茶皂素与四种抗菌药物的体外联合抗菌效果研究

动物医学进展。２０１３，３４（８）：１１９－１２２　Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　ｉｎ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　茶皂素与四种抗菌药物的体外联合抗菌效果研究　潘任桃，卢素云，刘兆颖，孙志良　（湖南农业大学动物医学院国家植物功能成分利用工程技术研究中心生物兽药分中心，湖南长沙４１０１２８）　摘　要：为探究茶皂素与其他抗茵药物对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的体外联合抗茵效果，采用琼脂　稀释法、多孔板一ＭＴＴ比色法和棋盘法，分别测定了茶皂素与庆大霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、氨苄青霉素对　大肠埃希茵、金黄色葡萄球菌的最小抑茵浓度（ＭＩＣ）及分级抑茵浓度（ＦＩＣ）指数。结果显示多孔板一ＭＴＴ　比色法与琼脂稀释法结果一致率为８７．５　；联合使用中，茶皂素与４种抗菌药物都表现为相加作用。　关键词：茶皂素；联合抗茵；ＭＴＴ；最小抑茵浓度；分级抑茵浓度　中图分类号：０６２９．１３；￥８５９．７９６　文献标识码：Ｂ　文章编号：１０Ｏ７—５Ｏ３８（２Ｏ１３）Ｏ８一Ｏ１１９一Ｏ４　大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌是引起感染的主　要病原菌，为了有效的防治由大肠埃希菌、金黄色葡　萄菌引起的感染，多采用联合用药的方式，兽医临床　上有庆大霉素＋磷霉素，恩诺沙星＋头孢三嗪，氟苯　尼考＋盐酸土霉素等［Ｊ　］。随着大肠埃希菌、金黄色　葡萄球菌对相关抗菌药物敏感性降低，抗菌药物的　使用剂量也不断加大Ｉ６］。茶皂素是从山茶科植物中　提取出来的天然活性物质［７　］，具有代谢快、残留少、　毒性低等特性，可提高动物机体免疫力，降低胆固醇　含量，增加料肉比等优点Ｅ９－１ｏ３，目前作为一种饲料添　加剂广泛应用于养殖行业。茶皂素具有较强的杀钉　螺［１　、杀真菌能力Ｅ１２３，也具有一定的抗细菌效　收稿日期：２０１３—０３—０６　基金项目：湖南省科技重大专项（２０１２ＦＪ１００４—３）　果Ｉ－Ｍ３，目前尚未见到关于茶皂素与抗菌药物联合用　药的研究报道，本试验旨在通过观察茶皂素与相关　抗菌药物的联合抑菌效果，探讨动物细菌性疾病治　疗的药物组合。　１材料与方法　１．１　材料　１．１．１　药物与试剂　庆大霉素标准品，批号　ＣＤＲＣ—Ｇ３６Ｏ５９５，由中国兽药监察所提供；氟苯尼考　原料药，批号２００９０７００１，宁夏太平洋生物制药有限　公司产品；恩诺沙星原料药，批号Ｚ０５７２１—２，湖南麓　谷医药制品有限公司产品；氨苄青霉素，批号Ｂ１１０一　作者简介：潘任桃（１９８８一），女，湖南岳阳人，硕士研究生，主要从事兽医药理学与毒理学研究。＊通讯作者　Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔｅｎｃｅ　Ｔｅｓｔ　ｏｆ　Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ　ｊｅｊｕｎｉ　ｆｒｏｍ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｏｕｒｃｅ　ＹＡＮＧ　Ｓｈｅｎｇ—ｎａｎ　，ＷＡＮＧ　Ｊｕａｎ　，ＺＨＥＮＧ　Ｚｅｎｇ—ｒｅｎ。，ＺＨＡＮＧ　Ｌｅ—ｃｕｉ　，　ＱＵ　Ｚｈｉ—ｎａ　，ＨＵＡＮＧ　Ｘｉｕ—ｍｅｉ。，ＬＩ　Ｙｕ—ｑｉｎｇ　（１　ＱｉｎｇｄａｏＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｎｇｄａｏ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，２６６１０９，Ｃｈｉｎａ；　２．ＣｈｉｎａＡｎｉｍａｌ　Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｑｉｎｇｄａｏ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，２６６０３２，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｄｒｕｇ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｏｕｒｃｅ　Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ　ｊｅｊｕｎｉ。