高氧暴露抑制新生小鼠肺血管内皮细胞Sox17的表达

・４６２・生堡垦芒堕芏苤查！！！ｉ生！旦箜！！鲞筮！塑￡！也！！！！ｉ！型Ｍ！ｉ：！塑：！！！！：№！：！！：堕！：！实验研究高氧暴露抑制新生小鼠肺血管内皮细胞Ｓｏｘ１７的表达朱建幸夏红萍王利张凯【摘要】发生机制。目的方法观察高氧暴露对新生小鼠肺组织Ｓｏｘｌ７表达的影响，探讨肺血管发育受阻的生后６ｈ内的健康新生Ｃ５７ＢＩ／６Ｊ小鼠共３２只，随机分为高氧组和空气组，每组１６只。高氧组小鼠置于氧体积分数为８５％的氧舱中。分别于生后７和１４ｄ，每组各取８只小鼠，取肺组织行形态学检测，并计算从呼吸性细支气管中心至最近纤维隔或胸膜直线上的肺泡数，即辐射状肺泡计数（ｒａｄｉａｌａｌｖｅｏｌａｒｃｏｕｎｔｓ，ＲＡＣ）。免疫组织化学染色检测肺血管Ｓｏｘｌ７蛋白表达。与生后７ｄ比较，空气组小鼠生后１４ｄ的肺组织结构日逆转录聚合酶链反应技术检测肺组织中Ｓｏｘｌ７ｍＲＮＡ的表达。蛋白质印迹技术检测Ｓｏｘｌ７蛋白含量。统计学方法采用独立样本ｔ检验。结果趋成熟，肺泡数量增加，大小均一，肺泡间隔逐渐变薄；而高氧组小鼠生后１４ｄ肺泡数量增加较缓慢，肺泡结构简单化，大小不一。Ｓｏｘｌ７蛋白主要表达在肺动脉、肺静脉和肺泡毛细血管内皮，以及肺泡上皮细胞。生后７和１４ｄ时，高氧组ＲＡＣ值均低于空气组『分别为（３．７±Ｏ．７）与（５．０±０．８），（５．３±０．６）与（８．３±Ｏ．９）个１，差异均有统计学意义（ｔ值分别为３．０５７和８．１４８，Ｐ值均＜Ｏ．０１）。生后７和１４ｄ，高氧组Ｓｏｘｌ７ｍＲＮＡ水平均低于空气组（分别为０．６２±０．１０与０．８８４－＿０．１ｌ，０．４４±０．０６与Ｏ．９０±０．１５），差异均有统计学意义（ｔ值分别为３．６０７和６．９２６，Ｐ值均＜０．０１）。生后７ｄ和１４ｄ，高氧组Ｓｏｘｌ７蛋白含量也低于空气组（分别为Ｏ．３２±０．０４与０．７６±０．０４，ｏ．３６±Ｏ．０７与０．９６±Ｏ．０６），差异均有统计学意义（ｔ值分别为３．１０２和８．４２ｌ，Ｐ值均＜０．０１）。结论高氧可能通过抑制肺组织Ｓｏｘｌ７的表达，从而导致肺血管发育不良。【关键词】支气管肺发育不良；ＳｏｘＦ转录因子类；内皮，血管；动物，新生；小鼠ＥｘｐｏｓｕｒｅｏｆｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｘｙｇｅｎｉｎｈｉｂｉｔｓＳｏｘｌ７ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｏｆｎｅｏｎａｔａｌｍｉｃｅｌｕｎｇｓＷａｎｇＬｉ，ＺｈａｎｇＫａｉ，ＺｈｕＪｉａｎｘｉｎｇ，ＸｉａＨｏｎｇｐｉｎｇ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｏｎａｔｏｌｏｇｙ，ＸｉｎｈｕａＨｏｓｐｉｔａｌＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏＴｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０００９２，ＣｈｉｎａＣｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＸｉａＨｏｎｇｐｉｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｘｉａｈｐ＠ｙａｈｏｏ．ＣｏｒｎＴｏ【Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖａｓｃｕｌａｒｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｘｙｇｅｎｅｘｐｏｓｕｒｅｏｎｔｈｅＳｏｘｌ７ｏｆｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｏｆｎｅｏｎａｔａｌｍｉｃｅｌｕｎｇｓ，ａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｂｌｏｃｋｅｄｌｕｎｇＴｈｉｒｔｙｔｗｏｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．ＭｅｔｈｏｄｓＣ５７８１／６Ｊｎｅｗｂｏｒｎｍｉｃｅｗｉｔｈｉｎｓｉｘｈｏｕｒｓａｆｔｅｒｂｉｒｔｈｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙａｉｒｄｉｖｉｄｅｄｔｏｈｙｐｅｒｏｘｉａｏｘｙｇｅｎ．