α1抗胰蛋白酶缺乏症的研究进展

国际检验医学杂志２０１３年５月第３４卷第９期Ｉｎｔ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，Ｍａｙ　２０１３，Ｖｏ１．３４，Ｎｏ．９　・综　述・　１抗胰蛋白酶缺乏症的研究进展　秦　莉综述，罗光华△审校　（常州市第一人民医院综合实验室／常州市个性化诊疗高技术研究重点实验室，江苏常州２１３００３）　关键词：ａｌ抗胰蛋白酶缺乏症；ａ１抗胰蛋白酶；基因型；肝硬化；肺气肿　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３０．２０１３．０９．０２４　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７３—４１３０（２０１３）０９—１１１１～Ｏ４　ａ１抗胰蛋白酶缺乏症（ａｌｐｈａ１一ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ，　的复制和传染，包括人类免疫缺陷病毒　］。　２　ＡＡＴＤ的相关特性　ＡＡＴＤ）是一种严重的基因紊乱性疾病，主要是由于编码ａ１抗　胰蛋白酶（ａｌｐｈａ１一ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ，ＡＡＴ）的基因突变引起血浆中蛋　白酶抑制剂ＡＡＴ的缺乏，从而使中性粒细胞弹性蛋白酶与蛋　白酶抑制剂之间的平衡遭到破坏，中性粒细胞释放的弹性蛋白　酶、组蛋白酶不断积累并降解肺组织的弹性蛋白，损伤肺泡的　弹性纤维，破坏肺泡间隔，从而导致肺气肿＿１］。该疾病的临床　表现多样，其中主要引起肺气肿、肝硬化，极少引起致死性脂膜　炎和继发性脉管炎。１９６３年Ｃａｒｌ～Ｂｅｒｔｉｌ　Ｌａｕｒｅｌｌ与Ｓｔｅｎ　Ｅｒｉｋｓ—　ｓｏｎ首次报道了ＡＡＴＤ，他们认为血清ＡＡＴ水平低下与肺气　肿的发生有很大关系［２］。此后，ＡＡＴＤ的发病机制和基因异　常得到进一步研究。ＡＡＴＤ主要是由于编码ＡＡＴ蛋白的基　因突变引起ＡＡＴ的含量降低。它是一种常染色体共显性遗　传，符合孟德尔遗传定律Ｌ３］。该疾病的主要突变类型是ＰＩＺ和　ＰＩＳ型，其中ＰＩＺ型为３４２位谷氨酸（ＧＡＧ）突变为赖氨酸　（ＡＡＧ），ＰＩＳ型为２６４位的谷氨酸（ＧＡＡ）突变为缬氨酸　（ＧＴＡ）Ｅ４３。ＰＩＺＺ型纯合突变体可引起严重的疾病，这种突变　型是引起呼吸道症状的一个危险因素ｌ２］。另外，环境因素如吸　烟、粉尘等能加重疾病的进程。ＰＩＺＺ型也可以导致儿童期和　成年期的急慢性肝损伤　］。另外，有研究显示ＡＡＴＤ可以增　加肝癌、膀胱癌、结直肠癌、胆囊腺癌和恶性淋巴瘤等肿瘤的发　病风险。虽然ＡＡＴＤ在肺癌发展中的确切作用未知，但已证　明携带ＡＡＴＤ等位基因的患者可增加肺癌的发病风险［５］。　１　ＡＡＴ的分子、蛋白特性　ＡＡＴ是体内一种重要的丝氨酸蛋白酶抑制剂，主要由肝　细胞合成的相对分子质量为５２　０００的蛋白，但是也可由单核　细胞、巨噬细胞、肺泡细胞、肠上皮细胞和角膜上皮细胞合　成　］。它主要在肺脏中发挥生理功能，保护肺弹性组织免　受中性粒细胞弹性蛋白酶的降解。该蛋白由位于１４号染色体　ｑ３１—３２．３的蛋白酶抑制剂基因编码，即ＳＥＲＰＩＮＡ１基因，该　基因长１２．２　ｋｂ，包括４个编码外显子，３个非编码的外显子和　６个内含子ｌ７］。肝细胞和单核细胞都有编码该基因的启动子，　分别通过不同的机制介导。ＡＡＴ的半衰期为５　ｄ，其蛋白组成　包括３９４个氨基酸和３个与天冬氨酸相偶联的糖基化侧链，这　些侧链对延长ＡＡＴ分子的半衰期有很重要的作用ｒ２　］。ＡＡＴ　是一种急性时相反应蛋白，在炎症、感染期患者的血浆中，　ＡＡＴ含量会增加３～４倍。在口服避孕药治疗和妊娠期间，其　含量也会增加口］。大量实验证实，ＡＡＴ参与炎症反应的调　节。。］。另外，ＡＡＴ的主要功能是抑制胰蛋白酶，可抑制中性粒　细胞弹性蛋白酶的活性。ＡＡＴ也可以抑制或减慢细菌、病毒　＊　基金项Ｅｔ：江苏省常州市科学技术局资助项目（ＣＭ２０１１３００７）。　方面的研究。　通讯作者，Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｈｉｎｅｒｏａｒ＠１６３．ｃｏｍ。　２．１病理生理学特性　ＡＡＴ的基因突变类型很多，大约有　１００多种已经被鉴定。其中，最常见的突变类型ＰＩＺ和ＰＩＳ　型。不同的突变类型与肺气肿的患病风险有很大关联，ＰＩＺＺ　型和无效基因型的个体患病风险最高，９５　的临床相关缺陷的　患者是ＰＩＺＺ基因型；ＰＩＳＺ的个体有中等强度的患病风险。血　浆ＡＡＴ的相对检测阈值是１１／ｘｍｏｌ／Ｌｌ＿１　，如果低于该值应怀　疑其有相关突变并需要做进一步的检查。ｚ型突变是３４２位　的谷氨酸被赖氨酸取代，Ｓ型突变是２６４位的谷氨酸被缬氨酸　取代。还有一些罕见突变，如Ｍｍａｌｔｏｎ型突变是５２位的苯丙　氨酸缺失或５１的苯丙氨酸缺失，Ｓｉｉｙａｍａ型突变是５３位的丝　氨酸被苯丙氨酸取代，Ｍｈｅｅｒｌｅｎ型突变是３６９位的脯氨酸被　亮氨酸取代，Ｍｐｒｏｃｉｄａ型突变是４１位的亮氨酸被脯氨酸取代　等　。其中，ＰＩＭＭ型占８５　以上，存在于正常人群中。其他　ＰＩＭＳ、ＰＩＳＳ、ＰＩＭＺ、ＰＩＳＺ和ＰＩＺＺ大约占１５　［８３。　ＰＩＺ突变体与肝脏疾病有很大关联，通常在ＰＩＺＺ纯合个　体和少量的杂合个体中发现肝脏疾病。