影印平板法理论(实验步骤)

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实验开始时,首先将含有丰富菌落的母种培养皿放置在一个被灭菌丝绒布覆盖的木质圆柱印章上,目的是让印章吸附平板上的菌落。接着,将这个“印章”转移至不同的选择性培养基平板上,每一步都需保证无菌操作。经过培养后,对各平板上的菌落进行对比分析,挑选出那些在特定条件下表现出变异特性的菌株。据报道,这种方法能有效地将母平板上10%-20%的细菌转移到丝绒布上,并能通过“印章”进行多步接种,最多可接种到8个子培养皿中。

具体操作步骤如下:首先,从待测的菌悬液中选择适当的浓度,将其均匀地涂布在预先准备好的平板上,确保每个平板上的菌落数量控制在50至300个之间,形成母平板。接着,用一块消毒的丝绒固定在比平板直径稍小的圆柱形木块上,作为接种工具,即“印章”。将已生长菌落的母平板倒置在丝绒印章上,轻轻按压,使菌落附着。然后,印章在含有选择性培养基的平板上再次轻轻按压,形成菌落印记。培养后,通过比较影印平板与母平板上菌落的生长状况,可以识别出在特定条件下产生的突变型菌落。

影印平板法最初是为验证微生物的抗药性突变是否自发产生并于环境因素而设计的实验,现今,它已经广泛应用于营养缺陷型筛选和抗药性菌株的筛选等多个研究领域中,为微生物学研究提供了有力的实验手段。

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