Ｅｉｇｈｔｇｒｏｕｐ（ｎ＝１６）ａｎｄｒｏｏｍｇｒｏｕｐ（ｎ＝１６）．Ｍｉｃｅｏｆｈｙｐｅｒｏｘｉａｇｒｏｕｐｗｅｒｅｅｘｐｏｓｅｄｔｏ８５％ｍｉｃｅｏｆｅｉｔｈｅｒｇｒｏｕｐｗｅｒｅｓａｃｒｉｆｉｃｅｄａｔ７ａｎｄ１４ｄａｙｓａｆｔｅｒｂｉｒｔｈｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｌｕｎｇｏｎｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｃａｌｃｕｌａｔｅｒａｄｉａｌａｌｖｅｏｌａｒｃｏｕｎｔｓ（ＲＡＣ），ｗｈｉｃｈｉｓｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆａｌｖｅｏｌｉｔｈｅｃｅｎｔｅｒｏｆｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｂｒｏｎｃｈｉｏｌｅｓｔｏｔｈｅｎｅａｒｅｓｔｖｅｓｓｅｌｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｔｈｅｓｔｒａｉｇｈｔｌｉｎｅｆｒｏｍｆｉｂｒｏｕｓｓｅｐｔａｏｒｔｈｅｐｌｅｕｒａ．Ｓｏｘ１７ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈｅｒｅｖｅｒｓｅｐｕｌｍｏｎａｒｙｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｓｏｘ１７ｍＲＮＡｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｗａｓｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ．Ｓｏｘｌ７ｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＲｅｓｕｌｔｓＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，Ｔｗｏｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｓａｍｐｌｅｓｆ—ｔｅｓｔｍａｔｕｒｅｄｗｉｔｈｍｏｒｅｕｓｅｄｆｏｒｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｄａｙ７，ｔｈｅｌｕｎｇｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｎｏｎｕｎｉｆｏｒｍｅｄａｌｖｅｏｔｉａｎｄｔｈｅｓｅｐｔａｓｂｅｃａｍｅｔｈｉｎｎｅｒｓｌｏｗｌｙｗｉｔｈｏｎｄａｙｔ４ｉｎｒｏｏｍａｉｒｇｒｏｕｐ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｌｕｎｇｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄｄａｙ１４ｉｎｈｙｐｅｒｏｘｉａｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄａｎｄｎｏｎ—ｕｎｉｆｏｒｍｅｄａｌｖｅｏｌｉｇｒｏｕｐ．ＴｈｅＳｏｘｌ７ｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｐｏｓｉｔｉｖｅａｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｏｆｐｕｌｍｏｎａｒｙａｒｔｅｒｉｅｓ，ｖｅｉｎｓａｎｄａｌｖｅｏｌａｒｃａｐｉｌｌａｒｙｓ，ａｓｗｅｌｌｔｈｅａｌｖｅｏｌａｒｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ．ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００７—９４０８．２０１５．０６．０１５基金项且：国家自然科学基金（８１２００４５８）；上海市卫生局科研课题（２０１１４１３１）作者单位：２０００９２上海交通大学医学院附属新华医院新生儿科通信作者：夏红萍，Ｅｍａｉｌ：ｘｉａｈｐ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ万方数据主堡国亡匡堂盘查！！！！