在ｚ突变蛋白合成过　程中，ｚ基因被转录翻译，ｚ突变蛋白聚集形成大量的多聚物，　多聚物的形成在疾病的病理生理过程起关键性作用［１　。但这　种误折叠和聚合作用的分子机制还不清楚。有研究认为，　ＡＡＴ分子三聚体的这种结构揭露了多聚物连接时是通过羧基　末端３４位残基的功能切换区介导的＿１　。ＡＡＴ分子结合中性　粒细胞弹性蛋白酶的活化位点与蛋白的构象变化有关＿７］。多　聚物在肝脏中聚集是导致肝病的主要因素，在肺脏中是否会有　多聚物的形成和累积还需要进一步研究。　ｓ突变是与ｌ　床疾病相关的第二大突变。ｓ蛋白在胞内　单独存在，不形成多聚物。而ＰＩＳＺ杂合子会在肝脏中形成杂　合多聚体，当然也会导致肝脏疾病的发生，发病情况仅次于　ＰＩＺＺ纯合子　。　２．２流行病学特性　ＡＡＴＤ有２个主要的流行病学特征：　（１）它是一种常见的疾病；（２）它没有引起临床医生的重视，但　能引起严重的不良反应　。尽管ＡＡＴＤ是常见的遗传性疾　病，但ＡＡＴＤ的流行在不同国家之间有很大差异。不同的变　异类型，其相关疾病的发展也不相同。其中，最常见的突变类　型ＰＩＳ、ＰＩＺ与肺气肿和肝硬化有很大关联。ＡＡＴＤ在不同人　群中都有报道，包括非洲黑人、阿拉伯人、中东地区的犹太人、　澳大利亚人、欧洲和北美地区的白人、中亚人、远东亚洲人和东　南亚人　“。该疾病主要见于欧洲，是白种人常见的基因遗传　病，各个国家之间仍有差异。有学者对２１个欧洲国家其基因　作者简介：秦莉（１９８６￣），女，在读硕士研究生，主要从事疾病分子诊断　国际检验医学杂志２０１３年５月第３４卷第９期Ｉｎｔ　Ｊ　ＬａｂＭｅｄ，Ｍａｙ　２０１３，Ｖｏ１．３４，Ｎｏ．９　突变频率进行调查和统计分析显示＿ｌ　，ｚ型突变主要在南部　的斯堪的纳维亚和北欧沿海地区，往南、往东地区的基因频率　逐渐减少。相反，ｓ等位基因的突变引起血浆ＡＡＴ中等程度　反应和氧化应激，促进肺组织的炎症细胞释放蛋白水解酶，使　蛋白水解酶与抗蛋白水解酶失衡，引起肺组织的损伤　７’　。　３．３坏死性脂膜炎　１９７２年Ｗａｒｔｅｒ等人首次发现ＡＡＴ与　的缺乏，其中，在南欧较为常见，往东北逐渐减少。美国ｚ突变　基因频率比欧洲低，而其ｓ突变比北欧高＿７’　。　有学者对２ｏ个亚洲国家的ＰＩＳ、ＰＩＺ型突变频率进行流行　病学调查后发现，这２种突变类型在这些国家的不同地区也有　差别。其中，ＰＩＺＺ型最高的在阿富汗、巴基斯坦、沙特阿拉伯　和泰国　。然而，中国对该疾病的研究调查较少，临床对　ＡＡＴ的检查也没有普及，因此，有许多患者没有被检测出来。　因ＡＡＴＤ与肺气肿和肝硬化有很大关联，对这些患者应进行　常规ＡＡＴ含量或基因型的检测，防止漏诊。　３与ＡＡＴＤ有关的疾病类型　３．１肝脏疾病与ＡＡＴＤ有关的肝脏疾病是一种与遗传和　环境都相关的疾病，导致肝脏疾病的主要突变类型是ＰＩＺＺ　型，也包括ＰＩＺ杂合子［２，１８３。ＰＩＺＺ突变体可以导致儿童期和　成年期的急、慢性肝损伤。主要的临床体征是新生儿出生后黄　疸延长，伴结合胆红素过高和转氨酶异常＿２］。最近国内报道了　１例肝功能异常的儿童患者，其最终确诊为ＡＡＴＤ［１　。与Ｚ　型突变相关的婴儿肝脏疾病主要表现为新生儿胆汁淤积性黄　疸，数月后自然消退　］。那些在儿童期没有肝脏疾病的患者，　成年后肝硬化和肝细胞癌的风险增加，肝硬化发生在５Ｏ岁左　右＿６］。Ｚ型突变蛋白在肝内质网的慢性聚合作用是肝硬化和　肝纤维化形成的主要原因。该折叠蛋白的异常堆积极大地增　加了肝脏疾病的风险，其堆积形成的胞内包涵体使肝脏受　损［６　。聚合作用是该疾病的病理生理过程的一个重要步　骤，ＡＡＴ分子结合中性粒细胞弹性蛋白酶的反应位点与该蛋　白的构象变化有关。ｚ蛋白突变体通过替代位于反应位点的　单一氨基酸，改变该分子的构象灵活性，从而导致突变蛋白的　聚集　。目前尚没有针对与ＡＡＴＤ相关的肝脏疾病的有效　治疗方案，只能采用一些措施来预防并发症（如出血、腹水、瘙　痒、营养不良、脂溶性维生素缺乏、感染和恶性肿瘤等）的发生。　３．２肺部疾病ＡＡＴ的主要生理功能是保护下呼吸道组织　免受中性粒细胞弹性蛋白酶的降解Ⅲ２　。在正常生理状态下，　蛋白酶一抗蛋白酶保持平衡状态，这是防止肺气肿发生的重要　因素。由基因突变引起的ＡＡＴ缺乏导致肺泡组织受损，最终　导致慢性阻塞性肺疾病（ｃｈｒｏｎｉｃ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｄｉｓｅａ—　ｓｅｓ，ＣＯＰＤ）、肺气肿的形成［４，２０　２１１。众多实验结果显示，ＡＡＴ　相对缺乏引起的蛋白酶一抗蛋白酶系统失衡是国人肺气肿致病　的真正原因，但也有学者认为此类患者血清ＡＡＴ数量并未减　少，而是表现为功能不足　。肺气肿是与ＡＡＴＤ相关的最常　见的疾病，一般在早期（４Ｏ～５０岁）发病，主要影响肺基底部全　小叶，出现不对称的病理变化［７］。研究发现一秒用力呼气容积　（ｆｏｒｃｅｄ　ｅｘｐｉｒａｔｏｒｙ　ｖｏｌｕｍｅ　ｉｎ　ｏｎｅ　ｓｅｃｏｎｄ，ＦＥｖ１）是评估患者生　存率和肺气肿发生的主要指标，ＰＩＺＺ型低ＦＥＶ１比高ＦＥＶ１　的患者发生肺气肿的概率更大。发展为肺气肿有３个危险因　素——气道高反应性、反复感染和家族遗传因素ｌ３］。ＡＡＴ多　聚体的形成在肺气肿的进展中发挥重要作用，它可以加速肺部　的炎症反应。