(1)清洗玻璃板:用洗涤剂反复洗涤玻璃板,自来水冲洗干净后用去离子水浸泡后冲洗,然后晾干,最后用无水乙醇擦洗几次。
(2)擦拭硅烷:干燥后,短玻璃板用剥离硅烷擦拭均匀(非常重要),长玻璃板用亲和硅烷擦拭均匀,干燥后,最后分别用无水乙醇擦去多余硅烷。两块玻璃板一定不要放在一起,以防止交叉污染。
(3)制胶:安装好制胶板,缓缓灌入6%PAGE序列分析胶溶液。倒插鲨鱼齿梳子,用夹子夹住玻璃板,聚合1 h以上,胶聚合好后就可以使用了,也可以放4℃保存备用。
(4)预电泳:将聚合好胶的玻璃板安装在电泳槽上,拧紧卡槽,防止漏液,在上下电泳槽中加入足量的1×TBE缓冲液,拔出梳子,然后顺插鲨鱼齿梳子形成点样孔,用枪头反复冲洗点样孔后,1000V恒电压预电泳30 min,并清除产生的气泡。
(5)上样与电泳:电泳之前,将选择性扩增后的样品加入等体积上样缓冲液(98%甲酰胺,10 mmol/L pH8.0的EDTA,0.25%溴酚蓝,0.25%二甲苯氰)充分混合,94℃变性3 min,立刻转移到冰中冰浴,每个样品取6μl点样。上样前要注意洗净点样孔的碎胶,上样后2000V恒电压电泳3 h左右。
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