生ｉ旦箜！！鲞箜！塑垒！也！！！堕！型Ｍ！虫！婴：！！！！：№！：！！：盟！：！ＴｈｅＲＡＣｏｎｄａｙ７ａｎｄｄａｙ１４ｉｎＶＳｈｙｐｅｒｏｘｉａｇｒｏｕｐｗｅｒｅｂｏｔｈｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｒｏｏｍａｉｒｇｒｏｕｐｒ３．７±０．７ｏｎＶＳ５．０±０．８，５．３±０．６８．３±０．９，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔ＝－３．０５７ａｎｄ８．１４８，ｂｏｔｈＰ＜０．０１）．Ｓｏｘｌ７ｍＲＮＡｒｏｏｍａｉｒｇｒｏｕｐ（Ｏ．６２±０．１０ｏｎＶＳｄａｙ７ａｎｄｄａｙ１４ｉｎｈｙｐｅｒｏｘｉａｇｒｏｕｐｗｅｒｅｂｏｔｈｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎＶＳＯ．８８±０．１１，０．４４±０．０６ｉｎ０．９０±０．１５，ｔ＝３．６０７ａｎｄ６．９２６，ｂｏｔｈＰ＜０．０１）．Ｓｏｘｌ７ｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌｂｏｔｈｌｏｗｅｒｅｄｔｈａｎｔｈａｔｉｎｒｏｏｍａｉｒｇｒｏｕｐｆ０．３２±０．０４Ｐ＜Ｏ．０１）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＥｘｐｏｓｕｒｅｏｆＶＳｄａｙ７ａｎｄｄａｙ１４ＶＳｈｙｐｅｒｏｘｉａｇｒｏｕｐｗｅｒｅ０．７６±０．０４，０．３６±０．０７０．９６±０．０６．ｔ＝－３．１０２ａｎｄｃａｕｓｅ８．４２１，ｂｏｔｈｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｏｘｙｇｅｎｍａｙｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｏｆｌｕｎｇｖａｓｃｕｌａｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇＳｏｘｌ７ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｌｕｎｇｓｏｆｎｅｏｎａｔａｌｍｉｃｅ．ｗｏｒｄｓ【Ｋｅｙ１Ｂｒｏｎｃｈｏｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｙｓｐｌａｓｉａ；ＳｏｘＦｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｓ；Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ．ｖａｓｃｕｌａｒ；Ａｎｉｍａｌｓ，ｎｅｗｂｏｒｎ；Ｍｉｃｅ支气管肺发育不良（ｂｒｏｎｃｈｏｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｙｓｐｌａｓｉａ，ＢＰＤ）是早产儿最常见的一种慢性肺部疾病。重症ＢＰＤ患儿的病死率可达３０％～４０％，存活者常有慢性肺功能与气体交换异常，严重影响患儿生长发育及生活质量［ｑｏＢＰＤ的病理改变以肺泡和肺血管发育成熟障碍为特征【２］。目前，越来越多的证据表明，肺血管的形成和成熟对肺泡发育及生后肺泡结构的维持都有重要作用，肺血管发育成熟受阻可能在ＢＰＤ发病中占据重要位置【３】。Ｓｏｘｌ７基因属于Ｓｏｘ转录因子家族，参与性别决定和分化、神经发生、软骨形成等一系列发育过程。Ｓｏｘ基因家族的保守基序高迁移率族蛋白盒（ｈｉｇｈｍｏｂｉｌｉｔｙｇｒｏｕｐ—ｂｏｘ，ＨＭＧ）可与ＤＮＡ序列特异结合，其编码的蛋白是重要的转录调控因子【４】。近年研究发现，用，Ｓｏｘｌ７可通过在心血管系统中的组织差异性表达，诱导心血管轴形成及原始心环结构发育【５】。关于高氧暴露后肺组织Ｓｏｘｌ７表达的变化，目前国内外尚未检索到相关的文献报道。本研究观察高氧暴露对新生小鼠肺组织Ｓｏｘｌ７表达的影响，探讨肺血管发育受阻的发生机制。材料与方法一、实验动物模型构建及分组生后６ｈ内的健康新生Ｃ５７ＢＩ／６Ｊ小鼠共３２只，由上海交通大学医学院附属新华医院动物实验室提供［动物许可证号：ＳＣＸＫ（沪）２０１３—００１６］，随机分为高氧组和空气组，每组１６只。