长时间,冬

(下转90页)

4　透明

作者简介:赵俊(1983-),男,四川人,研究实习员,主要从事蔬菜育种工作。　　收稿日期:2009-02-08

90安徽农学通报,AnhuiAgri.Sci.Bull.2009,15(5)

深入人心、家喻户晓。环保、农业、农机、能源、科委、科协等有关部门要结合自身的业务特点,采取多种形式,将秸秆科学利用技术送到农民手中。通过宣传教育活动,努力使广大干群实现“四个转变”:在认识上,实现秸秆从传统

农业副产品向重要农产品转变;在思路上,实现从单一现场堵截向以疏为主、堵疏结合转变;在机制上,实现秸秆从自给自足利用向商品化利用转变;在管理上,实现秸秆从粗放管理向科学管理转变。3.2　政府要重视,措施要到位　农作物秸秆综合利用是一项社会生态效益高、涉及面广的系统工程,各级政府要加强对秸秆综合利用工作的重视和支持,在注重调查研究和宣传引导的前提下,因地制宜,加大对各项技术的推广支持力度。从全国秸秆产业发展看,秸秆经济已悄然兴起,产业链条逐步延长,社会效益初步显现。而农民的认识,往往有个从不认识到认识,从不自觉到自觉的过程,要充分发挥政府的先导性作用,将其纳入发展循环经济和可持续发展的大局中全盘考虑,给予一定的资金补助,并给相关企业相应的政策支持和引导,也只有这样才能促进秸秆产业逐步发展壮大起来。各地应制定秸秆综合利用规划,各相关部门应结合自己的职能制定秸秆综合利用实施方案,适宜开发什么项目就开发什么项目,特别要把秸秆设施建设与新农村建设结合起来,既有利于秸秆开发,改善村容村貌,又方便农民,发展地方经济。3.3　科学规划,分类指导,发挥好典型示范作用　根据颍上县农业经济等实际情况,制定出农作物秸秆综合利用中长期规划,不能临渴掘井。由于不同地区的综合条件和种植结构不同,规划应充分考虑把外部推动和农民的实际需求结合起来,统筹考虑,统一安排,以便逐步形成区域化、专业化和产业化的经营格局。本着县抓示范区、乡镇抓示范点、示范田、典型引路、示范带动、县场运作的推广方法,按照农民“买得起,用得起,用得好,效益高”的要求,抓紧引进示范高效能、高技术的秸秆利用机械和秸秆利用技术,编报秸秆饲草、秸秆发电、板材加工项目,新建秸秆加工产业化企业,提高秸秆利用效率,如果按80%的利用率1200元/hm计算,每年全县农民可增收3亿元。3.4　依靠科技,全面发展　秸秆的禁烧和综合利用最终要靠科技来解决、靠工业来解决。在现有的科技和生产水(上接69页)季室温低时放入恒温箱中染色。放入50%、70%、85%乙醇中洗去多余的红色,1%的固绿(用95%酒精配制)染色10-30s,95%酒精洗一下,然后放入无水乙醇中3min。二甲苯透明5min。

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平下,大力推广农机新技术,降低留茬高度,改善收集条件,提高秸秆收集率。大力推广秸秆肥料技术,发展畜牧业,过腹还田;抓好秸秆高温堆制、生物菌沤制传统技术推广,生产有机肥;运用快速发酵技术,建没大型有机肥生产

厂,规模化生产有机肥。大力推广食用菌栽培技术,扩大栽培面积,增加栽培品种,推进食用菌产业化经营。大力推广秸秆能源技术,抓好秸秆发电、气化等示范工程项目建设,利用国债项目,广泛开展户用沼气池建设。大力引进外地成功的新技术,不断开辟秸秆综合利用新途径,推进秸秆深层次开发、高层次利用和产业化经营。近期重点在机械化秸秆还田技术及机械化打捆技术上争取有新的突破,努力形成成本低、效益好、群众易接受的农作物秸秆处理利用的模式体系,为今后开展综合利用工作提供有效的技术支撑。

3.5　多方筹资,加大投入　秸秆综合利用是一项投资大、经济效益和社会效益都很显著的“富民”工程。必须多渠道解决好资金问题,加大投资力度。一是充分发挥财政投入的引导作用。政府每年应拿出一定数额的资金,重点支持秸秆还田机推广、秸秆青贮、秸秆发展食用菌、秸秆气化、秸秆发电和新技术开发等。二是有关部门应根据自己的业务范围,尽快编制一批秸秆综合利用项目,积极向上级争取资金。三是金融部门应调整信贷结构,扩大信贷规模,积极支持秸秆综合利用方面的高新技术产品开发。四是调动集体和农民的投资积极性,发挥其投资主体作用。五是扩大招商引资,吸引外地客商来我市投资秸秆深加工项目,促进我县农作物秸秆综合利用向系列化开发、产业化经营方向发展。

3.6　产业化运作,发展农作物秸秆综合利用大产业　秸秆的综合利用是农业生产中的一个重要环节,秸秆的工厂化处理为秸秆的大量合理利用提供了新途径,对广大农民来说,大量的秸秆成了可以出售的商品,对企业来说则是很有潜力新兴产业。各级政府应引导农民以科技为依托、产业为导向,实现秸秆产业化经营。要跳出现有秸秆处理方式框架,找到新的、技术可行的、适合本地区的各种利用方式,并把它产品化、工业化,最终走向产业化。从国际上看,秸秆综合利用完全可以造就大产业,形成大气候,而不是副业。注重给秸秆找出路,关键是在注重使农民在开展秸秆综合利用中有效益,得实惠。

对常规石蜡切片技术进行合理的改进,试验表明,此方法大大缩短了实验所需的时间,提高了实验效率,改进后的切片技术所产生的切片图象质量也比常规的提高了许多。

参考文献

[1]李正理.植物制片技术.北京:科学出版社,1987[2]曾小鲁.实用生物制片技术.北京:高等教育出版社,1989[3]芮菊生,杜懋琴,等.组织切片技术.北京:人民教育出版,1980[4]黄承芬.生物显微制片技术.北京:北京科学出版社,1991[5]俘文瑜.生物科学摄影技术.上海:复旦大学出版社,1990

9　中性树胶封藏

从二甲苯中取出染好色的片子,用中性树胶进行封片。封片用的盖玻片要清洁,封片时要注意不要产生气泡。封好片后,放于37℃温箱烘干。永久保存。

10　小结

(责编:胡贤江)