响
一、实验目的：
1、学习哺乳动物离体器官的灌流实验法。
2、观察消化道平滑肌自律性运动及药物温度的影响。
二、实验原理消 化道平滑肌和骨骼肌、心肌一样，也具有兴奋性、传导性和收缩性，有些也具有自律性。相比之下消化道平滑肌的兴奋性低，收缩慢，伸展性大，具有紧张性收缩， 对化学物质、温度变化及牵张刺激较敏感等特性。小肠离体后，置于适宜的溶液中，观察其收缩活动及环境变化的影响，观察分析上述生理特性。三、实验材料——1、实验动物：家兔2、 器械、药品：电热恒温水浴锅、浴槽、张力换能器(量程为25g以下)、BL-410生物记录系统、L型通气管、道氏袋、注射器、培养皿、温度计、烧杯、螺 丝夹、三维调节器、台氏液、0.01%去甲肾上腺素、0.01%乙酰胆碱、1mol/L NaOH溶液、lmol/L HCl溶液、2%CaCl2溶液。四、实验方法和步骤1、标本制备流程：①击昏家兔：
用木槌猛击兔头枕部，使其昏迷。②剖开腹腔快速取出肠管：
立即剖开腹腔，找出胃幽门与十二指肠交界处，快速取长20~30cm的肠管，先将与该肠管相连的肠系膜沿肠缘剪去，置于供氧台氏液中轻轻漂洗，把肠内容物基本洗净。③制作离体肠标本：
将肠管分成数段，每段长2-3cm，两端各系一条线，保存于供氧的38℃左右的台氏液中
2、仪器安装与调试实验安装（如图）：
恒温水浴锅控制加热，恒温工作点定在38℃。将充满氧气的道氏袋与通气钩相连接，将肠段一端系在通气管钩上，另一端与张力换能器相连。控制通气量，使氧气从通气管前端呈单个而不是成串逸出。
仪 器调试：BL-410系统的使用，选择“实验项目”中的“消化实验”选中“消化道平滑肌生理特性”。相关参数设置的参考值：时间常数
t→DC，高频滤波 F→30Hz，显速→4.00s/div，增益→100g。用鼠标左键单击工具条上的“开始”按钮，调节参数至波形幅度、密度适当，待收缩曲线稳定后，单 击记录按钮。
五、实验结果：
实验项目 收缩幅度 收缩节律
室温台氏液→37度
1/10万Ach2滴 ↑ ↓
1/万 Adr2滴 ↑ ↓
1/万 Atr2滴 ↑ ↓
2min后加Ach2滴 ↑ ↓
换25度台氏液继之→42度42度→
六、观察项目现象及解释
1．待标本稳定后，记录小肠平滑肌收缩的对照曲线。
2．乙酰胆碱的作用 用滴管吸入0.01%乙酰胆碱向灌流浴槽内滴1~2滴。观察到明显效应后，立即从排水管放出浴槽内含乙酰胆碱的台氏液，加入新鲜温台氏液，由此反复3次，以洗涤或稀释残留的乙酰胆碱，使之达到无效浓度，待小肠运动恢复后进行下一项。
3．肾上腺素的作用 按上述方法将0.01%肾上腺素加入浴槽内1~2滴，观察小肠运动的反应。当效果明显后，立即更换台氏液。
4．氯化钙的作用 加2%CaC12溶液2~3滴入灌流浴槽内，观察其反应，效果明显后迅速冲洗。
5．盐酸的作用 加1~2滴1mol/L HCl溶液入浴槽内，观察其反应。
6．氢氧化钠的作用 在(5)基础上加等容量的1mol/L NaOH溶液入浴槽内，观察其反应。按上述方法更换台氏液，反复冲洗。
7．温度的影响 将浴槽内台氏液放出，注入25℃台氏液，观察平滑肌收缩有何改变，当效应明显后再换入38℃台氏液，持续一段时间后，再换入42℃台氏液，观察收缩活动的变化（亦可根据室温的具体情况选做其中的一项）。七、注意事项——1. 实验过程中必须保证标本的供氧(通气)及浴槽内台氏液的恒温(38℃)，以维持标本活性。
2. 灌流浴槽内的液面高度应保持恒定。
3. 放大器零点调好后不要再移动旋钮，以免影响基线。
4. 上述各药液加入的量系参考数据，效果不明显者可以添加。
5. 每次实验效果明显后立即放掉含药液的台氏液，并冲洗多次，以免平滑肌出现不可逆反应。
6．各项处理必须有处理标记。八、相关知识
家兔小肠平滑肌以胃幽门与十二指肠交界处的肠管活动最好，对生物化学因素也较敏感，所以选取用此处肠管作标本。九、作业——
1．从记录曲线中观察比较小肠平滑肌与心肌、骨骼肌的收缩特性有何不同?说明其原理。