高氧组小鼠置于氧体积分数为８５％的氧舱中，每天开箱约半小时用于添加饲料及更换垫料。２组的母鼠每天互换，以避免母鼠氧中毒影响哺乳质量。二、实验方法１．标本收集与处理：分别于生后７和１４ｄ，每组各取８只小鼠，３％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉。迅万方数据ｍＲＮＡ和蛋白含量。从主支气管注入４％多聚ｃｍＨ，Ｏ（１ｃｍＨ，Ｏ＝０．０９８ｋＰａ），维５ｍｉｎ。将左肺置于４％多聚甲醛固定液中４ｃＣ２．肺组织形态学检测：取左肺石蜡块，５恤ｍ（ｒａｄｉａｌａｌｖｅｏｌａｒｃｏｕｎｔｓ，ＲＡＣ），反映终末呼吸单３．免疫组织化学染色检测肺血管Ｓｏｘｌ７蛋白表ｈ；Ｃｒｕｚ公司）４ｃＣ过夜，ｒａｉｎ，加入生物素一ｍｉｎ，二氨基联４．逆转录聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｍＲＮＡＳＴＡＴ一６０（美国Ｔｅｌ—Ｔｅｓｔ公司）提ｕｌ，反应条件为９５ｃＣ１０ｍｉｎ，９５℃ｌＳ，速剪开胸腔，气管插管保持肺充气状态。用生理盐水通过肺主动脉冲洗肺血管内血液后，结扎右支气管，迅速切取右肺，保存于一８０℃冰箱，用于检测Ｓｏｘｌ７甲醛，压力２５持ｌ过夜，乙醇梯度脱水，常规石蜡包埋切片，用于检测肺组织形态学及Ｓｏｘｌ７蛋白表达情况。连续切片，ＨＥ染色，光镜下观察肺组织发育情况及病理改变。计算从呼吸性细支气管中心至最近纤维隔或胸膜直线上的肺泡数，即辐射状肺泡计数Ｓｏｘ转录因子在心血管系统的发育过程中起重要作位的肺泡数，衡量肺泡化程度【６］。每只小鼠取５张切片，每张切片取５个不同视野，取平均值。达：常规脱蜡、水化，１．７％过氧化氢去除内源性过氧化物酶；微波辐射抗原修复，４％马血清封闭２加入Ｓｏｘｌ７一抗（美国Ｓａｎｔａ加人生物素化二抗室温孵育３０辣根过氧化物酶复合物室温孵育３０苯胺（ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅ，ＤＡＢ）显色；核固红复染、脱水、封片。染色呈棕黄色颗粒为阳性。ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）技术检测肺组织中Ｓｏｘｌ７的表达：Ｓｏｘｌ７和Ｂ一肌动蛋白引物均由上海生工生物技术有限公司合成。取右上中肺叶，用总ＲＮＡ提取试剂ＲＮＡ取纯化组织中总ＲＮＡ。采用ＲＮＡ逆转录试剂盒（美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）将ＲＮＡ逆转录为ｃＤＮＡ。使用ＳｔｅｐＯｎｅＰｌｕｓ实时荧光定量ＰＣＲ仪（美国ＡＢＩ公司）进行ｃＤＮＡ扩增反应，采用ＴａｑＭａｎ基因表达分析法对ＰＣＲ扩增产物进行数据采集及分析，反应体系为２０・４６４・生堡国亡堡堂盘查垫！§生ｉ旦箜！！鲞箜！塑￡！垫！！！堕！坐丛！ｉ：！堑：！！！！：№！：！！：堕！：１６０℃２０Ｓ，反应共４０个循环。５．蛋白质印迹技术检测Ｓｏｘｌ７蛋白含量：采用含苯甲基磺酰氟的放射免疫沉淀（ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎａｓｓａｙ，ＲＩＰＡ）裂解液（美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司）提取右下肺组织总蛋白，聚氰基丙烯酸正丁酯比色法定量。取５０斗ｇ待测蛋白按序加样，聚丙烯酰胺凝胶电泳后转移至硝酸纤维膜上。５％脱脂牛奶室温下封闭２ｈ，加入Ｓｏｘｌ７单克隆抗体（１：３００），４℃孵育过夜，辣根过氧化物酶标记的二抗（１：１５００）常温孵育２ｈ，电化学发光，曝光ｌｍｉｎ。由ＣｈｅｍｉＤｏ－ｃＸＲＳ图像采集系统（美国Ｂｉｏ—Ｒａｄ公司）采集图像。以Ｂ一肌动蛋白（１：３０００）作为内参照。三、统计学分析采用ＳＰＳＳ１０．０统计软件。正态分布的计量资料以ｉ±Ｓ表示，组间比较采用独立样本ｔ检验。Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。结果一、肺组织病理学改变与生后７ｄ比较，空气组小鼠生后１４ｄ的肺组织结构日趋成熟，肺泡数量增加，大小均一，肺泡间隔逐渐变薄；而高氧组小鼠生后１４ｄ肺泡数量增加较缓慢，肺泡结构简单化，大小不一，见图１。生后７和１４ｄ时，高氧组ＲＡＣ值均低于空气组，差异有统计学意义。见表ｌ。