多聚体主要在较低的ｐＨ环境下形成，而吸烟可　造成轻度酸性环境，加速多聚体的形成，造成肺组织的损　伤＿２　。研究结果显示，ＡＡＴＤ也与肺癌的患病风险有很大关　系，大多肺癌患者体内存在ＡＡＴ变异蛋白和中性粒细胞弹性　蛋白酶启动子区域的多态性（～９０３　Ｔ和一７４１　Ｇ等位基　因）［５　。吸烟可以增加患病的风险，通过诱导肺组织的炎症　坏死性脂膜炎相关［１　，主要表现为自发性皮肤坏死、化脓，主　要发生在臀部和躯干　］。少数病例报道，注射纯化的人ＡＡＴ　制剂可以使脂膜炎的临床症状快速消退　］。然而，脂膜炎的发　生比较罕见，ＡＡＴＤ患者的发生率大约为１‰口ｌ。该疾病可能　伴有的基因型为ＺＺ、ＳＺ及ＳＳｌ　】。　３．４系统性脉管炎该疾病在ＡＡＴＤ中的发生频率不高，有　病例显示ＡＡＴ异常的患者与抗蛋白酶３抗体［如抗中性粒细　胞胞质抗体（ａｎｔｉｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ　ａｎｔｉｂｏｄｙ，ＡＮＣＡ）］阳　性的脉管炎有一定的关联＿７　。目前提出３种可能导致与　ＡＡＴＤ相关脉管炎发生的机制：（１）蛋白酶３是ＡＡＴ的主要　作用物，ＡＡＴ缺乏可增强机体对蛋白酶３的自身免疫性反应；　（２）连锁不平衡性可能会引起自身免疫性基因伴随异常的　ＡＡＴＤ表型遗传；（３）Ｚ突变体的聚合作用也会促使自身免疫　性脉管炎的发生０　。对抗蛋白酶３抗体（如ＡＮＣＡ）阳性的脉　管炎要加以重视，并进行相关检查　１　。目前为止，还有证据显　示ＡＡＴＤ可增加肿瘤（如淋巴瘤、膀胱癌、胆囊癌和肺癌）的发　病风险，并促进疾病的进展ｌ３］。　４实验室诊断与筛查　在欧洲，此类疾病很常见。临床上某些患者若疑诊为该遗　传病，需要做相关检查，其中包括吸烟或不吸烟的伴有呼吸困　难、ＣＯＰＤ或肺气肿症状的年轻人ｌ３　；久治不愈的哮喘患者、不　明原因的支气管扩张患者＿２　；先证者的有相关症状的同　胞［　；有出血障碍的新生儿、黄疸延长和一些不明原因的肝硬　化患者ｌ２　］。２００３年美国胸科学会和欧洲呼吸协会已对　ＡＡＴＤ的诊断方针做了相关的概述。ＡＡＴＤ的诊断包括定量　试验（血浆ＡＡＴ水平的测定）及定性试验（ＡＡ，ｒ突变基因的　测定）。　４．１血浆ＡＡＴ水平检测　一般用火箭免疫电泳、放射免疫　扩散和免疫比浊法来检测血浆ＡＡＴ水平。这些检测方法简　便、低廉，但敏感性和特异性不高　’　］。该蛋白是急性时相反　应蛋白，炎症会使其含量增加，此时血浆含量就不能反映其真　实水平　］。ＡＡＴ水平的阈值为１１／￣ｍｏｌ／Ｌ，低于此值时，肺气　肿的患病风险大大增加。ＡＡＴ含量测定只能作为初步筛查实　验，并不能确定是哪种类型的突变，所以要想检测突变类型还　需要做表现型和基因型测定。　４．２表型测定　对定量检测ＡＡＴ水平异常的患者可进行表　型检测，根据各种突变蛋白的等电点不同，用等电聚焦法检测。　根据各种突变蛋白在ｐＨ梯度下的电泳迁移率不同，将它们分　成不同的类型。起初Ｆ表示快迁移，ｓ表示慢迁移，Ｍ表示居　中，随着新突变的发现，人们按阿拉伯字母顺序进行编码＿３］。　由于ＡＡＴ分子的微观多态性和突变类型的多样性，这种技术　的实施需要特定的专家来进行＿２　～。此外，由于患者体内ＡＡＴ　含量比较低，其表型可能不被测定出来，结果还需要用特异性　等位基因杂交技术检测ｌ２　。比如，无效突变血中没有ＡＡＴ，　所以不能用等电聚焦法检测表型，只能分析基因序列来确定。　尽管该技术有一定的缺陷，但它仍然为筛查和诊断提供了有用　的信息。　４．３基因型测定基因分子水平的检测是从全血细胞中提取　ＤＮＡ，用实时定量ＰＣＲ技术的等位基因特异性扩增来分析已　知突变类型［４］。一般利用熔解曲线来检测突变基因。有研究　者用双探针法来检测正常和突变基因　０］。最常检测的基因类　国际检验医学杂志２０１３年５月第３４卷第９期Ｉｎｔ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，Ｍａｙ　２０１３，Ｖｏ１．３４，Ｎｏ．９　型是ＭＭ、ＭＺ、ＳＳ、ＳＺ和ＺＺ型，不能检测无效突变类型。如果　其他未知的突变类型需要鉴定，可以采用直接测序法＿３　或变　性梯度凝胶电泳法　。　Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｄｅｒａｔｅ　ａｌｐｈａ一１　ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｗｉｔｈ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｓｅｒｂｉａｎ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｒｃｈ　Ｍｅｄ　Ｒｅｓ，２００６，３７（７）：　８６６　８７０．　因该疾病的临床症状不典型，常存在并发疾病，许多医院　并未常规开设ＡＡＴ含量测定，这导致漏诊而延误治疗。对无　症状患者的早期诊断可以帮助患者改善生活习惯来减少肺气　肿的发生，特别是对于儿童，该疾病的预防很重要。因此，加强　［６］Ｊａｎｃｉａｕｓｋｉｅｎｅ　ＳＭ，Ｂａｌｓ　Ｒ，Ｋｏｃｚｕｌｌａ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ａｌ—　ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｒｅｓｐｉｒ　Ｍｅｄ，　２０１１，１０５（８）：¨２９—１１３９．　