2．通过观察分析记录曲线变化，阐明各项处理引起的收缩频率、收缩强度和张力变化的机理。
3．结合本章的实验内容，谈谈观察与思维在实验研究中作用与体会。十、实验讨论：
1、 正常情况下，我们观察到离体小肠平滑肌在台氏液中可以自动地、缓慢地收缩，但其节律性很不规则。小肠平滑肌自律性产生的离子基础尚未完全清楚，目前认为， 它的产生可能与细胞膜上生电性钠泵的活动具有波动性有关，当钠泵的活动暂时受抑制时，膜便发生去极化；当钠泵活动恢复时，膜的极化加强，膜电位便又回到原 来的水平。
2、在浴槽中加入0.01%乙酰胆碱 （Ach ）2滴（约0.2ml）后，可见离体肠管活动增强，描记曲线出现收缩频率变快，幅度增加。出现上述现象的机理，目前认为与消化道平滑肌细胞产生动作电位的 离子基础是Ca2+的内流有关。乙酰胆碱可与肌膜上的M受体结合，使得两类通道开放：一类为电位敏感性Ca2+专用通道，另一类为特异性受体活化Ca2+专用通道。前一类通道对Ach敏感，小剂量Ach即引起开放；后一类通道对Ach相对不敏感，只有大剂量Ach才会引起开放。这两类通道开放都使得肌浆中 Ca2+增高，进而激活肌纤蛋白—肌凝蛋白—ATP系统，
使平滑肌收缩，肌张力增加。
3、 在浴槽中加入0.01%肾上腺素2滴（约0.2ml）后，可见离体肠管活动减弱，描记曲线出现收缩频率变慢，幅度减小以及基线下移。出现上述现象的机理， 目前认为与肠肌细胞膜上存在α和β两中受体，α受体又分为α抑制型受体和α兴奋型受体有关。肾上腺素作用于α抑制型受体，引起肠肌膜上一种特异性受体活 化，使K+外流增多，细胞膜发生超极化，肠肌兴奋性降低，肌张力下降。同时，肾上腺素还作用于β受体，①它的激活引起肠肌细胞膜中的cAMP合成增 多，cAMP激活肠肌膜及肌浆网上Ca2+泵活动，使肌浆中Ca2+浓度降低，亦使肌张力降低；②β受体激活后还促使K+及Ca2+外流增加，加速膜的超极化，促进了肠肌肌张力的减低。
4、在浴槽中加入2%氯化钙溶液2滴后，离体肠管活动增强，描记曲线出现收缩幅度增加。这是因为加入氯化钙后，细胞外液Ca2+浓度升高，则Ca2+内流增加，使得细胞内液中Ca2+浓度升高，Ca2+与钙调蛋白结合增加，促进了横桥的激活。因而收缩力增加。
5、 在浴槽中加入1mol/L盐酸溶液2滴后，离体肠管活动减弱，描记曲线出现收缩幅度降低，频率变慢。出现这一现象，目前认为其原因在于：①细胞外H+升高 时，Ca2+通道的活性受到抑制，使得Ca2+内流减少。② H+升高能干扰肌肉的代谢和肌丝滑行的生化过程： H+能与Ca2+竞争钙调蛋白的结合位点而使肌球蛋白ATP酶活性降低（近期有理论认为是直接抑制作用而非竞争作用）；使肌原纤维对Ca2+的敏感性和 Ca2+从肌质网的释放量减少。
6、在加盐酸使平滑肌收缩减弱的基础上，再加2滴NaOH于浴槽
中，则肠管活动出现相反的情况，即肠管活动增强。原因在于NaOH可以中和H+，改变了细胞外液的PH值，PH过高、过低，收缩幅度及张力都会降低，最适PH时收缩效果最好。
7、 浸浴小肠肠管的台氏液温度以38℃~40℃为宜，低于或高于这个温度，都会影响结果。因为肠管平滑肌对温度改变极为敏感，当温度降到30℃以下时，由于代谢水平的降低，兴奋性减弱，可出现收缩曲线基线下移，频率变慢，收缩幅度变小。有时可能会见到基线先上移后下降的现象。这是因为降温本身对肠管是一种刺激，也可短暂地加强代谢活动，所以肌张力升高。当温度高于40℃时，由于酶活性提高，各离子通道活性增加，使得基线上移，收缩频率增高，幅度增加。当然， 如果台氏液温度过高（50℃以上），可因蛋白变性，使肠管收缩功能消失。结论：
1、消化道平滑肌具有自律性，但其收缩缓慢，节律性不规则。
2、消化道平滑肌具有一定的紧张性。
3、消化道平滑肌的活动易受温度、PH值及其它化学因素、药物因素的影响。
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