二、肺组织Ｓｏｘｌ７蛋白定位及表达Ｓｏｘｌ７蛋白主要表达在肺动脉、肺静脉和肺泡毛细血管内皮，以及肺泡上皮细胞，见图２。生后７和１４ｄ，高氧组肺组织Ｓｏｘｌ７表达较空气组均明显减少，见图３。三、肺组织Ｓｏｘｌ７ｍＲＮＡ的表达生后７和１４ｄ，高氧组Ｓｏｘｌ７ｍＲＮＡ水平均低于空气组，差异有统计学意义。见表１。四、肺组织Ｓｏｘｌ７蛋白含量生后７和１４ｄ，高氧组Ｓｏｘｌ７蛋白含量均低于空气组，差异有统计学意义。见表ｌ和图４。讨论ＢＰＤ是发生于新生儿期的慢性肺部疾病，多见于长期氧疗和机械通气的早产儿。“新型”ＢＰＤ以肺泡及肺血管发育不良为主要特征Ⅲ。传统观念认为，肺血管的发育是被动的，随着气道生长而发育，万方数据一一空气组生后７一一图１空气组和高氧组小鼠肺组织病理改变（ＨＥ×２００）Ａ：ｄ：肺泡结构均～．大小一致；Ｂ：高氧组生后７ｄ：肺泡大小不均一，部分肺泡有融合现象；Ｃ：空气组生后１４ｄ：肺泡数目较７ｄ时明显增多，肺泡结构均一；Ｄ：高氧组生后１４ｄ：肺泡数量明显减少，肺泡结构简单化，大小不一一一．：；～：？≤莨。妻一＋７．广●、、Ｌ，．～≯立．’“≥：０Ｘ’号、，＿Ｉ、．、．．Ｉ≯：．。ｊ／；鼍々犍，：－Ｉ√ｊ’▲．．．．：ｊ，≯．名辩建羞《≤一砖参一藜麓空气组７ｄ高氧组７ｄ空气组１４ｄ高氧组１４ｄＳｏｘｌ７●—＿———■■—■●●——●ｐ一肌动蛋白＇●—，＇——，——－＇—■●图４蛋白质印迹技术检测空气组和高氧组小鼠肺组织Ｓｏｘｌ７蛋白含量生后７和１４ｄ，高氧组Ｓｏｘｌ７蛋白含量均低于空气组主堡国芒匿主苤查！！！！芏！旦箜！！鲞箜！塑￡！也！！幽！型丛四：！业：垫！！：№！：！！：丝！：ｉ表１２组小鼠生后７和１４ｄ时肺组织ＲＡＣ值、Ｓｏｘｌ７ｍＲＮＡ及蛋白含量比较（；±Ｓ）注：ＲＡＣ：辐射状肺泡计数（ｒａｄｉａｌａｌｖｅｏｌａｒｃｏｕｎｔｓ）但Ｍｅｒｒｉｔｔ等【８１２００９年发表的研究显示，正常的肺泡发育需要正常的肺微血管形成，血管生长促进了肺泡发育，血管的良好形成也有助于生后正常肺泡结构的维持。Ｂｈａｔｔ等ｐ１对ＢＰＤ死亡患儿肺组织的研究同样发现，发育不良的肺泡伴随肺微血管数量减少和形态变异，且血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）及其受体的表达也随之降低。在肺发育的小管期和囊泡期，阻断肺血管发育会造成肺泡发育障碍和肺组织结构发育不良ｐ】。末端肺组织和肺微血管的协调发育是肺泡正常发育的重要基础，可能因为肺微血管系统不仅可以为末端肺组织提供所需营养，还可以通过加强上皮细胞与内皮细胞之间的信息传递来促进肺泡发育Ｂ１。另外，肺微血管系统发育能有效地促进次级纵隔的形成，推进肺泡化进程［１０１０有研究提出，在肺发育的重要时期通过干扰血管发育的关键因子如ＶＥＧＦ等，可以干扰肺泡化进程的正常进行，进而导致肺发育不良【１１－１３］。本研究组２０１１年发表的研究显示，持续吸人高氧可导致新生大鼠肺组织血管生成素一ｌ表达减少及肺血管发育障碍¨４１。血管形成包括血管发生和血管生成２个过程。在血管形成过程中，需要多种血管因子参与。Ｓｏｘ因子属于转录因子超家族成员，其产物具有１个ＨＭＧ基序保守区，可通过与其他转录因子作用形成复合体，参与早期胚胎发育及诱导终末胚胎分化过程Ｈ】。在鼠胚胎研究中发现，ＳｏｘＦ亚族包括Ｓｏｘ７、Ｓｏｘｌ７及Ｓｏｘｌ８３个成员，均分布于血管内皮细胞中，对早期胚胎心脏生长及血管系统发生起到重要调控作用¨５１。ＳｏｘＩ７／Ｓｏｘｌ８双敲除小鼠胚胎发育至交配后８．７５ｄ时，先后出现前背主动脉、心脏前部及心内膜层异常融合等现象，提示Ｓｏｘ７、Ｓｏｘｌ７及Ｓｏｘｌ８可能通过时间或空间差异性表达，分别在胚胎或生后血管发育的不同时期起到主要调控作用¨６１。只有Ｓｏｘｌ７表达于肠道内胚层结构中，对后续内胚层脏器发育及分化进行调控…】。在鼠胚胎基因敲除研究中发现，Ｓｏｘｌ８无效突变小万方数据鼠可正常存活，但Ｓｏｘｌ７／Ｓｏｘｌ８同时突变的小鼠，多因血管化进程受阻而出现生后死亡或雌鼠不育现象［１６，１Ｓｌ。Ｓａｋａｍｏｔｏ等［５１通过血小板内皮黏附因子（ｐｌａｔｅｌｅｔｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ，脉腔扩张等血管发育受阻现象，并进一步导致心环结构畸形。近年有研究发现，Ｓｏｘ基因家族的一些成员与Ｗｎｔ／Ｂ—ｃａｔｅｎｉｎ信号通路关系密切［１９－２０］。