［７］Ｋｅｌｌｙ　Ｅ，Ｃａｔｈｅｒｉｎｅ　ＭＧ，Ｃａｒｒｏｌｌ　ＴＰ，ｅｔ　ａ１．Ａｌｐｈａ　１　ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｔ　ｃｉｅｎｅｙ［－Ｊ］．Ｒｅｓｐｉｒ　Ｍｅｄ，２０１１，４（１）：１－８．　［８］Ｍｉｒａｖｉｔｌｌｅｓ　Ｍ．Ａｌｐｈａ一１一ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ　［Ｊ］．Ｃｕｒｒ　Ｏｐｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０１２，１２（３）：３０９　３１４．　对该疾病的诊断力度，增强对该疾病的防范，以遏制其进一步　发展和恶化。　５相关治疗　［９］Ｈｅｕｔｉｎｃｋ　ＫＭ，ｔｅｎ　Ｂｅｒｇｅ　ＩＪ，Ｈａｃｋ　ＣＥ，ｅｔ　ａ１．Ｓｅｒｉｎｅ　ｐｒｏｔｅａｓｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｕｍａｎ　ｉｍｍｕｎｅ　ｓｙｓｔｅｍ　ｉｎ　ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄ　ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｉｍｍｕ—　ｎｏｌ，２０１０，４７（１１／１２）：１９４３—１９５５．　伴有ＣＯＰＤ的ＡＡＴＤ患者应接受常规支持治疗，包括支　气管扩张剂、注射皮质类固醇激素和肺部的康复治疗。一般这　些患者有正常的免疫反应，建议注射抗流感和肺炎双球菌疫　苗，增强抵抗力［２　。细菌感染会导致疾病的加重，建议使用抗　菌药治疗，防止病情的进一步恶化。研究者还在进一步研究新　的治疗方案和新的药物，然而任何新药的应用都需要大量的实　验证实才可以用于临床。随机、双盲和安慰剂的临床试验是评　估某种治疗药物是否有效的金标准　。对ＡＡＴＤ的特异性　治疗一般采用ＡＡＴ支持疗法，其中，有４种可能的治疗方法：　（１）静脉注射纯化人血浆蛋白的治疗；（２）ＡＡＴ吸人剂的应用；　（３）重组ＡＡＴ治疗和人工合成弹性蛋白酶抑制剂的治疗；（４）　肺的减容修复手术　］。近来，还有些研究以慢病毒为载体，通　过组建人ＡＡＴ表达载体，分析其表达和可能的治疗作用［　］。　这些研究为基因治疗提供了一些的实验依据。其他的抗感染　治疗还在进一步的研究中。　６小　结　吸烟是该疾病最重要的危险因素＿２　，其他影响疾病进程　的危险因素包括：被动吸烟，职业性暴露于呼吸道刺激物、特殊　环境（如煤、油燃烧和农业劳作等）ｌ３　。预防该疾病发作的有　效措施包括：戒烟ｌ７］、减少空气污染、抗流感和肺炎感染的免疫　治疗以及有炎症患者的早期抗菌药治疗等。目前一般医院没　有开设ＡＡＴ含量测定项目，国内对该疾病的相对诊断率比较　低，对该疾病的报道也较少。然而，医务工作者应对一些可疑　病例进行筛查，包括早期肺气肿患者，不明原因的肝硬化、新生　儿胆汁淤积以及一些已知患者的家族成员等。通过检测血浆　ＡＡＴ水平，测定表型和基因型来确诊该疾病。有效预防该疾　病可减少并发症的发生，减轻患者的痛苦，甚至可延长患者的　生命。因此，开发一套完善、快速、简便、廉价的诊断方法是今　后研究的重点。　参考文献　［１］　Ｓｕｎ　Ｚ，Ｙａｎｇ　Ｐ．Ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｉｍｂａｌａｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｅｌａｓｔａｓｅ　ａｎｄ　ａｌｐｈａ卜ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｉｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．　Ｌａｎｃｅｔ　Ｏｎｃｏ１，２００４，５（３）：１８２　１９０．　［２］　Ｆｒｅｇｏｎｅｓｅ　Ｌ，Ｓｔｏｌｋ　Ｊ．Ｈｅｒｅｄｉｔａｒｙ　ａｌｐｈａ一卜ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ＥＪ］．Ｏｒｐｈａｎｅｔ　Ｊ　Ｒａｒｅ　Ｄｉｓ，２００８，３：　ｌ６．　［３］　Ｖｉｄａｌ　Ｒ，Ｂｌａｎｃｏ　Ｉ，Ｃａｓａｓ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｌｐｈａ—ｌ　ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ［Ｊ］．Ａｒｃｈ　Ｂｒｏｎｃｏ—　ｎｅｕｍｏｌ，２００６，４２（１２）：６４５—６５９．　