ｄｒｕｇ　ｓｕｓｃｅｐｔｉ—　ｂｉｌｉｔｙ　ｗａｓ　ｔｅｓｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　Ｅ—Ｔｅｓｔ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｗｅｎｔｙ－ｔｗｏ　ｓｔｒａｉｎｓ　Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　１２０　ｃｈｉｃｋｅｎ　ａｐｐｅｎｄｉｘ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ａｎｄ　１６　Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　５０　ｓｗｉｎｅ　ａｐｐｅｎｄｉｘ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｉｎ　Ｑｉｎｇｄａｏ　ｓｌａｕｇｈｔｅｒｈｏｕｓｅ，ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　１８．３３　ａｎｄ　３２％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｃｈｉｃｋｅｎ　ａｎｄ　ｐｉｇ　ｓｏｕｒｃｅｓ　ｏｆ　Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ　ｓｈｏｗｅｄ　ｈｉｇｈ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ（ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　８０　），ｔｏ　ｎａｐｈｔｈａ－　ｌｅｎｅ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ（ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　５０　）．Ｃｈｉｃｋｅｎ　ｓｏｕｒｃｅ　Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ　ｔｏ　ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ　ｗａｓ　ｍｏｒｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　（８６　），ａｎｄ　ｐｉｇ　ｓｏｕｒｃｅ　Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ　ｔｏ　ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ　ａｎｄ　ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ　ｗａｓ　ｍｏｒｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ｔｈｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｒｅａｃｈｅｄ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　８１．２　，８７．５　．Ｉｔ　ｉｓ　ｃｏｎｃｌｕｄｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｏｕｒｃｅｓ　ｏｆ　Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ　ｖａｒｙ　ｉｎ　ａ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｄｅｇｒｅｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ　ｊ　ｅｊ　ｕｎｉ；ｉｓｏｌａｔｉｏｎ；ｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔｅｎｃｅ；ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　１２Ｏ　动物医学进展２０１３年第３４卷第８期（总第２４２期）　００６１４，上海创赛仪器有限公司产品；茶皂素，含量　９３．５　，湖南农业大学提供；琼脂粉，批号１００１１５，　上海蓝季科技发展有限公司产品；蛋白胨，批号　０８０４１０，上海蓝季科技发展有限公司产品；酵母粉，　批号ＬＰ００２１，英国Ｏｘｏｉｄ公司产品；营养琼脂，批号　０８０３１０，北京陆桥技术有限责任公司产品；氯化钠，　批号Ｆ２０１００３３０，国药集团化学试剂有限公司产品；　ＭＴＴ试剂盒，批号Ｃ０００９，碧云天生物技术研究所　产品。　１．１．２　试验茵株　致病性大肠埃希菌和耐药金黄　色葡萄球菌，由湖南农业大学兽药工程研究所提供。　１．１．３　主要仪器　ＳＷ—ＣＪ一２ＦＤ型双人单面净化工　作台，苏州净化设备公司产品；ＬＲＨ一２５０一Ｓ型恒温　恒湿培养箱，广东省医疗器械厂产品；Ｉｎｆｉｎｉｔｅ　Ｆ５０　酶标仪，瑞士ＴＥＣＡＮ；ＤＨＧ一９２４０Ａ型电热鼓风干　燥箱，上海精宏试验设备有限公司产品；ＹＸＱ—ＬＳ一　５０Ｓ１Ｉ型立式电热压力蒸汽灭菌器，上海博迅公司　医疗设备厂产品；ＨＨＳＹＩ１－Ｎｉ２型电热恒温水浴　锅，北京长源实验设备厂产品；ＡＹ２２Ｏ型电子天　平，日本Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ　Ｂａｌａｎｃｅ公司产品；微量可调移　液器，德国Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司产品。　