另外，在心脏与血管发育过程中，ＳｏｘＦ亚族成员可以通过影响ＶＥＧＦ与胎肝激酶一１的表达，进而影响血管内皮细胞及心肌细胞的分化，而ＶＥＧＦ已被多数研究证实在肺血管发育过程中起到关键作用［２１１。关于高氧暴露对Ｓｏｘｌ７在新生小鼠肺组织中表达的影响，迄今国内外未检索到相关文献报道。本研究中，高氧暴露后１４ｄ，新生小鼠肺组织结构紊乱，肺泡数量减少，结构简单和囊泡化，与早产儿ＢＰＤ的病理表现相似。Ｓｏｘｌ７蛋白主要表达在肺血管内皮细胞，且在新生小鼠高氧暴露７和１４ｄ后，肺组织Ｓｏｘｌ７的ｍＲＮＡ和蛋白含量均明显降低，提示高氧可能通过抑制肺组织Ｓｏｘｌ７的表达，从而导致肺血管发育不良。对于高氧抑制肺血管Ｓｏｘｌ７表达的具体发生机制，以及是否能通过上调Ｓｏｘｌ７的表达而促进ＢＰＤ的血管发育，仍有待进一步研究。参考文献【１］ＭｃＬｅｏｄＡ，ＲｏｓｓＰ’ＭｉｔｃｈｅｌｌＳ，ｅｔａ１．Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｈｅａｌｔｈｉｎａｔｏｔａｌｖｅｒｙｌｏｗｂｉｒｔｈｗｅｉｇｈｔｃｏｈｏｒｔａｎｄｔｈｅｉｒｃｌａｓｓｒｏｏｍｃｏｎｔｒｏｌｓ［Ｊ］．ＡｒｃｈＤｉｓＣｈｉｌｄ，１９９６，７４（３）：１８８—１９４．［２】Ｔｈ６ｂａｕｄＢ，ＡｂｍａｎＳＨ．Ｂｒｏｎｃｈｏｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｙｓｐｌａｓｉａ：Ｗｈｅｒｅｈａｖｅａｌｌｔｈｅｖｅｓｓｅｌｓｇｏｎｅ？Ｒｏｌｅｓｏｆａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｓｉｎｃｈｒｏｎｉｃｌｕｎｇｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ】．ＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｒｉｔＣａｒｅＭｅａｌ，２００７，１７５（１０）：９７８—９８５．【３】ＳｔｅｎｍａｒｋＫＲ，ＡｂｍａｎＳＨ．Ｌｕｎｇｖａｓｃｕｌａｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｂｒｏｎｃｈｏｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｙｓｐｌａｓｉａ［Ｊ］，ＡｎｎａＲｅｖＰｈｙｓｉｏｌ，２００５，６７：６２３—６６１．【４］ＦｏｓｔｅｒＪＷ，Ｄｏｍｉｎｇｕｅｚ—ｓｔｅｇｌｉｃｈＭＡ，ＧｕｉｏｌｉＳ，ｅｔａｌ，ＣａｍｐｏｍｅｌｉｃＰＥＣＡＭ）血管染色研究心脏血管发育时发现，Ｓｏｘｌ７敲除小鼠可出现后背主动脉形成延迟、主静・４６６・主堡国亡匡堂苤查垫！！生！旦筮！！鲞笠！塑堡！垫！里！巫！型丛！ｉ：！塑：！！！！：塑！：！！：堕！：！ｄｙｓｐｌａｓｉａａｎｄａｕｔｏｓｏｍａｌＳＲＹ—ｒｅｌａｔｅｄｓｅｘｒｅｖｅｒｓａｌｃａｕｓｅｄｂｙｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｎａｎ２００９，１ｌ（１１）：９２７—９３０．［１４］ｇｅｎｅ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，１９９４，３７２（６５０６）：５２５—５３０．梁斐，朱建幸，夏红萍，等．高氧对新生大鼠肺血管发育及肺组织血管生成素１表达的影响［Ｊ】中华儿科杂志，２０１ｌ，４９（１１）：８３４—８３８．［５］ＳａｋａｍｏｔｏＹ，ＨａｒａＫ，Ｋａｎａｉ—ＡｚｕｍａＭ，ｅｔａ１．ＲｅｄｕｎｄａｎｔｒｏｌｅｓｏｆＳｏｘ１７ａｎｄＳｏｘ１８ｉｎｅａｒｌｙｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｍｏｕｓｅｅｍｂｒｙｏｓ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２００７，［１５］ＹｏｕｎｇＮ，ＨａｈｎＣＮ，ＰｏｈＡ，ｅｔａ１．ＥｆｆｅｃｔｏｆｄｉｓｒｕｐｔｅｄＳＯＸｌ８ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｆｕｎｃｔｉｏｎｏｎ３６０（３）：５３９—５４４．［６】ＢｅｔｚｔｏｏｌＰ’ＮｅｒｌｉｃｈＡ，ＢｕｓｓｌｅｒＪ，ｅｔａ１．