［４］　Ｚａｒｉｃ　Ｂ，Ｓｔｏｊｃｅｖｉｃ　Ｊ，Ａｎｄｒｉｊｅｖｉｃ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｃｈａｒ—　ａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｐｈａ一１一ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ（ＡＡＴ）ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ＰｉＭＭ　ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ　ａｎｄ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ　ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｄｉｓｅａｓｅ（ＣＯＰＤ）［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｉｎｔｅｒｎ　Ｍｅｄ，２０１１，２２（６）：６０３　６０６．　［５］　Ｔｏｐｉｃ　ＡＳ，Ｊｅｌｉｅ—Ｉｖａｎｏｖｉｃ　ＺＤ，Ｓｐａｓｏｊｅｖｉｃ—Ｋａｌｉｍａｎｏｖｓｋａ　ＶＶ，ｅｔ　ａ１．　［１Ｏ］Ｒａｅｈｅｌｅｆｓｋｙ　Ｇ，Ｈｏｇａｒｔｈ　ＤＫ．Ｉｓｓｕｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ａｌｐｈａ　１一ａｎ—　ｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ［Ｊ］．Ｊ　Ａｌｌｅｒｇｙ　Ｃｌｉｎ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００８，１２１（４）：　８３３　８３８．　［１１］Ｓｔｏｌｌｅｒ　ＪＫ，Ａｂｏｕｓｓｏｕａｎ　ＬＳ．Ａｌｐｈａ１　ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ［Ｊ］．　Ｌａｎｃｅｔ，２００５，３６５（９４７８）：２２２５　２２３６．　［１２］Ｂａｌｓ　Ｒ．Ａｌｐｈａ一１　ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ［Ｊ］．Ｂｅｓｔ　Ｐｒａｃｔ　Ｒｅｓ　Ｃｌｉｎ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２０１０，２４（５）：６２９　６３３．　［１３］Ｙａｍａｓａｋｉ　Ｍ，Ｓｅｎｄａｌｌ　ＴＪ，Ｐｅａｒｃｅ　ＭＣ，ｅｔ　ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　ａｌ＿　ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ａ　ｄｏｍａｉｎ—　ｓｗａｐｐｅｄｔｒｉｍｅｒ［Ｊ］．ＥＭＢＯＲｅｐ，２０１１，１２（１０）：１０１１　１０１　７．　［１４］ｄｅ　Ｓｅｒｒｅｓ　ＦＪ．Ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ　ｒａｃｉａｌ　ａｎｄ　ｅｔｈｎｉｃ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｌｐｈａｌ—　ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ：ｓｕｍｍａｒｙ　ｏｆ　ａｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃ　ｓｕｒｖｅｙｓ［Ｊ］．Ｃｈｅｓｔ，２００２，１２２（５）：１８１８—１８２９．　［１　５］Ｂｌａｎｃｏ　Ｉ，ｄｅ　Ｓｅｒｒｅｓ　ＦＪ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ—Ｂｕｓｔｉｌｌｏ　Ｅ，ｅｔ　ａ１．Ｅｓｔｉｍａｔｅｄ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ａｎｄ　ｐｒｅＶａｌｅｎｃｅ　ｏｆ　ＰＩ＊Ｓ　ａｎｄ　ＰＩ＊Ｚ　ａｌｌｅｌｅｓ　ｏｆ　ａｌｐｈａｌ—ａｎ—　ｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｉｎ　Ｅｕｒｏｐｅａｎ　ｃｏｕｎｔｒｉｅｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｒｅｓｐｉｒ　Ｊ，２００６，　２７（１）：７７—８４．　［１６］Ｌｏｍａｓ　ＤＡ．Ｔｈｅ　ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ａｄｖａｎｔａｇｅ　ｏｆ　ａｌｐｈａｌ～ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎ—　ｃｙ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｒｅｓｐｉｒ　Ｃｒｉｔ　Ｃａｒｅ　Ｍｅｄ，２００６，ｌ７３（１０）：１０７２　１０７７．　［１　７］ｄｅ　Ｓｅｒｒｅｓ　ＦＪ，Ｂｌａｎｃｏ　Ｉ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ—Ｂｕｓｔｉｌｌｏ　Ｅ．