《缓冲溶液的配制及性质》

实验一 缓冲溶液的配制和性质、溶液pH值测定

【实验目的】

1. 2. 3. 4. 5.

学习缓冲溶液及常用等渗磷酸盐缓冲溶液的配制方法。 加深对缓冲溶液性质的理解。 强化吸量管的使用方法。 学习使用pHS-2C型酸度计。 培养环境保护意识。

【预习作业】

1. 一般性溶液与缓冲溶液有什么不同？ 2. 缓冲溶液的性质有哪些？

3. 如何衡量缓冲溶液的缓冲能力大小？缓冲溶液的缓冲能力与什么因素有关？ 4. 实验是如何设计以验证缓冲溶液所具有的性质及缓冲容量的影响因素的，设计时有哪些注意事项？

5. 该如何检测缓冲溶液的pH值是否发生改变？是否均需要用pH计？ 6. 本实验属定量测定还是定性测定或半定量测定？

【实验原理】

普通溶液不具备抗酸、抗碱、抗稀释作用。 缓冲溶液通常是由足够浓度的弱酸及其共轭碱、弱碱及其共轭酸或多元酸的酸式盐及其次级盐组成的，具有抵抗外加的少量强酸或强碱、或适当稀释而保持溶液pH值基本不变的作用。

本实验通过将普通溶液和配制成的缓冲溶液对加入酸、碱或适当稀释前后pH数值的变化来探讨缓冲溶液的性质。

根据缓冲溶液中共轭酸碱对所存在的质子转移平衡：

－

HB⇌ B+H3O+

缓冲溶液pH值的计算公式为：

[B－][共轭碱]pHpKalgpKalgpKalg缓冲比

[HB][共轭酸]式中pKa为共轭酸解离常数的负对数。此式表明：缓冲溶液的pH值主要取决于弱酸的pKa

值，其次决定于其缓冲比。

需注意的是，由上述公式算得的pH值是近似的，准确的计算应该用活度而不应该用浓度。要配制准确pH值的缓冲溶液，可参考有关手册和参考书上的配方，它们的pH值是由精确的实验方法确定的。

缓冲容量（β）是衡量缓冲能力大小的尺度。缓冲容量（β）的大小与缓冲溶液总浓度、缓冲组分的比值有关。

[HB]×[B－][B－] β＝2.303× ＝2.303×1＋缓冲比[HB]＋[B－]缓冲溶液总浓度越大则β越大；缓冲比越趋向于1,则β越大，当缓冲比为1时，β达极大值。

实验室中最简单的测定缓冲容量的方法是利用酸碱指示剂变色来进行判断的。例如：本

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实验就使用了甲基红指示剂。

表2-3-1 甲基红指示剂变色范围

pH值 颜色

＜4.2 红色

4.2～6.3 橙色

＞6.3 黄色

医学上常用PBS(等渗磷酸盐缓冲盐水)作为体外细胞缓冲培养液。PBS是与人体血浆渗透压(280～320mOsmol·L-1)等渗，并与人体血液pH值(7.35～7.45)一致的含有NaCl、KCl、Na2HPO4、KH2PO4等物质的磷酸盐缓冲液。根据不同用途，PBS有不同的配制方法，如用于细胞培养的pbs配方为：8g NaCl，0.2g KCl，0.24g KH2PO4，1.44g Na2HPO4，加水至800ml，用HCl调pH至7.4，补水至1L，消毒灭菌既得。

其在水溶液中的质子转移平衡如下：

－－

H2PO4＋H2O⇌ H2PO42＋H3O+ Ka2

由上式可知该缓冲液pH的计算公式为

[HPO2-[共轭碱]4] pHpKalgpKa2lg[共轭酸][KH2PO-4]该公式计算出来的数值由于未考虑溶液的活度，所以所得的数值仍为近似值。

【仪器与试剂】

仪器：吸量管(5mL×5，10mL×5)，比色管(20mL×4)，量筒(10mL)，烧杯(50mL×6)，试

管(10mL×6，20mL×6)，滴管，玻棒，洗瓶，pHS-2C型酸度计等

试剂：1.0mol·L-1 HAc，0.1mol·L-1HAc，1.0mol·L-1 NaAc，0.10mol·L-1 NaAc，0.15mol·L-1KH2PO4，0.10mol·L-1Na2HPO4，0.15mol·L-1NaCl，0.15mol·L-1KCl，1.0mol·L-1NaOH，1.0mol·L-1HCl，0.15mol·L-1HCl，蒸馏水，甲基红指示剂，广泛pH试纸，自带试样两份

【实验步骤】（方法1）

一、缓冲溶液的配制

按照表2-3-2中用量，用吸量管配制甲、乙、丙及细胞培养用PBS缓冲溶液于已标号的四支10mL，20mL比色管中，备用。

二、缓冲溶液的性质

1. 缓冲溶液的抗酸、抗碱、抗稀释作用

取7支试管，按表2-3-3分别加入下列溶液，用广泛pH试纸测pH值。然后，分别在各试管中滴加2滴1mol·L-1HCl溶液或2滴1mol·L-1NaOH溶液，再测pH值。记录实验数据：解释所得结果。