Ｒａｄｉａｌａｌｖｅｏｌａｒｆｏｒｔｈｅｅｓｔｉｍａｔｉｏｎｏｆｆｅｔａｌｃｏｕｎｔａｓａｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈ，ｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．ＪＮａｔｌＣａｎｃｅｒｌｎｓｔ，２００６，ａｇｅ［Ｊ］．ＩｎｔＪＬｅｇａｌＭｅｄ，１９９７，［１６］ＳＨ．Ｂｒｏｎｃｈｏｐｕｌｍｏｎａｒｙ９８（１５１：１０６０—１０６７．ＭａｔｓｕｉＴ，Ｋａｎａｉ—ＡｚｕｍａＭ，ＨａｒａＫ，ｅｔａ１１０（２）：５２—５４１．Ｒｅｄｕｎｄａｎｔｒｏｌｅｓｏｆｉｎ【７］ＫｉｎｓｅｌｌａＪＰ，ＧｒｅｅｎｏｕｇｈＡ，ＡｂｍａｎＳｏｘｌ７ａｎｄＳｏｘｌ８ｉｎｐｏｓｔｎａｔａｌａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｍｉｃｅ［Ｊ］．ＪＣｅｌｌｄｙｓｐｌａｓｉａ［Ｊ］．Ｌａｎｃｅｔ，２００６，３６７（９５２０）：１４２１—１４３１．［８］ＭｅｒＳｃｉ，２００６，１１９（Ｐｔ１７）：３５１３［１７】Ｋａｎａｉ—Ａｚｕｍａｄｅｆｉｎｉｔｉｖｅ３５２６．ｒｉｔｔＴＡ，ＤｅｍｉｎｇＤＤ，ＢｏＹｎｔｏｎＢＲ．Ｔｈｅ”ｎｅｗ”Ｍ，ＫａｎａｉＹ，ＧａｄＪＭ，ｅｔａ１．ＤｅｐｌｅｔｉｏｎｏｆｉｎＳｏｘｌ７一ｎｕｌｌｍｕｔａｎｔｂｒｏｎｃｈｏｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｙｓｐｌａｓｉａ：ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓａｎｄｃｏｍｍｅｎｔａｒｙ［Ｊ］．ｇｕｔｅｎｄｏｄｅｒｍｍｉｃｅ［Ｊ】．ＳｅｍｉｎＦｅｔａｌＮｅｏｎａｔａｌＭｅｄ，２００９，１４（６）：３４５—３５７．ａＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００２，ｌ２９（１Ｏ）：２３６７—２３７９．ａｒｅ［９］９ＢｈａｔｔＡＪ，ＰｒｙｈｕｂｅｒＧＳ，ＨｕｙｃｋＨ，ｅｔ１．Ｄｉｓｒｕｐｔｅｄｐｕｌｍｏｎａｒｙ［１８］ＰｅｎｎｉｓｉＤ，ＢｏｗｌｅｓＪ，ＮａｇｙＡ，ｅｔａ１．Ｍｉｃｅｎｕｌｌｆｏｒｓｏｘｌ８ｖｉａｂｌｅａｎｄｄｉｓｐｌａｙａｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅａｎｄｄｅｃｒｅａｓｅｄｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，Ｆｉｔ—ｌ，ａｎｄＴＩＥ２ｉｎｈｕｍａｎｉｎｆａｎｔｓｄｙｉｎｇｗｉｔｈｂｒｏｎｃｈｏｐｕｌｍｏｎａｒｙｍｉｌｄｃｏａｔｄｅｆｅｃｔ［Ｊ］．ＭｏｌＣｅｌｌＢｉｏｌ，２０００，２０（２４）：９３３ｌ一９３３６．【１９】ＫｏｒｍｉｓｈＪＤ，ＳｉｎｎｅｒＤ，ＺｏｒｎＡＭ．ＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｆａｃｔｏｒｓａｎｄｂｅｔｗｅｅｎＳＯＸｄｙｓｐｌａｓｉａ［Ｊ】．ＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｒｉｔＣａｒｅＭｅｄ，２００１，１６４（１０Ｐｔ１９７ｌ一１９８０．１）：Ｗｎｔ／ｂｅｔａ—ｃａｔｅｎｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄ［１０］ＣｈａｒｉＮＳ，ＭｃＤｏｎｎｅｌｌＴＪ．ＴｈｅＳｏｎｉｃｈｅｄｇｅｈｏｇｓｉｇｎａｌｉｎｇｎｅｔｗｏｒｋｉｎｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ】．ＤｅｖＤｙｎ，２０１０，２３９（１）：５６—６８．【２０］ＴａｍａｓｈｉｒｏＤＡ，Ａｌａｒｃ６ｎＶＢ，ＭａｒｉｋａｗａＹＥｃｔｏｐｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｏｕｓｅＳｒｙｉｎｔｅｒｆｅｒｅｓｗｉｔｈｎｅｏｐｌａｓｉａ［Ｊ］．ＡｄｖＡｎａｔＰａｔｈｏｌ，２００７，１４（５）：３４４—３５２．Ｗｎｔ／ｂｅｔａ—ｃａｔｅｎｉｎｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｍｏｕｓｅｌｉｎｅｓ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ，周丽，李秋平，封志纯．