１．２方法　１．２．１　抗菌药物储备液的配置　准确称取庆大霉　素、氟苯尼考、恩诺沙星，分别配置成浓度为３　０００、　１　６００、４８０　ｌ￣ｇ／ｍＬ的母液；氨苄青霉素稀释成　１００　ｐ．ｇ／ｍＬ，备用。其中，氟苯尼考用酒精助溶，恩　诺沙星用ＮａＯＨ助溶。　１．２．２　菌悬液的配置　菌种复苏，培养２４　ｈ，平板　计数法进行细菌计数后，用ＬＢ培养基配置成１×　１０　ｃｆｕ／ｍＬ。　１．２．３　最小抑茵浓度测定　１．２．３．１　琼脂稀释法　琼脂稀释法药敏试验和结　果判读按照新版ＣＬＳＩ＿１　推荐的琼脂稀释法进行，　设置３个重复。分别测定庆大霉素、氟苯尼考、恩诺　沙星、氨苄青霉素对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的　最小抑菌浓度（ｍｉｎｉｍｕｍ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，　ＭＩＣ），菌悬液浓度为１×１０　ｃｆｕ／ｍＬ，各药物设置　１２个浓度，置３７℃恒温恒湿培养箱培养１８　ｈ～　２４　ｈ，观察结果，以无菌生长的最低浓度为该药单独　用药时的ＭＩＣ。　１．２．３．２多孔板一ＭＴＴ比色法　参照微量肉汤稀　释法测定各抗菌药物单独用药时的ＭＩＣ值。将各　药物以灭菌ＬＢ倍比稀释成１２个浓度，分别取　１００　Ｌ依次加入９６孔板，再将１×１０　ｃｆｕ／ｍＬ菌液　１００　ｕＬＪＪＩＩＡ￣Ｌ中，３７℃过夜培养１８　ｈ～２４　ｈ，加入　５　ｍｇ／ｍＬ的ＭＴＴ　１０　Ｌ，继续培养４　ｈ，加入１００　Ｌ　溶解液，培养１５　ｍｉｎ，酶标仪５７０　ｎｍ处测定吸光值　Ａ。以被抑制达７５　９，６的孔的药液质量浓度作为该药　物的ＭＩＣ值。各药物浓度设置３个重复［１　。　。　１．２．４联合药敏试验采用多孔板一ＭＴＴ比色法，　按照棋盘法设置药物浓度（３个重复），分别测定茶　皂素与庆大霉素、氟苯尼考、恩诺沙星、氨苄青霉素　的联合体外抗菌活性，以各药物对应ＭＩＣ值的２、　１、１／２、１／４、１／８倍等浓度分别进行联合药敏试验。　置３７℃恒温恒湿培养箱培养１８　ｈ～２４　ｈ，观察结　果。　试验结果以分级抑菌浓度（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｏ—　ｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＦＩＣ）指数作为联合药敏试验的判　断依据：ＦＩＣ≤０．５为协同作用；０．５＜ＦＩＣ≤１为相　加作用；１＜ＦＩＣ≤２为无关作用；ＦＩＣ＞２为拮抗作　用。　ＦＴｒ一　一　Ａ药单用时的ＭＩＣ’Ｂ药单用时的ＭＩＣ　金盟　！　４一旦垫　金盟　２　结果　２．１　单独用药的最小抑菌浓度　由表１可知，多孔板一ＭＴＴ比色法和琼脂稀释　法的结果一致率为８７．５　；且与４种抗菌药物相　比，茶皂素的ＭＩＣ值较大，为０．８×１０　／ｘｇ／ｍＬ。　２．２体外联合药敏试验结果　由表２、表３可知，茶皂素与试验所用抗菌药物　表现为相加作用，联合用药后，庆大霉素、氟苯尼考、　恩诺沙星、氨苄青霉素、茶皂素对大肠埃希菌的　ＭＩＣ值分别为单独用药的１／６４、１／３２、１／６４、１／３２、　１／２；对金黄色葡萄球菌的ＭＩＣ值分别为单独用药　的１／３２、１／８、１／４、１／８、１／２。　３讨论　多孔板一ＭＴＴ比色法是通过细胞琥珀酸脱氢酶　等将黄色的ＭＴＴ变成紫色的甲躜，在ＯＤ　５７０　ｎｍ　处测定其吸光值，ＯＤ值的大小与活细胞含量成正　比，死细胞没有此功能，因此，ＭＴＴ法可用于测定　活细胞含量［１４－１５］。琥珀酸脱氢酶等是细胞代谢反应　中最基本的酶系之一，在哺乳动物细胞中仅存在于　线粒体，参与三羧酸循环的脱氢反应；而在细菌中，　琥珀酸脱氢酶存在于质膜、间体，因此ＭＴＴ不仅可　用于细胞试验，还可用于细菌、真菌试验，提示　ＭＴＴ可用于抗菌药物ＭＩＣ值测定［１。　。且与琼脂　稀释法相比，多孔板－ＭＴＴ比色法所需样品含量少，　能对多个样品进行快速检测，进行结果判读所得的　ＭＩＣ值更为准确、客观，结果可量化。　潘任桃等：茶皂素与四种抗菌药物的体外联合抗菌效果研究　１２１　庆大霉素Ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ　氟苯尼考Ｆｌｏｒｆｅｎｉｃｏｌ　恩诺沙星Ｅｎｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ　氨苄青霉素Ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ　茶皂素Ｔｅａ　ｓａｐｏｎｉｎ　注：ＭＩＣ　为琼脂稀释法所测得的ＭＩＣ值，ＭＩＣ　为多孔板一ＭＴＴ比色法所测得的ＭＩＣ值。　