[B-]2. 缓冲容量与缓冲溶液总浓度（c）及缓冲比的关系

[HB]取6支试管，按表2-3-4分别加入下列溶液，测pH值。然后，在1～4号试管中各加2滴1mol·L-1HCl溶液或2滴1mol·L-1NaOH，再测pH值。5～6号试管中分别滴入2滴甲基红指示剂，溶液呈红色。然后一边振摇一边逐滴加入1.0mol·L-1NaOH溶液，直至溶液的颜色刚好变成黄色。记录所加的滴数。记录实验结果，解释所得结果。

三、PBS溶液及自带试样溶液pH值的测定

先用pH试纸测量PBS溶液及自带试样溶液的pH值。然后用pHS-2C型酸度计分别测定它们的pH值，比较一下所测的pH数值是否与你预想的一致。

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【数据记录与结果分析】

日期：

温度：

相对湿度

表2-3-2 缓冲溶液的配制

编号 甲 乙 丙

试剂 HAc NaAc HAc NaAc HAc NaAc KH2PO4 Na2HPO4 NaCl KCl

浓度/mol·L1

1.0

1.0 0.10 0.10 0.10 0.10 0.15 0.10 0.15 0.15

－

用量/mL 6.00 6.00 4.00 4.00 0.30 2.70 0.20 1.70 15.50 0.30

总体积/mL 12.00 8.00 3.00

细胞培养用

PBS

17.70

表2-3-3 缓冲溶液的抗酸、抗碱、抗稀释作用

实验编号 缓冲溶液（甲）/mL

H2O /mL NaCl /mL pH(1) 1.0mol·L-1HCl /滴 1.0mol·L-1NaOH /滴

pH(2) ∣⊿pH∣ 结论：

1 2.0 / / 2 /

2 2.0 / / / 2

3 / 2.0 / 2 /

4 / 2.0 / / 2

5 / / 2.0 2 /

6 / / 2.0 / 2

7 2.0 5.0 / / /

[B-]表2-3-4 缓冲容量β与缓冲比（）及缓冲溶液总浓度（c）间的关系

[HB]实验项目 实验编号 缓冲溶液（甲）/mL 缓冲溶液（乙）/mL 缓冲溶液（丙）/mL

pH(1) 甲基红指示剂 /滴

溶液颜色 1.0mol·L-1HCl /滴 1.0mol·L-1NaOH /滴

1 2.0 / / / / 2 /

β与c关系 2 / 2.0 / / / 2 /

3 2.0 / / / / / 2

4 / 2.0 / / / / 2

[B-]β与关系

[HB]5 / 2.0 / 2 /

6 / / 2.0 2 /

至溶液至溶液

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刚好变刚好变成黄色 成黄色 滴 滴

pH(2) ∣⊿pH∣ 结论：

表2-3-5 PBS溶液及自带试样溶液pH值的测定 实验项目 pH试纸 pHS-2C ∣⊿pH∣

PBS溶液

自带试样1

自带试样2

结论：

备注：本实验方法配制的细胞培养用PBS溶液，已与人体血浆渗透压等渗，若PBS溶液pH不等于7.4，可直接用0.15mol·L-1HCl调节至7.4。

【实验步骤】（方法2）

一、一般溶液的抗酸、抗碱、抗稀释作用

取10支试管，按照表2-3-6中用量，分别加入各种试剂，测pH值。然后，在各试管中分别滴加2滴1mol·L-1HCl溶液或1mol·L-1NaOH溶液，再测pH值。最后，在各试管中在加入5ml蒸馏水，再测pH值。记录实验数据，解释普通溶液是否具有抗酸、抗碱、抗稀释作用。

二、缓冲溶液的配制及性质

取8支试管，按照表2-3-7中用量，分别加入各种试剂，测pH值。然后，在各试管中分别滴加2滴1mol·L-1HCl溶液或1mol·L-1NaOH溶液或蒸馏水，再测pH值。记录实验结果，解释缓冲溶液的抗酸、抗碱、抗稀释作用及缓冲容量的影响因素。

三、PBS溶液的配制及自带试样溶液pH值的测定

取50ml烧杯3个，其中一个按照表2-3-8中用量配制PBS溶液，然后用pH试纸测量PBS溶液及自带试样溶液的pH值。再用pHS-2C型酸度计分别测定它们的pH值，比较一下所测的pH数值是否与你预想的一致。

【数据记录与结果分析】

日期：

温度：

相对湿度

表2-3-6 普通溶液否具有抗酸、抗碱、抗稀释作用

编号

1.0mol·L-1NaAc /ml 1.0mol·L-1HAc /ml 0.1mol·L-1NaAc/ml 0.1mol·L-1HAc/ml 0.15mol·L-1NaCl/ml

pH(1)

1.0mol·L-1HCl /滴 1.0mol·L-1NaOH /滴

pH(2)

1 1.0 2

2

2 1.0

3 1.0 2

2

4 1.0

5 1.0 2

2 6 1.0

7

8

9

10

1.0

1.0

1.0

1.0

2

2

2

2

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∣⊿pH∣= ∣pH(2)－pH(1)∣ H2O（ml） pH(3) ∣⊿pH∣= ∣pH(3)－pH(2)∣