Ｅｓｔｉｍａｔｅｄ　ｎｕｍｂｅｒｓ　ａｎｄ　ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ　ｏｆ　ＰＩ＊Ｓ　ａｎｄ　ＰＩ＊Ｚ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ａｌｌｅｌｅｓ　ｏｆ　ａｌｐｈａｌ—ａｎ—　ｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｉｎ　Ａｓｉａ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｒｅｓｐｉｒ　Ｊ，２００６，２８（６）：１０９１—　１０９９．　［１　８３　Ｆｉｓｃｈｅｒ　ＨＰ，Ｏｒｔｉｚ—Ｐａｌｌａｒｄ６　ＭＥ，Ｋｏ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｃｈｒｏｎｉｃ　ｌｉｖｅｒ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｉｎ　ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ　ａｌｐｈａｌ　ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ＰｉＺ［Ｊ］．Ｊ　Ｈｅｐａｔｏｌ，　２０００，３３（６）：８８３—８９２．　［１９］卢华君，赵忠艳．儿童　１一抗胰蛋白酶缺乏症１例［Ｊ］．中国当代儿　童杂志，２０ｌ１，１３（４）：３５４～３５５．　［２ｏ］Ｋｏ　ＤＨ，Ｃｈａｎｇ　ＨＥ，Ｓｏｎｇ　ＳＨ，ｅｔ　ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ　ｍｕｔａｔｉｏｎ　ｉｎ　ａ　Ｋｏｒｅａｎ　ｐａｔｉｅｎｔ　ｗｉｔｈ　ａｌｐｈａ　１－ａｎｔｉｔｒｙｐ　ｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ［Ｊ］．Ｋｏｒｅａｎ　Ｊ　Ｉ　ａｂ　Ｍｅｄ，２０１１，３１（４）：２９４—２９７．　［２１３　Ｌｊｕｊｉｃ　Ｍ，Ｎｉｋｏｌｉｃ　Ａ，Ｄｉｖａｃ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ａｌｐｈａ一１一ａｎｔｉｔｒｙｐ　ｓｉｎ　ｇｏｎｅ　ｂｙ　ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｇｅｌ　ｅ１ｅｃｔｒ。ｐｈ０ｒｅｓｉｓ（ＤＧＧＥ）口］．Ｊ　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｍｅｔｈｏｄｓ，２００６，６８（３）：１６７　１　７３．　［２２］李萌博．ａｌ＿抗胰蛋白酶缺乏与肺气肿关系的研究进展［Ｊ］．山西　医药杂志，２０１０，３９（８）：７３５—７３６．　［２３３　Ｌｉｓｏｗｓｋａ—Ｍｙｊａｋ　Ｂ．ＡＡＴ　ａｓ　ａ　ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｔｏｏｌ［Ｊ３．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｉｍ　Ａｃｔａ，　２００５，３５２（１／２）：１　１３．　［２４３　Ｔｏｐｉｃ　Ａ，Ｌｊｕｊｉｃ　Ｍ，Ｎｉｋｏｌｉｃ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ａｌｐｈａ…１　ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｐｈｅｎｏ—　ｔｙｐｅｓ　ａｎｄ　ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｅｌａｓｔａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｐｒｏｍｏｔｅｒ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ　ｉｎ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ３．Ｐａｔｈｏｌ　Ｏｎｅｏｌ　Ｒｅｓ，２０１１，１７（１）：７５—８０．　［２５］王嘉，孙武装，于卫芳，等．慢性阻塞性肺疾病血清中性粒细胞弹　性蛋白酶和ａ卜抗胰蛋白酶的检测及其意义［Ｊ］．国际呼吸杂志，　２０１１，３１（１７）：１２８５—１２８９．　［２６］Ｐｅｒｌｍｕｔｔｅｒ　ＤＨ．Ａｌｐｈａ～１一ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ：ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ａｎｄ　国际检验医学杂志２０１３年５月第３４卷第９期Ｉｎｔ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｍｅｄ，Ｍａｙ　２０１３，Ｖ。Ｉ＿３４，Ｎｏ．９　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｌｉｖｅｒ　Ｄｉｓ，２００４，８（４）：８３９—８５９．　