肺微循环受损与支气管肺发育不良【Ｊ］．中华围产医学杂志，２０１３，１６（１０）：５９８—６０１．［１２］ＨｏｓｆｏｒｄＧＥ，ＯｌｓｏｎＤＭ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｈｙｐｅｒｏｘｉａｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ａｎｄＨＩＦ一２ａｌｐｈａｉｎｔｈｅｎｅｗｂｏｒｎＰｈｙｓｉｏｌＬｕｎｇＣｅｌｌＭｏｌｒａｔｏｎｅｍｂｒｙｏｎａｌｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌ２００８，１７８０（１２）：１３９５—１４０２．ＶＥＧＦ，ｉｔｓ［２１］ＷａｔＪＪ，ＷａｔＭＪ．Ｓｏｘ７ｉｎｖａｓｃｕｌａｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：ｒｅｖｉｅｗ，ｉｎｓｉｇｈｔｓａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｕｎｇ［Ｊ］．ＡｍＪｍｅｃｈａｎｉｓｍ［Ｊ］．ＩｎｔＪＤｅｖＢｉｏｌ，２０１４，５８（１）：ｌ一８．Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００３，２８５（１）：Ｌ１６１—１６８．［１３］冯海燕，陆爱珍，张晓波，等．高浓度氧对新生大鼠肺血管内皮生长因子及其受体表达的影响［Ｊ】．中国当代儿科杂志，（收稿日期：２０１５－０２—０２）（本文编辑：李醒）・启事・《中华围产医学杂志》２０１５年征订启事《中华围产医学杂志》是由中国科学技术协会主管、中华医学会主办、北京大学第一医院承办的中华医学会系列杂志之一。围产医学是产科和新生儿科密切合作共同研究的一个新学科。本刊１９９８年创刊，是我国围产医学领域唯一的一本学术期刊。本刊以“贯彻党和国家对卫生工作的方针及《中文核心期刊要目总览》。本刊也是中国学术期刊（光盘版）和ＷＨＯ西太区医学索引（ＷＰＲＩＭ）的收录期刊。２０ｌ５年在第四届《中国学术期刊评价研究报告（武大版）（２０１５—２０１６）》中被评为“ＲＣＣＳＥ中国核心学术期刊（Ａ一）”。在２０１４年版《中国科技期刊引证报告（核心版）》中，本刊影响因子为０．６８３；《中国科技期刊引证报告（扩刊版）》中，本刊影响因子为１．０６８。本刊２０１５年为月刊，铜版纸印刷，大１６开，每期增加至８０页。２０１５年每期定价２０元，全年２４０元，每月１６日政策，贯彻理论与实践、普及与提高相结合的方针，反映我国围产医学ｆ临床、科研工作的重大进展，促进国内外围产医学领域的学术交流”为办刊宗旨，反映基础、临床与预防医学和社会学等相关学科中有关围产医学的新理论、新技术，旨在为我国围产医学工作者提供一个学术交流、信息传递和了解国内外围产医学发展动态的窗口与平台。本刊主要栏目出版。国内外公开发行，邮发代号：８２—８８７。读者可到当地邮局订阅，或直接与编辑部联系，地址：北京市西城区西安门大街ｌ号，北京大学第一医院有述评、专家笔谈、论著、实验研究、综述、讲座、临床科研、病例报告、国外医学动态、标准・方案・指南等。《中华围产医学杂志》编辑部。邮编：１０００３４。咨询电话：０１０—６６５１本刊２０００年被收入国家科技部“中国科技论文统计源期刊（中国科技核心期刊）”、“中国核心期刊（遴选）数３５１９转８０２。电子信箱：ｚｈｏｎｇｈｕａｗｅｉｃｈａｎ＠１６３．ｃｏｒｎ。本刊编辑部本刊订阅方式也可通过本刊微信平台“ｚｈｗｃｙｘｚｚ”获得。据库”，２０ｌ１年起为月刊，２０１２年被收入北京大学图书馆万方数据高氧暴露抑制新生小鼠肺血管内皮细胞Sox17的表达

作者：作者单位：刊名：英文刊名：年，卷(期)：

王利， 张凯， 朱建幸， 夏红萍， Wang Li， Zhang Kai， Zhu Jianxing， Xia Hongping200092,上海交通大学医学院附属新华医院新生儿科中华围产医学杂志

Chinese Journal of Perinatal Medicine2015,18(6)

引用本文格式：王利.张凯.朱建幸.夏红萍.Wang Li.Zhang Kai.Zhu Jianxing.Xia Hongping 高氧暴露抑制新生小鼠肺血管内皮细胞Sox17的表达[期刊论文]-中华围产医学杂志 2015(6)