Ｎｏｔｅｓ：ＭＩＣ　ｍｅａｎｓ　ｔｈｅ　ＭＩ∞　∞　Ｃ　ｏｆ　ａｇａｒ　ｄｉ叭　ｍ　ｌｕｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ，ＭＩＣ　ｍｅａｎｓ　ｔｈｅ　ＭＩＣ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ—ＭＴＴ　ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ．　表２　茶皂素与４种抗菌药物对大肠埃希菌的体外联合试验　Ｔａｂｌｅ　２　Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｅａ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｆｏｕｒ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｅ．ｃｏｌｉ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｂｃｇ／ｍＬ　弘　∞　¨　注：ＭＩＣ　为单独用药时的ＭＩＣ值，ＭＩＣ。为联合用药时的ＭＩＣ值。　Ｎｏｔｅｓ：ＭＩＣ　ｍｅａｎｓ　ｔｈｅ　ＭＩｍ瑚加　瑚　Ｃ　ｏｆ吼　　ｓｉｎｇｌｅ　ｍｅｄｉ８　Ｏ　ｃａｔｉｏｎ，ＭＩＣ。ｍｅａｎｓ　ｔｈｅ　ＭＩＣ　ｏｆ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ—ｕｓｅ　ｏｆ　ｄｒｕｇｓ．　表３　茶皂素与４种抗菌药物对金黄色葡萄球菌的体外联合试验　Ｔａｂｌｅ　３　Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｅａ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｆｏｕｒ　ｋｉｎｄｓ　ｏｆ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ￣ｇ／ｍＬ　Ｏ　∞　∞　～　注：ＭＩＣ　为单独用药时的ＭＩＣ僵，ＭＩＣ　为联合用药时的ＭＩＣ值。　Ｎｏｔｅｓ：ＭＩＣ　ｍｅａｎｓ　ｔｈｅ　ＭＩＣ　ｏｆ　ｓｉｎｇｌｅ　ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎ，ＭＩＣ。ｍｅａｎｓ　ｔｈｅ　ＭＩＣ　ｏｆ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ—ｕｓｅ　ｏｆ　ｄｒｕｇｓ．　单一用药结果显示，多孔板一ＭＴＴ比色法与琼　也有可能是其对细菌造成的氧化性损伤［２　，增强了　脂稀释法的结果一致率达到８７．５　，因此在联合用　病原菌对抗菌药物的敏感性。　药过程中，为了使结果更为准确，加快试验进度，采　由此可见，茶皂素与抗菌药物联合用药，可扩大　取多孔板一ＭＴＴ比色法。从试验结果可看出，联合　抗菌药物的抗菌谱、减少抗菌药物的用量，可望治疗　用药中ＦＩＣ值都在０．５～１，属于相加作用，药物的　混合感染。　ＭＩＣ值较单独用药时的ＭＩＣ值都有不同程度的降　参考文献：　低：茶皂素联合用药时的ＭＩＣ为单独用药的１／２，４　［１３　Ｃｏｒｖｅｃ　ｓ，ＴａｆｉｎＵ　Ｆ，Ｂｅｔｒｉｓｅｙ　Ｂ，ｅｔ　ａ１．Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆｆｏｓｆｏｍｙｃｉｎ，　种抗菌药物联合用药时的ＭＩＣ为单独用药时ＭＩＣ　ｔｉｇｅｃｙｃｌｉｎｅ，ｃｏｌｉｓｔｉｎ　ａｎｄ　ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ　ａｇａｉｎｓｔ　ｅｘｔｅｎｄｅｄ—ｓｐｅｃｔｒｕｍ一　的１／４～１／３２，抗菌药物的使用量都得到大幅度的　￣－ｌａｃｔａｍａｓｅ－ｐ　ｄｕ　ｎｇ　曲　”　“　ｆｏｒｅｉｇｎ－ｂｏｄｙｍ　降低。这４种抗菌药物的杀菌机理各有差异，抑制ｔｉｏｎ　。ｄｅ　＿Ｊ］・Ａ　ｉ　ｏｂ　Ａｇｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐ，２０１３，５７　蛋白质的合成、阻碍ＤＮＡ的复制、增大细胞壁的通　［２］聂爱华，徐俐瑜，饶小红，等．美洛西林的严重不良反应及其防　透性　。联合用药中，茶皂素的增效作用可能是　治［Ｊ］．临床合理用药，２ｏ１ｏ，３（８）：１２５—１２６．　茶皂素的表面活性剂性质　加大了抗菌药物与细　［３］刘智明，苑丽，徐航，等．恩诺沙星与克林霉素联用体外抗　菌接触的表面积，提高了抗菌药物的有效作用浓度；　菌活一ＮＮ￣ＥＪ］．中国兽医药杂志，２００９，２（３１）：３１—３３．　１２２　动物医学进展２０１３年第３４卷第８期（总第２４２期）　ｔｅｓｔｉｎｇ　ｏｆ　ｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓ　ｆｕｎｇｉ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ａ　ｎｅｗ　ｓｉｍｐｌｉ—　［４］李荣誉，周延州．家禽常用抗生素的联合用药［Ｊ］．中国家禽，　２０１２，３４（１０）：４１—４４．　ｌｆｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０００，３８（８）：２９４９—２９５４．　［１５］Ｗａｎｇ　Ｈ　Ｗ，Ｃｈｅｎｇ　Ｈ　Ｒ，Ｗａｎｇ　Ｆ　Ｑ，ｅｔ　ａ１．Ａｎ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　３－（４，　５－ｄｉｍｅｔｈｙｈｈｉａｚｏｌ－２一ｙ１）一２，５－ｄｉｐｈｅｎｙｌ　ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ　［５］周文中，毕可东，邹本革，等．氟苯尼考与盐酸土霉素体外联合　抑菌效果研究［Ｊ］．中国畜牧兽医，２０１１，３８（７）：２０１—２０３．　［６］胡付品，朱德妹，汪　复，等．２０１１年中国ＣＨＩＮＥＴ细菌耐　药性监测［Ｊ］．中国感染与化疗杂志，２０１２。１２（５）：３２１—３２９．　［７］Ｍａｔｓｕｉ　Ｙ，Ｋｏｂａｙａｓｈｉ　Ｋ，Ｍａｓｕｄａ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ｉｎ　ａ　ｔｅａ—ｌｅａｆ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ａｎｔｉｈｙｐｅｒｃｈｏｌｅｓｔｅｒ—　（ＭＴＴ）ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ａｓｓａｙ　ｆｏｒ　ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　Ｅｓｃｈｅ—　ｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　Ｍｅｔｈ，２０１０，８２（３）：３０—３３３．　［１６］Ｌｏｒｅｔｏ　Ｓ　Ｅ，Ａｌｖｅｓ　Ｄ，Ｍａｒｉｏ　Ｎ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［Ａ６０］ｓｕｓｃｅｐｔｉ～　ｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｐｙｔｈｉｕｍ　ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍ　ｔｏ　ｍａｃｒｏｌｉｄｅｓ　ａｎｄ　ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ　ａｎ—　ｏｌｅｍｉｃ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．Ｂｉｏｓｃｉ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，２００９，７３（７）：　１５１３—１５１９．　ｔｉｂｉｏｔｉｃｓ［Ｊ］．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ　Ａｇｅｎｔ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２０１１，５５（７）：　３５８８—３５９０．　［８］Ｌｉ　Ｙ，Ｄｕ　ＹＭ，Ｚｏｕ　Ｃ．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｐＨ　ｏｎ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｎｄ　ａｎｔｉｍｉ—　ｃｒｏｂｉａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｅａ　ｓａｐｏｎｉｎｓ［Ｊ］．Ｅｕｒｏ　Ｆｏｏｄ　Ｒｅｓ　Ｔｅｃｈｎｏｌ，　２００９，２２８（６）：１０２３－１０２８．　［１７］Ｂａｚｚａｚ　Ｂ　Ｓ，Ｄｕ　Ａ　Ｒ，Ｉｒａｎｓｈａｈｉ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｏｔｅｎ—　ｔｉａｔｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｇａｌｂａｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｆｒｏｍ　ｆｅｒｕｌａ　ｓｚｏｗｉｔｓｉａｎａ　ｏｎ　ｔｈｒｅｅ　ｃｏｍｍｏｎ　ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｏｆ　［９３李俊，张爱玉，齐永杰，等．茶树油粕中茶皂索研究进展［Ｊ］．　Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ［Ｊ］．Ｉｒａｎｉａｎ　Ｊ　Ｐｈａｒｍａｅｅ　Ｒｅｓ，２００９，８　（３）：２１７—２２１．　食品科学，２０１２，３３（１）：２７６—２７９．　［１Ｏ］周红茂，黄蓓，丁红明，等．