［２７］Ａｂｏｕｓｓｏｕａｎ　ＬＳ，Ｓｔｏｌｌｅｒ　ＪＫ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｌｐｈａ～１　ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｔ　ｃｉｅｎｃｙ：ａ　ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｒｅｓｐｉｒ　Ｍｅｄ，２００９，１０３（３）：３３５—３４１．　［２８３　Ｂｒａｎｄｙ　Ｍ．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ　ｔＯ　ｔｈｅ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｄｉ　ａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ａｌｐｈａｌ—ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ：Ｔｈｅ　ｐｒｏｍｉｓｅ　ｏｆ　ｅａｒｌｙ　ｄｉ—　ｐｈａｌ　ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ［Ｊ］　２７４．　［３２］Ｌｕｉｓｅｔｔｉ　Ｍ，Ｂａｌｆｏｕｒ　Ｌｙｎｎ　ＩＭ，Ｊｏｈｎｓｏｎ　ＳＲ，ｅｔ　ａ１．Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ　ｆｏｒ　ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｃｃｅｓｓ　ｏｆ　ｔｈｅｒａｐｉｅｓ　ｆｏｒ　ｒａｒｅ　ｌｕｎｇ　ｄｉｓ—　ｅａｓｅｓ　ｉｎ　Ｅｕｒｏｐｅ［Ｊ］．Ｒｅｓｐｉｒ　Ｍｅｄ，２０１２，１０６（６）：７５９—７６８．　［３３］欧海龙。雷霆雯，李红梅，等．慢病毒介导的重组人ｎ１一抗胰蛋白酶　在小鼠体内的表达［刀．世界华人消化杂志，２０１２，２０（１９）：１７２０—　１７２５．　ａｇｎｏｓｉｓ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｅｍ，２００６，５２（１２）：２１８０—　２１８１．　［２９］Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ—Ｆｒｉａｓ　Ｆ，Ｖｉｌａ—Ａｕｌｉ　Ｂ，Ｈｏｍｓ—Ｒｉｂａ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ａｌｐｈａ一１　ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ：ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｒａｐｉｄ　ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｌａｂｏ—　［３４］Ｓｅｎｎ　Ｏ，Ｒｕｓｓｉ　ＥＷ，Ｉｍｂｏｄｅｎ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ａｌｐｈａ１一Ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ　ｄｅｆｔ—　ｃｉｅｎｃｙ　ａｎｄ　ｌｕｎｇ　ｄｉｓｅａｓｅ：ｒｉｓｋ　ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｏｃｃｕｐａｔｉｏｎａｌ　ａｎｄ　ｅｎ—　ｒａｔｏｒｙ　ｔｅｓｔｓ［Ｊ］．Ａｒｃｈ　Ｂｒｏｎｃｏｎｅｕｍｏｌ，２０１１，４７（８）：４１５－４１７．　［３Ｏ］Ｇｒｅｅｎｅ　ＤＮ，Ｐｒｏｃｔｅｒ　Ｍ，Ｇｒｅｎａｃｈｅ　ＤＧ，ｅｔ　ａ１．Ｍｉｓｃｌａｓｓｉｆｉｅａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎ　ａｐｐａｒｅｎｔ　ａｌｐｈａ　１－ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ“Ｚ”ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｖａｒｉａｎｔ　ｂｙ　ｍｅｌｔｉｎｇ　ａ　ｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｉｎｈａｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｒｅｓｐｉｒ　Ｊ，２００５，２６（５）：９０９—９１７．　（收稿日期：２Ｏｌ２—１０—１７）　ｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｉｍ　Ａｃｔａ，２０１１，４１２（１５／１６）：１４５４　１４５６．　［３１］Ｆｅｒｒａｒｏｔｔｉ　Ｉ，Ｓｃａｂｉｎｉ　Ｒ，Ｃａｍｐｏ　Ｉ，ｅｔ　ａ１．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ａｌ一　・综　述・　实时荧光定量ＰＣＲ法检测儿童常见病原菌的研究进展　闰超综述，孙红妹△审校　（首都儿科研究所细菌研究室，北京１ＯＯ０２０）　关键词：聚合酶链反应；病原；　细菌；　儿童　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３０．２０１３．