结论：

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

5.0

表2-3-7 缓冲溶液的配制及性质

编号

1.0mol·L-1NaAc /ml 1.0mol·L-1HAc /ml 0.1mol·L-1NaAc /ml 0.1mol·L-1HAc /ml 缓冲溶液总浓度

缓冲比 pH值

甲基红/滴 1.0mol·L-1HCl /滴

1 1.0 1.0

2

2 1.0 1.0

3 1.0 1.0

4 1.0 1.0

5 1.0 1.0 2

6 1.0 1.0

7

8

1.0 1.0

0.2 1.8

1.0mol·L-1NaOH /滴 2 2

H2O（ml） pH值

∣⊿pH∣ 结论：

5.0

5.0

2 2 至溶液至溶液刚好变刚好变成黄色 成黄色 滴 滴

表2-3-8 细胞培养用PBS缓冲溶液的配制及自带试样溶液pH值的测定 试剂 0.15 mol·L1KH2PO4

－

0.10 mol·L1Na2HPO4

－

0.15 mol·L1NaCl

－

0.15 mol·L1KCl 自带试样溶液1 自带试样溶液2

结论：

－用量/mL 0.20 1.70 15.50 0.30

总体积/mL pH值（试纸）

pH值（仪器）

17.70

【思考题】

1. 2. 3. 4.

缓冲溶液的pH值由哪些因素决定? 为什么缓冲溶液具有缓冲能力?

pH试纸与pHS-2C型酸度计测定溶液的pH值的准确度如何?

为何每测定完一种溶液，复合电极需用蒸馏水洗净并吸干后才能测定另一种溶液?

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5. 本实验是如何设计以验证这些性质的？

6. 本实验属定量测定还是定性测定或半定量测定？

7. 如果只有HAc和NaOH，，HCl和NH3·H2O，KH3PO4和NaOH，能够进行上述实验吗？你将怎样进行实验设计？

0.004molL-1KMnO4溶液标定Mn2++10CO2+4H2O）（MnO4- +5C2O42-+8H+ 准确称量0.1300-0.1400g25mL滴定管消耗滴定液一级标准物质Na2C2O45/2*20mL*0.004molL-1*100mL容量瓶/20mL待测液*MNa2C2O4配成100.00mLNa2C2O4标准溶液准确移取20.00mLNa2C2O4标准溶液250mL锥形瓶-1加入3.0molLH2SO4溶液5mL选H2SO4稀H2SO4不具氧化还原性介质稀HNO3具氧化性稀HCl具还原性-1>1molLHCOCO2+H2O224浓度<0.5molL-1KMnO4MnO2或K2MnO4从滴定管加入10mL2+待标定KMnO4溶液（通过预反应获取催化剂Mn,提高反应速率）反应极慢,加热提高反应速率,避免高温分解产生副反应>90O2+K2MnO4低温加热KMnO4H2C2O4>90CO2+H2O锥形瓶内溶液红色褪去（获取催化剂Mn2+）过量KMnO4作指示剂(KMnO4自身紫红色)从滴定管继续滴入待标定KMnO4溶液粉红色溶液维系30s不变色为终点（KMnO4溶液与空气中还原性物质作用颜色褪去）计算出准确KMnO4溶液浓度（标准溶液）（2MnO4-+5H2O2+6H+ 2Mn2++8H2O+5O2）测定市售双氧水中H2O2含量准确移取20.00mL市售双氧水配制的待测H2O2溶液-1加入3.0mL3molLH2SO4溶液 加热H2O2分解）（此步不能加热，从滴定管滴入标准KMnO4溶液粉红色溶液维系30s不变色为终点（KMnO4溶液与空气中还原性物质作用颜色褪去）计算出准确H2O2溶液浓度

实验一 仪器的认领、洗涤及干燥 实验三 溶液的配制

容量仪器与量器的分类；它们的洗涤及干燥要求各有何共同点及不同点？

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共有几种洗涤方式，各用于哪些方面？

答提示：常规洗涤、化学洗涤、物理洗涤（如超声波）

针对溶质不同的存在状态，溶液配制分别有哪些方法？注意事项是什么？ 答提示：考虑气相、液相、固相

针对溶质的物理和化学性质，配制溶液时应注意些什么？ 答提示：考虑物理性质：挥发性、吸水性、吸热及放热

考虑化学性质：水解性、空气中与CO2作用、分子式与试剂名一致（吸湿，风化）、氧化或还原、分解…

使用容量瓶时，用滴管加水至刻度线时，为何“滴管要从刻度线以上1cm处沿颈壁缓缓滴加纯水至溶液弯月面最低点恰好与标线相切”，而不是刻度线以下1cm处？

答提示：一是体积影响，二是溶质被带起，对浓度影响 实验二 称量练习

称量量具有几种？各用于什么范围？ 称量方法有几种？分别在哪方面使用？

称量量具使用的注意事项是什么？解释不能直接进行热物称量的缘由。

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