糖萜素代替药物添加剂对肉鸡生　［１８］Ｄａｖｉｄ　Ｇ，Ｗｈｉｔｅ，Ｈｕｄｓｏｎ　Ｃ，ｅｔ　ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｌｏｒａｍ—　ｐｈｅｎｉｅｏｌ　ａｎｄ　ｆｌｏｒｆｅｎｉｅｏｌ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｉｎ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　ａｓｓｏｃｉａｔ—　产性能的影响［Ｊ］．中国畜牧兽医，２００５，３２（１０）：１３—１４．　［１１］Ｈａｏ　Ｗ　Ｎ，Ｌｉ　Ｈ，Ｈｕ　Ｍ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｃｉｔｒｕｓ　ｇｒｅｅｎ　ａｎｄ　ｂｌｕｅ　ｍｏｌｄ　ａｎｄ　ｓｏｕｒ　ｒｏｔ　ｂｙ　ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａ—　ｅｄｗｉｔｈ　ｂｏｖｉｎｅ　ｄｉａｒｒｈｅａ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２０００，８（１２）：　４５９３－４５９８．　ｃｉｅｎｓ　ｉｎ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｅａ　ｓａｐｏｎｉｎ［Ｊ］．Ｐｏｓｔｈａｒｖｅｓｔ　Ｂｉｏｌ　Ｔｅｅｈｎｏｌ，２０１ｌ，５９（３）：３１６—３２３．　［１９］Ｂａｉ　Ｈ，Ｓｕ　Ｗ　Ｚ，Ｚｈｕ　Ｘ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｎｒｏｆｌｏｘａｅｉｎ　ｏｎ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｐｒｏｆｉｌｅｓ　ｏｆ　Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ［Ｊ］．Ａｎｎａｌｓ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，　２Ｏ１０，１０（４）：６５３—６６０．　［１２］张楚霜，张晴，石梦芝，等．茶皂素对钉螺肝脏和生殖腺作用　的电镜观察［Ｊ］．中国血吸虫病防治杂志，２００２，６（２）：４５３—　４５４．　［２Ｏ］Ｌｉ　Ｍ，Ｚｈｏｎｇ　Ｈ　Ｙ，Ｃｈｅｎ　Ｙ　Ｚ．Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｅａ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｓｈｅｌｌ　ｏｆ　ｏｉｌ—ｔｅａ　ｃａｍｅｌｌｉａ　ｓｅｅｄｓ［ｃ］／／Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　２０１２　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｎ　Ｍｅｃｈａｎｉｃａ１　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ａｎｄ　Ｍａ—　ｔｅｒｉａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ａｔｌａｎｔｉｓ　Ｐｒｅｓｓ，２０１２：４５１—４５６．　［１３］蒋丽．茶皂素超声提取一纯化新工艺及产物抗菌活性研究　［Ｄ］．重庆：重庆理工大学，２０１１．　［１４］Ｍｅｌｅｔｉａｄｉｓ　Ｊ，Ａｃｑｕｅｓ　Ｆ　Ｇ　Ｍ，Ｊｏｈａｎ　Ｗ，ｅｔ　ａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ＮＣＣＬＳ　ａｎｄ　３－（４，５－ｄｉｍｅｔｈｙｌ一２一ｔｈｉａｚｙ１）－２，５－ｄｉｐｈｅｎｙｌ一２Ｈ—ｔｅｔ—　ｒａｚｏｌｉｕｍ　ｂｒｏｍｉｄｅ（ＭＴＴ）ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　［２１］董敬娜，敬佩，李光德，等．茶皂紊对油菜幼苗生长发育及抗　氧化酶系统的影响［Ｊ］．中国油料作物学报，２０１１，３３（２）：１８５—　１８８．　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ　ｏｆ　Ｔｅａ　Ｓａｐｏｎｉｎ　Ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ　ｗｉｔｈ　Ｆｏｕｒ　Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓ　ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　ＰＡＮ　Ｒｅｎ—ｔａｏ，ＬＵ　Ｓｕ－ｙｕｎ，ＬＩＵ　Ｚｈａｏ—ｙｉｎｇ，ＳＵＮ　Ｚｈｉ—ｌｉａｎｇ　（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｄｒｕｇｓ　Ｂｒａｎｃｈ．Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｆｏｒ　Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂｏｔａｎｉｃａｌ　ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＩｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ。Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＨｕｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｈｕｎａｎ，４１０１２８，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｌｅ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ　ｏｆ　ｔｅａ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌｓ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｅ．　ｃｏｌｉ　ａｎｄ　ｓｔ８ｐｈ　￡０ｃ０ｃｃ髓ｓ　ａｕｒｅｕｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ，ｔｈｅ　ｃｌａｓｓｉｃａｌ　ａｇａｒ　ｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ，ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ—ＭＴＴ　ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｃｈｅｃｋｅｒｂｏａｒｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ　ｏｆ　ｔｅａ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｗｉｔｈ　ｇｅｎｔａｍｉ—　ｃｉｎ，ｆｌｏｒｆｅｎｉｃｏｌ，ｅｎｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ　ａｎｄ　ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｅ．ｃｏｌｉ　ａｎｄ　Ｓ　口　矗　Ｚ０ｃ０ｃｃ“ｓ　ａｕｒｅｕｓ　ｗｅｒｅ　ｔｅｓｔｅｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ，　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｉｎｉｍｕｍ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＭＩＣ）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＦＩＣ）ｗｅｒｅ　ｃａｔ—　ｃｕｌａｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅ　ｒａｔｅｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ—ＭＴＴ　ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｅａｓｉｅｒ　ｔｈａｎ　ｃｌａｓｓｉｃａｌ　ａｇａｒ　ｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗｅｒｅ　８７．５　，ａｎｄ　ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ—ＭＴＴ　ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｅａｓｉｅｒ　ｔｈａｎ　ｃｌａｓｓｉｃａｌ　ａｇａｒ　ｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｔｅｓｔ，ｔｅａ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｆｏｕｒ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉ—　ａｌｓ　ｈａｄ　ａｄｄｉｔｉｖｅ　ａｃｔｉｏｎｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｔｅａ　ｓａｐｏｎｉｎ；ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ；ＭＴＴ；ｍｉｎｉｍｕｍ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ；ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ　ｉｎ—　ｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