０９．０２５　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７３—４１３０（２Ｏ１３）０９—１ｌ１４一Ｏ３　实时荧光定量聚合酶链反应（ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ　ｑｕａｎｔｉ—　ｔａｔｉｖｅ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ，Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰｃＲ）是根据荧光共　振能量转移原理，设计相应的荧光标记核酸探针，通过ＰＣＲ反　应对靶ＤＮＡ进行定性、定量测定的技术口］，可根据样品的循　２　Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ的类型及特点　Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ技术可以分为非特异性的ＤＮＡ结合染料　法和特异性探针法，后者由于增加了探针的识别步骤，特异性　更高，但前者则简便易行。　２．１　非特异性的ＤＮＡ结合染料法（非探针类）　荧光染料可　环阈值，参照标准曲线准确计算出样本内核酸的起始浓度，实　现ＰＣＲ从定性到定量的飞跃。在ＰＣＲ扩增的早期即可监测　其反应动力学，既保持了ＰＣＲ技术快速和灵敏的优点，又克服　以非特异性结合双链ＤＮＡ的小沟，嵌合进ＤＮＡ双链，但是不　与单链结合。反应起始时，只产生很少的荧光，但随着反应进　行，扩增产物的增加，即双链ＤＮＡ的增加，荧光强度也随之增　强。当ＤＮＡ变性时则荧光信号降低。因此，通过每个循环结　束时荧光强度的变化可估计ＤＮＡ增加的量。此方法的优点　了传统ＰＣＲ技术中存在的假阳性污染和不能进行准确定量的　缺点。与现有基因检测方法相比较，该方法具有多病原同时检　测、操作简便、仪器设备要求不高、经济等优势，可迅速应用于　临床。　１　Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ的原理　是不需设计探针，简便，同时降低了检测成本，但其特异性较　差，染料可以和任意双链ＤＮＡ结合。目前常用的ＤＮＡ结合　染料为ｓＹＢＲ　ＧｒｅｅｎＩＩ　。　２．２特异性荧光定量ＰＣＲ方法（探针类）　此方法是根据荧　光共振能量转移原理，当荧光基团与一个荧光淬灭基团（可以　Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ是在常规ＰＣＲ基础上添加了荧光染料或　荧光探针，利用荧光信号积累实时监测整个ＰＣＲ进程，最后通　过标准曲线对未知模板进行定量分析，见图１。其基本原理在　于ＰＣＲ反应体系中加入了荧光化学物质，ＰＣＲ产物随着ＰＣＲ　反应的进行不断积累，荧光强度与ＰＣＲ产物的数量呈对应关　系，实时检测荧光信号强度，进而确定扩增产物的数量，即检测　每个循环结束后的产物量，从而实现ＰＣＲ扩增的动力学监测，　扩增曲线为Ｓ型。　在Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ技术中２个重要的概念：荧光阈值和　淬灭前者的发射光谱）的距离接近至一定范围（７～１０　ｎｒｎ）时，　会发生荧光能量转移，淬灭基团会吸收荧光基团在激发光作用　下激发的荧光，从而使其不发光，一旦二者分开，淬灭作用即消　失。根据荧光探针类型，目前常用的有ＴａｑＭａｎ探针、双杂交　探针、分子信标、蝎形探针等相关技术。以ＴａｑＭａｎ探针为例　说明其工作原理，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬　灭基团吸收；ＰＣＲ扩增时，Ｔａｑ酶的５　～３，夕　切酶活性将探针　酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监　测系统可接收到荧光信号　３　Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ　ＰＣＲ对于儿童常见病原菌的检测　国内系统性的关于儿童常见病原菌种类的报道较少，但总　体上从城市儿科医院收集的标本测定结果看，儿童常见致病菌　ＣＴ值。荧光阈值是在荧光扩增曲线上人为设定的一个值，一　般设置为扩增过程３～１５个循环的荧光信号的标准差的１Ｏ　倍。当荧光值超过阈值时的循环数被称为ＣＴ值。ＣＴ值与该　模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，ＣＴ　值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，以　ＣＴ值为横坐标，以一系列标准ＤＮＡ分子的起始拷贝数的以　ｌ０为底的对数为纵坐标，因此，只要获得未知样品的ＣＴ值，即　可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数ｌ２］。　与成人有不少相似之处，少数存在特异性　］。其中，革兰阴性　菌的比例约占６Ｏ　，超过革兰阳性菌。革兰阴性菌中肠杆菌　通讯作者，Ｅ—ｍａｉｌ：Ｓ．ｈｏｎｇｍｅｉ＠２６３．ｎｅｔ。　作者简介：闰超（１９８５￣），女，硕士研究生，主要从事常见病原菌的研究。