RNA逆转录

一． 实验用品

1.移液枪：200ul、20ul（PCR室已备） 2.枪头（进口带滤膜）：200ul、20ul 3.EP管：1.5ml（进口高压）

二． 试剂

1. Oligo (dT) primer 2. 10mM dNTP Mix

3. Rnase Inhibitor (40U/ul) 4. M-MLV RT Buffer 5. M-MLV (200U/ul) 6. DEPC水

三． RNA变性（200ul PCR管）

Totol RNA 2 ug DEPC水 ul 总体积 15.5ul

将上述溶液吹打均匀，置70℃保温5min，使RNA变性。随后立即冰上致冷，以防RNA变性。

四．配制体系

Oligo (dT) primer 2ul 10mM dNTP Mix 1ul Rnase Inhibitor (40U/ul) 0.5ul M-MLV RT Buffer 5ul M-MLV (200U/ul) 1ul 总体积 9.5ul

五． 加样

1. 每管加入配好体系9.5ul，总体积25ul。 2. 37℃保温60min，随后72℃保温10min。 （二）RT-PCR:

TLR7 体系： β-actin体系： Rnasefree water： 7ul 7ul Pcr primer，10×conc 1ul 1ul Master mix，2×conc 10ul 10ul Cdna 2ul 2ul total volume 20ul